同樣，Transwell實(shí)驗(yàn)(圖5h)也證明了**細(xì)胞的遷移能力。綜上所述，circMAPK1在沒有其編碼蛋白MAPK1-109aa的情況下，不能抑制GC細(xì)胞的惡性表型。隨后，為了進(jìn)一步驗(yàn)證MAPK1-109aa的功能，我們在SGC7901和MGC803細(xì)胞中恢復(fù)了MAPK1-109aa的表達(dá)，無論是否穩(wěn)定敲除circMAPK1，Western blot驗(yàn)證了這一點(diǎn)(圖6a)。將MAPK1-109aa質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SGC7901和MGC803細(xì)胞株后，細(xì)胞的增殖能力(圖6b-g)和遷移能力(圖6h)得到了有效的抑制。在轉(zhuǎn)染了shcirMAPK1的細(xì)胞系中，恢復(fù)了MAPK1-109aa的表達(dá)也逆轉(zhuǎn)了穩(wěn)定敲除circMAPK1所導(dǎo)致的惡性表型。綜上所述，上述結(jié)果表明circMAPK1對GC細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的抑制作用依賴于其編碼蛋白MAPK1-109aa。高通量測序后續(xù)的機(jī)制實(shí)驗(yàn)。microRNA
6）circPde4b和RIC8A影響小鼠OA發(fā)病機(jī)制
為了證實(shí)上述發(fā)現(xiàn)，我們進(jìn)一步評估了circPde4b對小鼠OA的影響。圖6A為四組不同AAV***后circPde4b和RIC8A的RNA表達(dá)情況。從軟骨中提取的ECM相關(guān)蛋白的RT-qPCR和westernblot分析也提示在內(nèi)側(cè)半月板不穩(wěn)(DMM)+vector組和DMM+circPde4b+RIC8A組中OA更嚴(yán)重(圖6B，C)。SafraninOfastgreen染色(圖6D)發(fā)現(xiàn)，與SHAM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組相比，DMM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組的蛋白多糖明顯丟失，表明circPde4bAAV可以挽救由DMM引起的OA進(jìn)展，而RIC8AAAV可以逆轉(zhuǎn)這種挽救。 武漢課題基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外包使用motif和CHIP-seq預(yù)測影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。
1）AKI伴有明顯的脂質(zhì)積累，并與腎損傷的嚴(yán)重程度高度正相關(guān)根據(jù)脂質(zhì)代謝組學(xué)分析結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)AKI組織中各類甘油三酯(TGs)含量***增加(圖1A)?？紤]到AKI中的脂質(zhì)積累，我們進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來確定其臨床意義。我們對不同嚴(yán)重程度的AKI動物標(biāo)本進(jìn)行油紅O染色。結(jié)果顯示，隨著疾病進(jìn)展的延長，小鼠腎組織脂質(zhì)沉積逐漸增加(圖1B)。在體外也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果，即隨著細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度，脂質(zhì)積累的程度增加(圖1C)。這些結(jié)果說明AKI中的脂質(zhì)積累與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。
在缺氧條件下的持續(xù)***誘導(dǎo)不同的細(xì)胞內(nèi)程序
已知的缺氧信號靶點(diǎn)BNIP3在缺氧下升高，mTORC1在持續(xù)刺激下被***(圖3a)。從這四種條件中獲得的RNA序列被用來比較培養(yǎng)物和之前公布的數(shù)據(jù)之間的轉(zhuǎn)錄組。主成分分析顯示，所有四個群體的轉(zhuǎn)錄組都不同(圖3b)。缺氧條件下的持續(xù)刺激并沒有誘導(dǎo)持續(xù)刺激和缺氧誘導(dǎo)基因的組合，而是驅(qū)動了一個不同的轉(zhuǎn)錄譜(圖3c）?；虮倔w論表明，連續(xù)刺激條件之間共享的基因簇與負(fù)調(diào)控和代謝變化相關(guān)(簇3和簇5)(圖3b)。與缺氧條件下持續(xù)刺激相關(guān)的基因(聚類1和7)主要由抗病毒和抗增殖基因驅(qū)動。 上海英拜提供課題外包服務(wù)。
通過測量纖維化相關(guān)因子的表達(dá)我們評估Caspase-11缺失對MCD誘導(dǎo)的肝纖維化的影響。在正常條件下，野生型和Caspase-11缺陷小鼠的TGF-β(圖3A)、α-Sma(圖3B)和Col1a1(圖3C)表達(dá)相似。MCD處理的野生型小鼠中TGF-β、α-Sma和Col1a1的表達(dá)***上調(diào)。相比之下，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠TGF-β、α-Sma和Col1a1的mRNA水平***降低。這些結(jié)果表明，Caspase-11缺乏可減少M(fèi)CD處理小鼠的肝纖維化。
我們評估了Caspase-11缺乏對MCD誘導(dǎo)炎癥的影響。首先，我們比較了野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟白細(xì)胞浸潤情況。在正常情況下，野生型小鼠和caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例相似(圖4A和B)。MCD***導(dǎo)致野生型小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例增加。相比之下，MCD****輕微增加了Caspase11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例。與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例明顯下降(圖4A和B)，表明MCD處理后Caspase-11缺陷導(dǎo)致肝臟中白細(xì)胞浸潤減少。相應(yīng)地，我們發(fā)現(xiàn)了MCD***促進(jìn)肝臟F4/80的表達(dá)而Caspase-11缺乏則***MCD誘導(dǎo)的F4/80上調(diào)(圖4C)。 英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。巨噬細(xì)胞課題實(shí)驗(yàn)外包
了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。microRNA
三、pten-s38a突變誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抵抗
為了進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對基因毒性損傷的反應(yīng)，我們使用抗體陣列評估了表達(dá)PTEN-wt或PTEN-398a的MCF10A細(xì)胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。Pten+/+和Pten398A/398AMEF培養(yǎng)，表達(dá)Pten-wt的MCF10A細(xì)胞與表達(dá)Pten-398A的MCF10A細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下的生長速率均無差異(圖3A和補(bǔ)充圖5C)。對細(xì)胞進(jìn)行不同的基因毒性脅迫處理:IR、順鉑和柔紅霉素。在所有條件下，Pten398A/398AMEFs和PTEN-398A表達(dá)的MCF10A細(xì)胞對基因毒性脅迫的抗性均高于野生型PTEN的細(xì)胞(圖3BD和SupplementaryFig.5D,E)。通過流式細(xì)胞儀AnnexinV染色判斷(圖3E)。通過使用caspase-3抗體對Pten+/+、MMTVneu和Pten398A/398A、MMTVneu**進(jìn)行免疫組化染色，證實(shí)了這些觀察結(jié)果。 microRNA
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