總的來說，在處理與脂質(zhì)代謝失調(diào)相關的壓力時，細胞如何上調(diào)GPX4軸的活性和/或減少對GPX4的依賴以適應這種壓力，這有增加細胞轉(zhuǎn)移能力的附帶責任。急性27HC 處理通過干擾SREBPs和LXR信號傳導擾亂脂質(zhì)代謝，從而導致了細胞生長和遷移的抑制。*細胞可以適應由慢性27HC處理帶來的代謝壓力。存活的細胞(27HC抵抗細胞)增加脂質(zhì)攝取，并通過上調(diào)抵抗脂質(zhì)氧化應激過程的活性來調(diào)節(jié)與此活動相關的代謝應激，一種增強**生長和轉(zhuǎn)移能力的活動。根據(jù)自身需要檢索相關基因或者化學品。四川課題實驗可參觀
2）UCP1在AKI中***下調(diào)，且與腎損傷嚴重程度呈高度負相關
UCPs超家族與能量代謝密切相關，并在多種疾病中介導脂質(zhì)消耗?；赨CPs的功能，我們通過westernblot和免疫組化方法對正常C57小鼠腎組織中UCP1、UCP2和UCP3的表達進行了表征。結(jié)果顯示，UCP1和UCP2表達較好，而UCP3幾乎未檢測到(圖2A-B)。在UCPs中，UCP1被認為是脂質(zhì)降解**關鍵的基因，而UCP2與之沒有直接關系。因此，我們選擇UCP1進行進一步分析，證實其在皮質(zhì)小管中高表達，在髓質(zhì)中部分表達，C57小鼠、Sprague-Dawley大鼠、Wistar大鼠腎小球、**幾乎無表達(圖2C-D)。為了進一步確認UCP1在腎臟中的表達位點，我們用凝集素染色顯示腎臟的形態(tài)，然后對UCP1進行染色。結(jié)果顯示，UCP1主要表達于腎小管以上結(jié)果提示，UCP1可能在腎小管的結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮著潛在的重要作用。 糖尿病課題歡迎咨詢了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。
既往研究表明，F(xiàn)BXW7/HIF-1α/ VEGF-A通路參與**血管生成。因此，我們假設miR-144的促血管生成功能是通過在*變過程中調(diào)節(jié)FBXW7/HIF-1α/VEGF-A通路實現(xiàn)的。在本研究中，我們首先在mRNA水平和蛋白水平檢測暴露于鼻咽*EVs的HUVECs中FBXW7和HIF-1α。而HUVECs上清中用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定VEGF-A濃度(圖5I和5J)。結(jié)果顯示，暴露于miR-144模擬物的EVs中FBXW7的表達減少，而HUVECs上清液中HIF-1α和VEGFA的表達增加。miR-144抑制劑的引入導致EVs中FBXW7表達增加，HIF -1α表達減少，HUVECs上清VEGF-A濃度降低。此外， FBXW7過表達或HIF-1α沉默導致HUVECs上清中HIF-1α表達和VEGF-A濃度降低(圖5K和5L)。因此，miR-144可以靶向FBXW7，促進HIF-1α和VEGF-A的表達。
利用高通量RNA-seq和m6A-seq鑒定WTAP靶基因
為了進一步驗證WTAP介導的m6A甲基化對DLBCL細胞的影響，對對照組和WTAP缺失的SU-DHL-8細胞進行m6A測序(m6A-seq)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一致motifDRACH在免疫純化的RNA中富集(圖5A)，m6A位點主要存在于外顯子和3’-UTR中，且m6A位點在終止密碼子附近富集程度比較高(圖5B)，并通過篩選差異表達基因中出現(xiàn)的m6A低甲基化峰，鑒定出136個基因(圖5C)。HK2基因有助于**高糖酵解率，同時DLBCL在缺氧脅迫下促進生長需要HK2。GSEA分析表明，WTAP的潛在靶基因與缺氧信號***相關(圖5D)，提示HK2是DLBCL中WTAP的關鍵靶基因。m6A-seq數(shù)據(jù)顯示，WTAP靶向HK2轉(zhuǎn)錄本的5’-UTR,WTAP的敲除導致5’-UTR的m6A水平***下降(圖5E)。***作者為了驗證HK2是否是WTAP靶基因，通過構(gòu)建熒光素酶報告載體和CRISPR/CAS9敲除實驗，證明了HK2是WTAP在DLBCL中的直接下游靶點(圖5F,5G,5H,5I,5J)。 TRF測序課題整體服務。
