2)在體內(nèi)和體外，DRD2的表達(dá)抑制BrCa細(xì)胞的**發(fā)生
構(gòu)建過(guò)表達(dá)DRD2的MDA-MB231和BT549細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR(Figure2A)和WB(Figure2B)驗(yàn)證。CCK8實(shí)驗(yàn)證明，DRD2異位表達(dá)抑制**細(xì)胞生長(zhǎng)(圖2C)。在單層集落形成實(shí)驗(yàn)(圖2D)和軟瓊脂形成實(shí)驗(yàn)(圖2E)中，DRD2也損害了存活能力。并進(jìn)行細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布分析。DRD2的表達(dá)***促進(jìn)了BrCa細(xì)胞凋亡(圖2F)，并阻斷了MDA-MB231和BT549在G2/M期的凋亡(圖2G)。此外，過(guò)表達(dá)DRD2促進(jìn)了BrCa細(xì)胞對(duì)PTX的敏感性(圖2H)。在傷口愈合實(shí)驗(yàn)中，異位表達(dá)的DRD2比對(duì)照組表現(xiàn)出更少的閉合人工傷口的能力(圖2I)。與此相一致的是，DRD2的過(guò)表達(dá)***降低了BrCa的遷移和侵襲(圖2J)。在體內(nèi)進(jìn)一步測(cè)定了DRD2的抑瘤作用。皮下**模型顯示過(guò)表達(dá)DRD2模型的**體積和重量均減小(圖2K)。 根客戶(hù)的研究方向查閱相關(guān)文獻(xiàn)。標(biāo)志物課題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)
1）Pex誘導(dǎo)肝纖維化微環(huán)境，促進(jìn)PDAC肝轉(zhuǎn)移
從小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細(xì)胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)，大小約為50-150nm(圖1A，B)。進(jìn)一步的westernblot分析證實(shí)了分離的外泌體的存在(圖1C)。為了確定Pex在PDAC肝轉(zhuǎn)移中的作用，我們首先進(jìn)行了“教育”程序，并進(jìn)一步通過(guò)脾內(nèi)注射建立了PDAC肝轉(zhuǎn)移模型(圖1D)。在“教育”過(guò)程后，STE和原子力顯微鏡(AFM)顯示，與Npex組相比，Pex組小鼠的肝臟剛度***增加(圖1E，F(xiàn))。此外，肝組織膠原密度增加(圖1G)，肝ECM明顯重構(gòu)(圖1H，I)。同樣，PDAC原位植入模型也顯示原位**可增加肝臟膠原沉積。肝轉(zhuǎn)移模型顯示，與Npex組相比，Pex組肝轉(zhuǎn)移更多，肝質(zhì)量更高(圖1J)。這些數(shù)據(jù)表明，Pex可以通過(guò)重構(gòu)肝臟ECM來(lái)誘導(dǎo)肝纖維化微環(huán)境，促進(jìn)PDAC肝轉(zhuǎn)移。 lncRNA課題分子生物學(xué)了解客戶(hù)的研究方向以及所能提供的樣本類(lèi)型和樣本量確定研究思路。
以上數(shù)據(jù)提示，miR-934異常高表達(dá)與結(jié)直腸***進(jìn)展及肝轉(zhuǎn)移***相關(guān)。生存分析顯示，與miR-934表達(dá)較低的患者相比，miR-934表達(dá)較高的患者總生存期(OS)和無(wú)病生存期(DFS)較低（Fig.1f,g）。因此，在CRLM患者中，miR-934高表達(dá)與CRLM進(jìn)展和預(yù)后不良呈正相關(guān)。
2、miR-934存在于CRC細(xì)胞衍生的外泌體中
miR-934在HCT-8和LoVo的CM中的表達(dá)***高于其它細(xì)胞（Fig.2a）。隨后，研究發(fā)現(xiàn)HCT-8和LoVo的CM中miR-934的表達(dá)***高于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（Fig.2b,c）。并且，miR-934在CM中的表達(dá)不隨RNaseA的處理而改變，而隨RNaseA+TritonX-100的處理***下降（Fig.2d），這表明細(xì)胞外的miR-934被膜包裹，而不是直接分泌。因此，推測(cè)miR-934可能是被外泌體傳輸。電鏡和納米顆粒追蹤分析表明，miR-934表達(dá)水平較高的CRC細(xì)胞分泌的外泌體比miR-934表達(dá)水平較低的CRC細(xì)胞分泌的外泌體更多（Fig.2e,f）。各組外泌體標(biāo)志物CD9，ALIX，TSG101均被WB檢測(cè)到（Fig.2g）。
