3）DRD2重新編碼MφM1表型，下調(diào)IL-6和IL-10
據(jù)報道，DRD2可調(diào)節(jié)M1的極化。結(jié)果顯示，在DRD2表達水平較高的BrCa組織中，M1Mφ的浸潤增加，M2Mφ的浸潤減少(圖3A)。為進一步研究DRD2對TAMs的調(diào)控作用，構(gòu)建了BrCa與Mφ共培養(yǎng)體系。當Mφ與表達DRD2的BrCa細胞共培養(yǎng)時，qRT-PCR顯示M1表型標記增加，M2Mφ標記下調(diào)(圖3B-C)。qRT-PCR也證實了載體轉(zhuǎn)染的BrCa細胞將Mφ調(diào)節(jié)為M2型(圖3C)[12]。WB結(jié)果顯示，表達DRD2的BrCa細胞上調(diào)M1標記iNOS，下調(diào)M2標記CD206(圖3D)。IF染色顯示，與表達DRD2的**細胞共培養(yǎng)后，Mφ表現(xiàn)為M1表型(圖3E)。上述結(jié)果表明，BrCa中的DRD2具有將Mφ重新編碼為M1表型的能力。為了探索使Mφ向M1表型分化的關(guān)鍵調(diào)控因子，我們進行了細胞因子陣列分析。結(jié)果表明，TNF-α和兩種誘導(dǎo)M1極化的經(jīng)典細胞因子IFNγ均未增加。而與Mφ共培養(yǎng)后，DRD2***下調(diào)IL-6和IL-10(圖3F)。分析熒光值，進一步證實IL-6和IL-10下調(diào)(圖3F)。因此，DRD2可以將Mφ重新編碼為M1表型，并在crosstalk過程中***下調(diào)IL-6和IL-10。 ATM對PTEN的磷酸化導(dǎo)致PTEN在質(zhì)膜上重新分布。湖北課題細胞實驗
與對照組相比，來自轉(zhuǎn)染miR101/miR-423模擬物的THP-1細胞上清液的外泌體***抑制Daoy細胞的增殖能力。我們用轉(zhuǎn)染miR-101-3p/miR-423-5p的THP-1單核細胞培養(yǎng)上清液進一步培養(yǎng)Daoy細胞，發(fā)現(xiàn)Daoy細胞的增殖能力受到***抑制，而在含GW4869的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后則無明顯變化。這些結(jié)果表明，對細胞增殖的影響至少部分歸因于外泌體的存在，并且GW4869處理可部分逆轉(zhuǎn)這些影響。與THP-1細胞類似，我們發(fā)現(xiàn)HMO6細胞也能分泌含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體， MB組織中存在CD68+細胞。***，我們從MB患者和健康對照者的外周血中分離CD14單核細胞。與對照組相比，在MB患者來源的CD14單核細胞培養(yǎng)上清中，外體miR-101-3p和miR-423-5p的表達更高?？傊?，這些結(jié)果表明MB患者的單核細胞-巨噬細胞分泌含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體，這些外泌體可以轉(zhuǎn)移到MB細胞。安徽課題細胞實驗可以上傳原始的fast文件。
為了證實IRE1在誘導(dǎo)前致瘤極化中的作用，將LysM-Cre Cas9小鼠產(chǎn)生的BMDM分別用含有scramble guide RNAs (gRNAs)或IRE1靶向gRNAs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，以產(chǎn)生對照BMDM或IRE1缺陷BMDM。與對照組BMDM相比，IRE1缺陷BMDM中IRE1表達較低，研究發(fā)現(xiàn)CM誘導(dǎo)的致瘤前極化在IRE1缺陷BMDM中被抑制，這表明CM誘導(dǎo)的IRE1活性增強了巨噬細胞中致瘤前極化。傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)力誘導(dǎo)劑，包括tunicamycin和thapsigargin在內(nèi)，均能誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，但不能使BMDM分化為致瘤表型。以上表明，與傳統(tǒng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相比，sXBP1控制的特殊信號級聯(lián)反應(yīng)是加強巨噬細胞對**細胞衍生因子反應(yīng)的免疫抑制活性所必需的。
