然后使用單細胞RNA-seq來描述移植后30天脾臟中存留的T細胞的轉(zhuǎn)錄譜（Fig. 4G）。使用pseudobulk RNA-seq分析和預(yù)轉(zhuǎn)移體外培養(yǎng)的基因比較，生成了持續(xù)細胞的基因標記，其標志是記憶相關(guān)基因(Sell，F(xiàn)oxp1，Tcf7，Cd7，Il7r，Klf2，Ccl5)的高表達和效應(yīng)相關(guān)基因(Gzmd，Ifng，Prf1，Gzma，Gzmb)的低表達(Fig. 4H-I)。對先前的體外單細胞數(shù)據(jù)（Fig. 2H-J）的進一步分析顯示，CDK4/6i處理后，具有這種持續(xù)性特征的細胞頻率從7.5%增加至26.8%（Fig. 4J-K）。這些數(shù)據(jù)表明，抑制CDK4/6促進T細胞向真實的記憶表型分化，其特征是功能的長期持久性。公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫。標志物課題第三方實驗室
隨后，作者研究了YTHDC2是否通過SLC7A11抑制胱氨酸攝取。當YTHDC2在H1299細胞中過表達時，并過表達SLC7A11完全恢復(fù)了受損的胱氨酸攝取(圖4E-G)。ATF4是SLC7A11轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，ATF4在H1299細胞中上調(diào)SLC7A11(圖4H、I)。過表達YTHDC2仍然拮抗ATF4的作用(圖4H-J)。因此，YTHDC2損害依賴于SLC7A11的胱氨酸攝取。結(jié)合臨床分析，YTHDC2表達下調(diào)，而SLC7A11表達上調(diào)(圖4K、L)，并且它們在**中呈負相關(guān)(圖4M)。
5.YTHDC2以m6A依賴的方式使SLC7A11mRNA不穩(wěn)定
作者為研究YTHDC2是否在轉(zhuǎn)錄被阻斷后調(diào)控SLC7A11mRNA的穩(wěn)定性，通過泛轉(zhuǎn)錄抑制劑ActD處理H1299和H1975細胞，發(fā)現(xiàn)YTH結(jié)構(gòu)域?qū)τ赮THDC2縮短H1299細胞中SLC7A11mRNA的半衰期至關(guān)重要(圖5A)。在H1975細胞中，CRISPR/Cas9技術(shù)使YTHDC2功能喪失，然后YTHDC2重構(gòu)，進一步證實YTHDC2加速了SLC7A11mRNA的衰變(圖5B)。EXOSC10是一種外切酶，負責(zé)3’-5’外切酶活性。EXOSC10的缺失，減弱了YTHDC2縮短SLC7A11mRNA半衰期的作用(圖5C、D)。在藥理學(xué)水平上，用兩種泛-RNase抑制劑DEPC和RNasin***H1299細胞，也阻斷了YTHDC2的功能(圖5D)。 lncRNA課題分子生物學(xué)完善的實驗平臺提供可視化的建模服務(wù)。
1.肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11表達上調(diào)和***
為了探討Caspase-11在肝脂肪變性中的作用，我們首先檢測了肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11的表達。如圖1A所示，與正常小鼠相比，MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11mRNA明顯增加。相應(yīng)的，在MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠的肝臟中，pro-caspase-11(圖1B和C)和cleaved-caspase-11(圖1B和D)的蛋白水平均***上調(diào)。這些結(jié)果提示Caspase-11與肝臟脂肪變性呈正相關(guān)。
2.Caspase-11缺乏減弱MCD誘導(dǎo)的小鼠肝脂肪變性
