為了了解白樺素和他汀類藥物的抗DIO作用，進(jìn)一步分析了脂質(zhì)吸收，體力活動(dòng)和能量消耗。在洛伐他汀***的小鼠中，盡管呼吸商（RQ）增強(qiáng)，表明從體內(nèi)利用葡萄糖和蛋白質(zhì)進(jìn)行能量生產(chǎn)已超過脂質(zhì)氧化，但耗氧量和總能量消耗仍與WD喂養(yǎng)的小鼠相似（圖4F-4H）。另一方面，用洛伐他汀喂養(yǎng)的小鼠的糞便膽固醇和甘油三酸酯（TG）顯著增加（圖4C和4D），表明洛伐他汀降低脂質(zhì)吸收或增加脂質(zhì)排泄，從而拮抗DIO。這一觀察結(jié)果與以前的報(bào)告是一致的。另一方面，白樺素對脂質(zhì)吸收/排泄沒有影響（圖4C和4D）。盡管每組小鼠的身體活動(dòng)都相似（圖4E），但接受白樺素的小鼠的RQ升高（圖4F），其耗氧量和能量消耗也增加了（圖4G和4H），這可能有助于他們體重增加量的減少。同時(shí)，接受30 mg / kg /day白樺素的小鼠暴露于寒冷時(shí)顯示出更高的體溫（圖4I）。進(jìn)一步的Q-PCR分析顯示，在經(jīng)白樺素處理的小鼠中，棕色脂肪細(xì)胞組織（BAT）中的兩個(gè)關(guān)鍵生熱基因UCP-1和UCP-2升高（圖4J）。該觀察結(jié)果與關(guān)于UCP-1在n-SREBP-1c轉(zhuǎn)基因小鼠的BAT中顯著降低的報(bào)道是一致的?？傊@些數(shù)據(jù)表明，洛伐他汀可能通過減少脂質(zhì)吸收/增加排泄來至少部分地預(yù)防DIO，而白樺素通過增加能量消耗來改善DIO。英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。過表達(dá)課題分子生物學(xué)
急性髓系白血病(AML)的靶向***的實(shí)施一直具有挑戰(zhàn)性。FTO是一種m6A去甲基酶，作為一種致*基因，促進(jìn)白血病*基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病發(fā)生。因此為大家介紹于2021年3月發(fā)表于影響因子為8.579的Theranostics上文章“Saikosaponin D exhibits anti-leukemic activity by targeting FTO/m6A signaling”。在這里，我們研究了Saikosaponin-d (SsD)在AML中***的抗增殖作用中的作用，并通過靶向SsD的FTO來評估m(xù)6A去甲基化活性。SsD在體外和體內(nèi)均能***抑制AML細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。機(jī)制上，SsD直接靶向FTO，從而增加了m6A RNA的甲基化，降低了下游基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，導(dǎo)致相關(guān)通路的抑制。重要的是，SsD還克服了FTO/m6A介導(dǎo)的白血病對酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性?？傊現(xiàn)TO依賴的m6A RNA甲基化介導(dǎo)了SsD的抗白血病作用，使SsD成為一種***白血病的藥物。M6a甲基化課題協(xié)同創(chuàng)作高表達(dá)的外泌體CD44v6和C1QBP是預(yù)測PDAC患者預(yù)后和肝轉(zhuǎn)移的很有前途的生物標(biāo)志物。
tiRNA-Gly通過RBM17調(diào)節(jié)增殖或遷移相關(guān)基因的選擇性剪接
由于RBM17是一種參與mRNA選擇性剪接的剪接體蛋白，研究tiRNA-Gly在與RBM17結(jié)合時(shí)是否調(diào)節(jié)下游基因的選擇性剪接將是一項(xiàng)有趣的研究。對過表達(dá)tiRNA-Gly后的K1細(xì)胞系進(jìn)行RNA測序，所有的選擇性剪切事件如6A所示，外顯子跳躍（cassette外顯子）占37.67%，A5SSs剪接占6.78%，A3SSs剪接占4.99%，備選***外顯子(AltStart)剪接占18.19%，備選末端外顯子（AltEnd）剪接占18.74%，互斥事件（MEXs）占5.12%，內(nèi)含子保留剪接（IR）占8.51%。外顯子跳躍顯然是tiRNA-Gly誘導(dǎo)的**頻繁的選擇性剪接事件。MAP4K4、POSTN、HACE1、DPP9和BRCA1是外顯子跳躍導(dǎo)致表達(dá)變化比較大的基因。tiRNA-Gly誘導(dǎo)了MAK4K4第16外顯子的跳躍，POSTN第21外顯子的跳躍，HACE1第8外顯子的跳躍，DPP9第21外顯子的跳躍和BRCA1第13外顯子的跳躍（圖6B）。如圖6C-D所示，升高的tiRNA-Gly誘導(dǎo)了MAP4K4一個(gè)截?cái)嘈?NM_4834.4)的mRNA水平，降低了一個(gè)長型(NM_1242560.1)的mRNA水平，而下調(diào)的RBM17則起相反的作用。重要的是，RBM17的敲除阻斷了由tiRNA-Gly誘導(dǎo)的MAP4K4截?cái)嘧凅w(NM_4834.4)的增加，表明tiRNA-Gly誘導(dǎo)的選擇性剪接依賴于RBM17。
