CircRNAs調(diào)節(jié)基因表達(dá)，參與多種生物學(xué)和病理過程。然而，關(guān)于特定circRNA對T輔助細(xì)胞17 (Th17)分化和相關(guān)自身免疫性疾病，如多發(fā)性硬化癥(MS)的影響知之甚少。本文使用轉(zhuǎn)錄組微陣列分析實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的不同階段，確定了與EAE進(jìn)展相關(guān)的circINPP4B，該circINPP4B在EAE小鼠Th17細(xì)胞和Th17體外分化過程中表達(dá)上調(diào)。該文于2021年8月發(fā)表于《Cellular Molecular Immunology》IF:11.53雜志上。
通過芯片分析鑒定與EAE相關(guān)的circRNA作者構(gòu)建了EAE小鼠模型，通過EAE的臨床特征得分分為4組，EAE的染色表現(xiàn)為脊髓炎癥浸潤和脫髓鞘加重。取不同鑒定分?jǐn)?shù)(0、1、2、3、4)的EAE小鼠外周血CD4+淋巴細(xì)胞進(jìn)行芯片檢測，獲得差異表達(dá)的circRNA，其中circRNA-3998在EAE得分高的組中高表達(dá)，提示可能與EAE進(jìn)展有關(guān)。 課題外包服務(wù)找英拜放心安心。陜西課題分子生物學(xué)實驗
為了探索 HIF1α促進(jìn)circMYH9表達(dá)的分子機(jī)制，測量了 MYH9 前體 mRNA 的表達(dá)。SG或Glu饑餓增加了MYH9的前體mRNA 水平，HIF1α敲低降低了缺乏SG或Glu的CRC細(xì)胞中的MYH9前體 mRNA 水平。這些結(jié)果表明HIF1α在轉(zhuǎn)錄水平上促進(jìn) MYH9 前體 mRNA，這進(jìn)一步增加了circMYH9。使用 JASPAR 搜索了MYH9啟動子中的HIF1α結(jié)合位點(diǎn)和基序。確定了兩個**可能的HIF1α結(jié)合位點(diǎn)。ChIP-qPCR 證明 HIF1α與HCT116細(xì)胞中MYH9 啟動子的兩個HBS位點(diǎn)結(jié)合。為了證實HIF1α通過HBS促進(jìn)MYH9表達(dá)，構(gòu)建了包含全長MYH9啟動子區(qū)域和HBS缺失的circMYH9啟動子區(qū)域的熒光素酶報告基因。HBS1或HBS2的缺失部分消除了HIF1α敲低或過表達(dá)對MYH9 熒光素酶報告基因活性的抑制或促進(jìn)，而HBS1和HBS2的缺失則完全消除了 HIF1α shRNA 或質(zhì)粒對MYH9熒光素酶報告基因活性的影響。這些數(shù)據(jù)表明，HBS區(qū)域?qū)τ赟G或Glu剝奪下的HIF1α依賴性circMYH9轉(zhuǎn)錄調(diào)控至關(guān)重要。北京課題國家自然科學(xué)基金Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。
綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)表明TYRO3抑制**細(xì)胞鐵死亡，并通過降低M1/M2比值支持原瘤TME。此外，**細(xì)胞可能利用鄰近瀕死細(xì)胞的Pros1“吃我”信號，通過***TYRO3，抑制鐵死亡，促進(jìn)**細(xì)胞的存活。
4.抑制TYRO3可增強(qiáng)鐵死亡，使耐藥**對抗mPD-1***敏感
TYRO3抑制劑LDC1267處理4T1-R細(xì)胞，有效降低了TYRO3磷酸化、，增加**細(xì)胞死亡和脂質(zhì)過氧化，而在Tyro3-/-細(xì)胞中不存在該作用，表明抑制TYRO3可增強(qiáng)**細(xì)胞鐵死亡。荷4T1-R**的小鼠腹腔注射抗mPD-1、LDC1267或其組合，聯(lián)合給藥***降低了**生長，并延長小鼠生存期。此外，腎功能和肝功能的生化指標(biāo)均在其正常范圍內(nèi)，證明聯(lián)合給藥在動物中耐受良好。這些結(jié)果表明靶向TYRO3聯(lián)合抗PD-1有可能克服抗PD-1/PD-L1耐藥性，且毒性水平相對較低。
結(jié)論：TYRO3抑制**細(xì)胞鐵死亡，通過促進(jìn)M1到M2極化有利于原**TME，在抗PD-1***期間促進(jìn)**存活。
組織學(xué)分析表明，白樺素可以減少白色脂肪細(xì)胞組織（WAT）和棕色脂肪細(xì)胞組織（BAT）的細(xì)胞大小，而洛伐他汀*可以減少棕色脂肪細(xì)胞的大小（圖5G）。 油紅色O切片染色表明，與用WD喂養(yǎng)的對照***小鼠的肝臟相比，洛伐他汀或白樺素處理的小鼠的肝臟具有較低的脂質(zhì)蓄積（圖5G）。這與洛伐他汀和白樺素降低肝脂質(zhì)含量的先前數(shù)據(jù)一致（圖5E和5F）。
