結(jié)果顯示，敲低Mettl3降低了HCT116細(xì)胞中p53前體mRNA水平，而 Mettl3 過表達(dá)增加了p53前體mRNA水平而不影響hnRNPA2B1的蛋白質(zhì)水平。使用針對 p53 3'UTR 和CDS區(qū)域的特異性引物進(jìn)行MeRIP-qPCR以檢測 m6A水平，結(jié)果顯示沉默 Mettl3 導(dǎo)致3' UTR峰m6A甲基化水平降低，而過表達(dá) Mettl3 具有相反的效果。接下來，RIP分析證實了hnRNPA2B1和p53前體 mRNA 之間的相互作用通過消耗Mettl3被抑制或通過過度表達(dá)Mettl3 增強(qiáng)。
p53 3'UTR 熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn)hnRNPA2B1敲低降低了含有 p53 3'UTR的熒光素酶構(gòu)建體的活性，而Mettl3過表達(dá)增加了由 hnRNPA2B1 敲低誘導(dǎo)的熒光素酶活性降低。建立了 p53 3'UTR mut 熒光素酶測定。發(fā)現(xiàn)p53 3'UTR mut的螢光素酶活性對hnRNPA2B1敲低或Mettl3過表達(dá)沒有反應(yīng)。數(shù)據(jù)表明，p53前體mRNA的表達(dá)受hnRNPA2B1與p53 3'UTR上m6A位點的結(jié)合控制。 按照實驗設(shè)計路線和實驗結(jié)果進(jìn)行文章的構(gòu)思與潤色。海南課題技術(shù)指導(dǎo)
一、人胎肝和骨髓造血室的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組
為獲取胚胎發(fā)育期間造血細(xì)胞的全部譜系，研究者從17 – 22 PCW的胚胎肝臟、股骨和髖骨中對表型確定的血液群體進(jìn)行單細(xì)胞分類，并對15個胚胎的單個細(xì)胞進(jìn)行scRNA-seq檢測（圖1）?；诓町惐磉_(dá)分析和標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)***性排名前20的標(biāo)記基因，標(biāo)注了23個不同的群體，發(fā)現(xiàn)在肝臟或股骨中檢測不到任何T細(xì)胞或先天淋巴細(xì)胞（ILCs），單細(xì)胞分析顯示在所有免疫表型定義的干細(xì)胞和祖細(xì)胞群體中存在大量的轉(zhuǎn)錄異質(zhì)性，其中一些表型祖細(xì)胞群體（如HSCs，MPPs，CMPs，GMPs，MEPs和CLPs）由10多個不同的轉(zhuǎn)錄表型定義群體組成，這進(jìn)一步證明人類臍帶血的祖細(xì)胞室具有高度的異質(zhì)性。此外，該研究分析表明當(dāng)前使用的細(xì)胞表面標(biāo)記物不能很好地預(yù)測人類胚胎造血祖細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。 自噬醫(yī)學(xué)相關(guān)課題動物模型構(gòu)建產(chǎn)生關(guān)于環(huán)境影響疾病的病因和分子機(jī)制的可測試的假設(shè)。
10.EVs介導(dǎo)的ELNAT1與BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)
確定EVs介導(dǎo)的ELNAT1在BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的臨床意義十分重要。首先，作者發(fā)現(xiàn)來自BCa患者的尿中EVs與配對BCa組織的ELNAT1表達(dá)呈正相關(guān)，這意味著EVs介導(dǎo)的ELNAT1是BCa中ELNAT1調(diào)控的重要參與者（Figure10A）。同時，BCa患者的尿中EV介導(dǎo)的ELNAT1過表達(dá)與BCa的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（Figure10B）。EV介導(dǎo)的ELNAT1表達(dá)較高的BCa患者總生存期（OS）和無病生存期（DFS）率較短（Figure10C-D）。ROC分析顯示尿液中EV介導(dǎo)的ELNAT1可有效區(qū)分BCa患者與健康志愿者（Figure10E）。與尿液細(xì)胞學(xué)和FISH檢查結(jié)果相比，尿液中EVs介導(dǎo)的ELNAT1診斷BCa-LN轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性很高（Figure10F）。BCa患者血清中EVs介導(dǎo)的ELNAT1表達(dá)水平高于健康對照組（Figure10G）。與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的BCa患者血清相比，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的BCa患者血清中EVs介導(dǎo)的ELNAT1表達(dá)上調(diào)（Figure10H）。