為了探索 HIF1α促進circMYH9表達的分子機制，測量了 MYH9 前體 mRNA 的表達。SG或Glu饑餓增加了MYH9的前體mRNA 水平，HIF1α敲低降低了缺乏SG或Glu的CRC細胞中的MYH9前體 mRNA 水平。這些結(jié)果表明HIF1α在轉(zhuǎn)錄水平上促進 MYH9 前體 mRNA，這進一步增加了circMYH9。使用 JASPAR 搜索了MYH9啟動子中的HIF1α結(jié)合位點和基序。確定了兩個**可能的HIF1α結(jié)合位點。ChIP-qPCR 證明 HIF1α與HCT116細胞中MYH9 啟動子的兩個HBS位點結(jié)合。為了證實HIF1α通過HBS促進MYH9表達，構(gòu)建了包含全長MYH9啟動子區(qū)域和HBS缺失的circMYH9啟動子區(qū)域的熒光素酶報告基因。HBS1或HBS2的缺失部分消除了HIF1α敲低或過表達對MYH9 熒光素酶報告基因活性的抑制或促進，而HBS1和HBS2的缺失則完全消除了 HIF1α shRNA 或質(zhì)粒對MYH9熒光素酶報告基因活性的影響。這些數(shù)據(jù)表明，HBS區(qū)域?qū)τ赟G或Glu剝奪下的HIF1α依賴性circMYH9轉(zhuǎn)錄調(diào)控至關重要。解決了對確定因果調(diào)節(jié)機制網(wǎng)絡的方法的關鍵需求。鐵死亡臨床醫(yī)學課題詢問報價
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3）FTO是SsD的直接靶點
基于基因芯片數(shù)據(jù)，SsD介導的白血病發(fā)生抑制主要是由于m6A通路，我們假設SsD可能調(diào)節(jié)白血病m6ARNA甲基化。我們確定了FTO在白血病發(fā)生中起作用。為了驗證SsD與FTO的直接結(jié)合，我們首先基于已發(fā)表的FTO晶體結(jié)構(gòu)進行分子對接分析。SsD的比較好結(jié)合位點表現(xiàn)出與底物結(jié)合位點互補的特殊形狀，占據(jù)了整個結(jié)合口袋(圖3A-B)。4個氨基酸殘基(R96,K216,E234,R332)參與了與SsD的相互作用(圖3C)，在抑制FTO活性方面發(fā)揮了關鍵作用。在NB4和Kas-1AML細胞中，SsD與FTO蛋白的結(jié)合導致了明顯的熱轉(zhuǎn)移，表明對熱降解有保護作用(圖3D)。接著，我們利用NMR進一步研究了FTO和SsD之間的相互作用，在滴定過程中觀察到信號的劑量依賴性衰減(圖3E)。這些結(jié)果表明，F(xiàn)TO干擾了SsD的狀態(tài)。接下來，我們使用LC-MS/MS定量分析了細胞對SsD的攝取(圖3F)。在NB4和Kas-1細胞中，SsD在0.05-0.14nmol/百萬細胞中檢測到。HPLC顯示SsD對體外FTO去甲基化的抑制活性(圖3G)。此外，在無細胞系統(tǒng)中，斑點印跡試驗證實了SsD介導的FTO活性競爭性抑制(圖3H)。綜上所述，F(xiàn)TO是SsD的直接靶點，可能是SsD誘導的白血病細胞生長抑制作用的主要介質(zhì)。 四川課題實驗可參觀
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