2、miR-208b由結(jié)腸*細(xì)胞以外泌體的方式分泌
隨后，作者探究了miR-208b的存在方式是否由外泌體介導(dǎo)。分離鑒定了3株CRC細(xì)胞系的外泌體，并檢測了其中miR-208b的表達(dá)。外泌體中miR-208b的表達(dá)模式和在細(xì)胞中的模式一致，在SW480-OXA***高于SW480***高于NCM460。這些結(jié)果表明CRC中miR-208b的是以外泌體的模式分泌，這可能和順鉑化療敏感性有關(guān)。
3、SW480細(xì)胞分泌的外泌體miR-208b促進(jìn)Treg擴(kuò)增
前人研究表明順鉑會影響**免疫微環(huán)境。MiRNA可能通過促進(jìn)Treg擴(kuò)增誘導(dǎo)免疫侵襲。因此，作者探究了CRC分泌外泌體miR-208b對T細(xì)胞分化的影響。使用siRNA去除miR-208b，然后收集外泌體，將含有不同水平miR-208b的外泌體與原代CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)（圖4A-B）。6h后，受體CD4+T細(xì)胞中miR-208b***增加，尤其是SW480-OXA組，而外泌體miR-208b缺失組則沒有***改變，表明CD4+T細(xì)胞中miR-208b是由外泌體傳輸（圖4C-D）。此外，SW480和SW480-OXA來源外泌體處理組的CD4+CD25highFoxp3+Tregs細(xì)胞數(shù)***增加，而外泌體miR-208b缺失對其陽性細(xì)胞數(shù)則沒有明顯影響。表明外泌體miR-208b促進(jìn)Treg擴(kuò)增。 表達(dá)PTEN- 398A的細(xì)胞中上調(diào)的基因與G1/S檢查點(diǎn)的***有關(guān)。
五、敲除核孔蛋白來挽救核孔蛋白的表達(dá)導(dǎo)致果蠅的運(yùn)動(dòng)功能障礙和壽命縮短
Nup62、Nup214、Nup43在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中過表達(dá)***降低了運(yùn)動(dòng)功能和攀爬速度(圖5A和B)。與各自的Nup對照或?qū)φ战M動(dòng)物相比，過表達(dá)Nup62和Nup214或Nup62和Nup43的動(dòng)物的壽命明顯縮短——Nup62/ Nup214 OE和Nup62/Nup43 OE的中位存活時(shí)間分別為23天和21天(圖5C)。用RNAi成蟲(Nup62或Nup214)多次暴露于創(chuàng)傷后，檢測其運(yùn)動(dòng)功能和壽命。Nup62 mRNA (p <0.01)和Nup214 mRNA (p <0.001)與對照組相比，Nup62和Nup214 RNAi處理組的攀爬水平***降低(圖5D和E)。有趣的是，Nup62 RNAi和Nup214 RNAi處理組創(chuàng)傷后攀爬水平***提高(圖5E, )和速度(圖5F）。
六、核孔病理存在于重復(fù)性TBI患者腦組織中，并與TDP-43病理共同聚集
輕度和重度CTE的組織，但年齡不匹配的對照組顯示***和強(qiáng)烈的NUP62免疫反應(yīng)性(圖6A,B,C）。21例嚴(yán)重CTE患者腦組織的NUP62水平明顯高于對照組(圖6D)。輕度CTE病例中NUP62與pTDP-43的共聚集程度有限，而重度CTE病例中NUP62和pTDP-43陽性包體在額葉皮質(zhì)的共聚集(箭頭)更為明顯(圖6E)。 動(dòng)物建模模型實(shí)驗(yàn)的整體服務(wù)。克羅恩課題基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外包
英拜提供生物醫(yī)學(xué)課題外包服務(wù)。過表達(dá)課題分子生物學(xué)
4）circPDE4B促進(jìn)了RIC8A和MID1之間的三元配合物的形成，促進(jìn)了RIC8A的降解
我們試圖鑒定參與RIC8A蛋白酶體降解的E3連接酶。有趣的是，MS結(jié)果顯示circPDE4B也結(jié)合了兩個(gè)E3連接酶，包括RNF2和MID1。然而，由于RNF2定位于細(xì)胞核內(nèi)，我們選擇MID1進(jìn)行進(jìn)一步研究。實(shí)際上，通過免疫沉淀分析，MID1被發(fā)現(xiàn)與RIC8A結(jié)合(圖4A)。RIC8A和MID1的免疫熒光染色也證實(shí)了它們在HCs***定位(圖4B)。IP結(jié)果表明，MID1敲低有效地削弱了RIC8A和MID1過表達(dá)的泛素化作用，增加了RIC8A泛素化作用(圖4C)。Co-IP實(shí)驗(yàn)也顯示，與對照組相比，circPDE4B敲低細(xì)胞中RIC8A和MID1的結(jié)合減少，而過表達(dá)circPDE4B則有相反的作用(圖4D)。 過表達(dá)課題分子生物學(xué)
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