結(jié)論：EVs介導(dǎo)的ELNAT1促進(jìn)了BCa的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。充分闡明EVs介導(dǎo)的ELNAT1***hnRNPA1/UBC9/ SOX18軸誘導(dǎo)BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的精確機(jī)制，不僅將增加我們對EVs介導(dǎo)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的認(rèn)識，也將有助于開發(fā)一種***BCa的有效策略。
因為CXCL13是一種趨化劑，可以促進(jìn)表達(dá)CXCR5的細(xì)胞趨化，使用IHC染色評估其在CRC中的表達(dá)，結(jié)果顯示CXCR-5在結(jié)直腸*組織中的染色強(qiáng)于正常組織，說明M2極化巨噬細(xì)胞分泌的CXCL13主要作用于CRC細(xì)胞（Fig. 7d）。PMA預(yù)處理后的THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-934 mimics，并與加入anti-CXCL13抗體或IgG的SW480細(xì)胞或RKO細(xì)胞共培養(yǎng)。此外，上述TPH-1細(xì)胞液與敲除CXCR5的細(xì)胞共培養(yǎng)。體外transwell實驗顯示，在與miR-934過表達(dá)PMA處理的THP-1細(xì)胞的CM共培養(yǎng)組中，anti-CXCL13抗體抑制了CRC細(xì)胞的遷移和侵襲；轉(zhuǎn)染了shCXCR5的SW480和RKO細(xì)胞與miR-934過表達(dá)PMA處理的THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)時，遷移和侵襲能力降低（Fig. 7e, f）。此外，小鼠體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移檢測表明，與對照組相比，用anti-CXCL13抗體或敲除CXCR5的CRC細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移菌落減少（Fig. 7g–i）。高表達(dá)的外泌體CD44v6和C1QBP是預(yù)測PDAC患者預(yù)后和肝轉(zhuǎn)移的很有前途的生物標(biāo)志物。
三、染色質(zhì)可及性與細(xì)胞類型特異性轉(zhuǎn)錄因子活性和染色質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)有關(guān)
HNF4A編碼驅(qū)動近端小管分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。chromVAR檢測到近端小管DAR中HNF4A結(jié)合基序的富集(圖3b，基序活性)，這是HNF4A中染色質(zhì)可及性增強(qiáng)(圖3b，基因活性)和snRNA-seq數(shù)據(jù)集中HNF4A轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)(圖3b，基因表達(dá))所支持的。我們通過染色質(zhì)免疫沉淀，然后定量PCR (ChIP-qPCR)驗證了HNF4A與腎近端小管上皮細(xì)胞(RPTEC，補充圖8a)中選定的靶基因位點(SLC34A1, SLC5A2, HNF4A) DAR中預(yù)測的HNF4A結(jié)合位點的結(jié)合。 然而，在RPTEC中可檢測到HNF4A的表達(dá)水平低于腎皮質(zhì)，這表明HNF4A與該細(xì)胞類型中的這些位點具有強(qiáng)大的相互作用(補充圖8b)。 根據(jù)自身需要檢索相關(guān)基因或者化學(xué)品。內(nèi)蒙古課題整體服務(wù)
提供分子生物以及到后續(xù)動物建模的一整套服務(wù)。海南課題技術(shù)指導(dǎo)
現(xiàn)今研究表明tRNA-derivedsmallnoncodingRNAs（sncRNAs）主要分為兩類：tRNAhalves(tiRNAs)和fragments(tRFs)。前者在人類實體**中的的生物學(xué)功能吸引了越來越多的關(guān)注，但是其在**發(fā)生中的生物學(xué)機(jī)制仍知之甚少。tiRNAs和剪切相關(guān)蛋白之間的相關(guān)作用更是為未可知。本研究***發(fā)現(xiàn)一個5’-tRNAhalves，即tiRNA-Gly通過與RBM17結(jié)合誘導(dǎo)可變剪切進(jìn)而促進(jìn)**狀甲狀腺*（PTC）的增殖和遷移。本文于2021年7月發(fā)表在影響因子7.068的《JournalofExperimentalandClinicalCancerResearch》期刊上。海南課題技術(shù)指導(dǎo)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