5、白樺素可以改善小鼠的胰島素抵抗
由于白樺素可降低血清和組織中的脂質(zhì)水平，因此接下來研究了白樺素是否可改善體內(nèi)胰島素抵抗。與進(jìn)食chow糧的小鼠相比，由WD喂養(yǎng)的小鼠表現(xiàn)出葡萄糖受損和胰島素耐受性。WD喂養(yǎng)的小鼠的白樺素或洛伐他汀***可顯著改善葡萄糖耐量和胰島素抵抗（圖6A-6D）。此外，WD喂養(yǎng)的小鼠的空腹血糖和胰島素升高通過白樺素的施用而被顯著降低，但洛伐他汀卻沒有（圖6E和6F）?？傮w而言，這些數(shù)據(jù)表明，白樺素可改善小鼠的胰島素抵抗。 英拜生物對整體實驗實施的全局把控。
CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉(zhuǎn)錄
為了探索circACTN4的分子機(jī)制，首先進(jìn)行了pull down和質(zhì)譜分析circACTN4結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測進(jìn)一步證實 FUBP1 可以通過qRT-PCR與BC細(xì)胞中的內(nèi)源性circACTN4 特異性結(jié)合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細(xì)胞核中。但是circACTN4 的上調(diào)和敲低并沒有改變 FUBP1的表達(dá)水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調(diào)控。ChIP-PCR測定證實FUBP1與BC細(xì)胞中MYC啟動子結(jié)合。構(gòu)建了 FUBP1 和 FIR 過表達(dá)和敲低質(zhì)粒。通過qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡確定轉(zhuǎn)染效率。qRT-PCR和WB的結(jié)果表明，F(xiàn)UBP1的上調(diào)或下調(diào)分別顯著增加或降低了BC細(xì)胞中MYC的表達(dá)水平。此外， qRT-PCR發(fā)現(xiàn)FUBP1在BC組織中的表達(dá)明顯高于鄰近正常組織中的表達(dá)。Pearson相關(guān)分析表明circACTN4的水平與BC組織中FUBP1的表達(dá)呈正相關(guān)。 了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。陜西課題分子生物學(xué)實驗
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7）腎小管細(xì)胞來源的外泌體miR-21通過PTEN/Akt通路介導(dǎo)體外成纖維細(xì)胞***為了進(jìn)一步證實miR-21在PTEN中的作用，NRK-49F細(xì)胞在接受NRK-52E遞送的外泌體之前，先用PTENsiRNA處理，與si-NC組相比，PTENmRNA明顯受到抑制。CCK-8和PTEN的westernblot表達(dá))表明，不經(jīng)外泌體干預(yù)的siPTEN轉(zhuǎn)染***促進(jìn)了NRK-49F的增殖。在外泌體干預(yù)組中，單獨(dú)轉(zhuǎn)染miR-21inhibitor可抑制NRK-49F增殖，同時轉(zhuǎn)染siPTEN后明顯逆轉(zhuǎn)。免疫熒光染色顯示，轉(zhuǎn)染siPTEN后，NRK-49F細(xì)胞中Col-I、纖連蛋白和α-SMA表達(dá)明顯增加。在外泌體干預(yù)組中，單獨(dú)轉(zhuǎn)染miR-21inhibitor可抑制上述指標(biāo)，同時轉(zhuǎn)染siPTEN后則明顯逆轉(zhuǎn)。westernblot檢測通路相關(guān)蛋白PTEN和p-Akt。未經(jīng)外泌體干預(yù)的siPTEN轉(zhuǎn)染可***抑制PTEN，但加速p-Akt。在外泌體干預(yù)組中，單獨(dú)轉(zhuǎn)染miR-21inhibitor可加速PTEN并抑制p-Akt，但與siPTEN共轉(zhuǎn)染后這種作用被逆轉(zhuǎn)。上述結(jié)果表明，腎小管細(xì)胞來源的外泌體miR-21可以通過PTEN/Akt途徑介導(dǎo)成纖維細(xì)胞的***。陜西課題分子生物學(xué)實驗
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