3、細胞內(nèi)脂質(zhì)積累增加是抗27HC的一個特征，也和致瘤性有因果關(guān)系隨后探究27HC抵抗增加致瘤性和轉(zhuǎn)移性的生物化學(xué)機制。首先探討了27HC下調(diào)膽固醇/脂類合成的機制可能在抵抗細胞中被破壞的可能性。然而，基因表達分析顯示，在基礎(chǔ)條件下，編碼這些過程的關(guān)鍵調(diào)控步驟的mRNA變化不大，而且在敏感和耐藥細胞中，27HC仍然是它們表達的有效抑制劑。這表明在27HC抵抗細胞中，27HC對SREBP活性的負反饋保持完整。然而，使用BODIPY染色評估脂質(zhì)含量時，發(fā)現(xiàn)所有27HCR細胞都積累了大量的中性脂質(zhì)，以細胞質(zhì)脂滴(LDs)的形式儲存。提示為了抵消27HC對膽固醇和脂類合成的抑制作用，27HCR細胞可能增加了它們攝取中性脂質(zhì)的能力。為了直接解決這一問題，并確認積累的脂質(zhì)的身份，對HCC1954細胞的27HCR和27HCS衍生物進行了***的脂質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)細胞對27HC抗增殖作用的一個特點是脂質(zhì)攝取增加和脂質(zhì)生物合成的減少。阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
9.阻斷SUMOylation抑制EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
用si-NC或si-UBC9#1轉(zhuǎn)染的對照或ELNAT1過表達UM-UC-3細胞分泌的EVs處理HLECs，結(jié)果顯示過表達ELNAT1***促進了體外BCa細胞分泌的EVs誘導(dǎo)淋巴血管生成，而沉默UBC9逆轉(zhuǎn)了這一作用（Figure9A-C）。IVIS證明UM-UC-3-EVELNAT1增強了體內(nèi)腘窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而沉默UBC9抑制了這種作用（Figure9D,E）。UM-UC-3-EVELNAT1+siUBC9#1組的腘窩LNs體積比UM-UC-3-EVELNAT1組?。‵igure9F）。與UM-UC-3-EVVector組相比，UM-UC-3-EVELNAT1增加了小鼠足底**的淋巴管數(shù)量，而下調(diào)UBC9的表達導(dǎo)致EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的淋巴管數(shù)量逐漸減少（Figure9G,H）。此外，UM-UC-3-EVELNAT1+si-UBC9#1組的LN生成時間長于UM-UC-3-EVELNAT1組（Figure9I）。綜上所述，這些結(jié)果表明UBC9誘導(dǎo)的SUMOylation抑制EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的BCa淋巴管生成和LN轉(zhuǎn)移。 致力于醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的實驗技術(shù)服務(wù)和相關(guān)生物醫(yī)學(xué)課題的研究。安徽課題細胞實驗
上海英拜提供課題外包服務(wù)。湖北課題細胞實驗
TGFBR1是RMRP促進增殖、侵襲和遷移的關(guān)鍵靶點
在我們之前的研究中，我們發(fā)現(xiàn)TGFBR1與NSCLC的增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)，GSEA結(jié)果顯示RMRP可能參與了TGFB通路。TCGA數(shù)據(jù)庫顯示TGFBR1與RMRP表達呈正相關(guān)。因此，我們假設(shè)RMRP可能以TGFBR1為靶點。此外，在A549或H1299細胞中，RMRP敲低或過表達后，TGFBR1的表達發(fā)生改變。在A549細胞中，下調(diào)RMRP后，TGFBR1的表達降低，BAX/Bcl-2升高，而TGFBR1過表達后，效果相反。在H1299細胞中，過表達RMRP后，TGFBR1的表達增加，BAX/Bcl-2的表達減少，而TGFBR1敲低后則相反。此外，我們還探索了TGFBR1參與RMRP促進NSCLC生長和增殖的機制。結(jié)果顯示，TGFBR1過表達后，shRMRP對NSCLC細胞生長和增殖的抑制作用得到恢復(fù)，而TGFBR1敲低后則相反 湖北課題細胞實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標書申請：提供標書課題設(shè)計、撰寫，標書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標書均符合科研前沿?zé)狳c，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