5）MAPK1-109aa對(duì)胃*有抑制作用
為了進(jìn)一步研究MAPK1-109aa的生物學(xué)功能，我們將circMAPK1ATG突變質(zhì)粒、circMAPK1IRES突變質(zhì)粒和circMAPK1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到MKN45和BGC823細(xì)胞中。如預(yù)期的那樣，當(dāng)轉(zhuǎn)染ATG突變質(zhì)粒和IRES突變質(zhì)粒時(shí)，沒(méi)有出現(xiàn)circMAPK1編碼的MAPK1-109aa13-kDa帶(圖5a)。CCK8實(shí)驗(yàn)(圖5b)、集落形成實(shí)驗(yàn)(圖5c，d)和EdU實(shí)驗(yàn)(圖5e，f)顯示過(guò)表達(dá)circMAPK1明顯抑制了細(xì)胞的增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)顯示，處于S期的GC細(xì)胞數(shù)量也明顯減少(圖5g)。然而，當(dāng)circMAPK1的ATG或IRES序列發(fā)生突變時(shí)，MKN45和BGC823細(xì)胞的增殖能力沒(méi)有明顯變化。 公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)。
急性胰腺炎(AP)是**常見(jiàn)的炎癥性胃腸道疾病之一，在小鼠和人類(lèi)模型中似乎通過(guò)外分泌腺泡細(xì)胞的再生而恢復(fù)。巨噬細(xì)胞是由組織損傷引發(fā)的炎癥和組織再生反應(yīng)的重要驅(qū)動(dòng)因素，包括***、自身免疫性疾病、機(jī)械或毒性損傷以及其他原因。在組織損傷時(shí)，骨髓(BM)衍生的巨噬細(xì)胞和/或組織駐留巨噬細(xì)胞被***并以促炎方式響應(yīng)局部環(huán)境，然后迅速轉(zhuǎn)變?yōu)閭谛迯?fù)表型。巨噬細(xì)胞的表型和作用已在急性和慢性胰腺炎中得到充分證明。然而，關(guān)于巨噬細(xì)胞如何調(diào)節(jié)損傷后的胰腺修復(fù)/再生，包括ADM和腺泡再分化，我們知之甚少。***講一篇關(guān)于巨噬細(xì)胞表型變化與AP炎癥相關(guān)的文章，該文章題名為：Macrophagephenotypicswitchorchestratestheinflammationandrepair/regenerationfollowingacutepancreatitisinjury，IF=5.737，一區(qū)雜志。也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。巨噬細(xì)胞課題CRO
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將A375-A2-ESO人黑色素瘤細(xì)胞、ESO-T細(xì)胞和IL-4/IL-13極化的MDMs以2:2:1的比例混合，放置在模擬TME的3D**類(lèi)***培養(yǎng)物中（圖6k）。IL-4/IL-13極化MDMs有效抑制ESO - T細(xì)胞介導(dǎo)的A375-A2-ESO**細(xì)胞的殺傷；在MDM極化過(guò)程中，苯乙肼的***在很大程度上緩解了這種免疫抑制作用（圖6l）。因此，與苯乙肼處理的MDMs共培養(yǎng)的ESO-T細(xì)胞相比，與非苯肼處理的MDMs共培養(yǎng)的ESO-T細(xì)胞顯示了T細(xì)胞活化的增強(qiáng)（圖6m）?？偟膩?lái)說(shuō)，這些數(shù)據(jù)表明MAOI誘導(dǎo)的人類(lèi)TAM重編程具有改善抗**T細(xì)胞反應(yīng)的潛力。此外，人和小鼠的TAM都高表達(dá)MAOA基因（圖6n），證實(shí)MAO-A可作為人類(lèi)TAMs的有效藥物靶點(diǎn)。標(biāo)志物課題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)
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