為了評估Caspase-11對肝脂肪變性的潛在影響，我們在Caspase-11缺陷小鼠中誘導(dǎo)肝脂肪變性并監(jiān)測表型。正常野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟組織學(xué)表現(xiàn)正常。野生型小鼠經(jīng)MCD***后，肝臟出現(xiàn)明顯的脂肪變性和腫脹。與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠的脂肪變性和腫脹明顯減少(圖2A)。相應(yīng)的，與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理Caspase-11缺陷小鼠肝臟脂肪變性評分(圖2B)和膨脹評分(圖2C)***降低。
滲透活性劑保護細胞防止ferroptosis
氣孔形成是不同類型調(diào)控細胞死亡的共同特征。質(zhì)膜孔的打開導(dǎo)致水分子的流入，這是由于無法通過膜孔的高濃度細胞內(nèi)大分子造成的滲透失衡的結(jié)果(圖3A)。這種效果可以通過添加不能夠通過孔進入細胞的適當大小的滲透保護劑peg來阻止，從而平衡細胞內(nèi)滲透壓、水流入和隨后的細胞坍塌(圖3B)。加入1.8nm的peg并不能阻止胞質(zhì)Ca2+的增加、細胞圓化或細胞死亡(圖3C-F)。相比之下，在peg(2.3nm和2.7nm)的存在下，胞質(zhì)Ca2+水平的增加和細胞死亡均以尺寸依賴的方式延遲(圖3D,F)。PEG(2.7nm)對ferroptosis的保護作用在洗滌后恢復(fù)，這表明膜損傷隨時間的推移是穩(wěn)定的(圖3G)。我們還發(fā)現(xiàn)，PEG(2.7nm)并不能阻止RSL3處理的NIH-3T3細胞的脂質(zhì)過氧化(圖3H,I)。對于使用的所有PEG大小，NIH-3T3細胞處理較長時間(24h)后細胞死亡恢復(fù)(圖3J)。PEG對ferroptosis動力學(xué)的抑制作用也隨著RSL3濃度的增加而降低(圖3K,L)。**終作者以在較低濃度RSL3下能夠起到保護作用的PEG尺寸作為參考，得出質(zhì)膜穿孔部分的半徑約為2.5nm(圖3L)。 課題CRO服務(wù)找上海英拜。
2、CFL1的高表達與HCC的不良預(yù)后相關(guān)單變量分析顯示，**大小、**數(shù)量、TNM分期、靜脈浸潤、HBV***和CFL1水平與HCC患者的總體生存率***相關(guān)（表2）。多變量分析顯示，***大小、**數(shù)量、靜脈浸潤和CFL1水平是HCC總體生存率的**預(yù)后指標（表2）。并且，可以看出CFL1的高表達與HCC的不良預(yù)后相關(guān)。
3、CFL1促進HCC的增殖，遷移和侵襲如圖2所示，在高表達CFL1的HCCLM3和MHCC97h細胞中，敲除CFL1(圖2A)。隨后實驗發(fā)現(xiàn)敲除CFL1后HCCLM3和MHCC97h細胞的增殖，遷移和侵襲能力被抑制，表明CFL1促進HCC的增殖，遷移和侵襲。 zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。褪黑素課題產(chǎn)學(xué)研合作
Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。標志物課題第三方實驗室
2.Tempol能中度改善DHEA誘導(dǎo)的PCOS大鼠的糖耐量
由于多囊卵巢綜合征與代謝紊亂密切相關(guān)，評估了不同組的胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。DHEA+PBS組大鼠的空腹血糖水平雖然沒有明顯差異，但其空腹血清胰島素水平和HOMA-IR值均高于油+PBS組。Tempol***降低了空腹胰島素水平，而對PCOS大鼠的空腹血糖水平和HOMA-IR值無***影響(圖2A-C)。OGTTs顯示PCOS大鼠葡萄糖***延遲和曲線下面積增加，這表明DHEA處理降低了葡萄糖排泄能力。經(jīng)tempol***后，糖耐量受損情況得到改善(圖2D)。ITTs證明，三組大鼠對胰島素的反應(yīng)相同(圖2E)。 標志物課題第三方實驗室
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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