MELTF-AS1通過調(diào)節(jié)MMP14促進骨肉瘤轉(zhuǎn)移transwell實驗結果顯示，過表達MELTF-AS1可提高骨肉瘤細胞的遷移和侵襲能力。過表達MELTF-AS1，而過表達miR-485-5p或抑制MMP14，削弱了MELTF-AS1過表達引起的轉(zhuǎn)移能力的增加。免疫熒光分析顯示，過表達MELTF-AS1增加了Vimentin的表達，降低了E-cadherin的表達，共轉(zhuǎn)染miR-485-5p或MMP14siRNA消除了MELTF-AS1引起的變化。westernblot顯示MELTF-AS1過表達促進了MMP14下游靶點VEGF-A的表達。同樣，過表達miR-485-5p或抑制MMP14可減弱MELTF-AS1誘導的VEGF-A升高。上述結果表明MELTF-AS1通過調(diào)控MMP14影響轉(zhuǎn)移相關通路和蛋白，促進骨肉瘤細胞轉(zhuǎn)移。使用motif和CHIP-seq預測影響基因簇表達的轉(zhuǎn)錄因子。湖南課題實驗可參觀
越來越多的證據(jù)表明**相關巨噬細胞（TAMs）和外泌體在轉(zhuǎn)移前niche（生態(tài)位）形成中發(fā)揮重要作用。TAMs是轉(zhuǎn)移前生態(tài)位形成和結直腸*肝轉(zhuǎn)移(CRLM)的基礎。然而，**來源的外泌體miRNAs與TAMs相互作用的分子機制仍然很大程度上未知。本研究發(fā)現(xiàn)**來源外泌體miR-934可以誘導巨噬細胞M2極化，進而促進CRC的肝轉(zhuǎn)移。該文于2020年11月發(fā)表在《Journal of Hematology and Oncology》IF：11.059期刊上。
1、miR-934表達升高與CRLM進展及預后不良呈正相關
為了揭示參與CRLM的miRNA，作者基于TCGA數(shù)據(jù)庫比較了CRC的1期**和4期**的miRNA表達譜，發(fā)現(xiàn)miR-934是在4期**中高表達差異表達*****的miRNA（Fig.1a,b）。此外，作者將110個CRC組織按有無肝轉(zhuǎn)移分為兩組，發(fā)現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移組與未轉(zhuǎn)移組相比，組織和血清miR-934表達上調(diào)（Fig.1c,d）。接下來，為了研究miR-934在CRLM進展中的作用，使用ISH比較了miR-934在包含308個CRC樣本的組織芯片(TMA)中的表達，與正常粘膜組織相比，CRC組織中miR-934的表達明顯上調(diào);miR-934表達增加與T分期、M分期、晚期AJCC分期和**復發(fā)呈正相關，尤其是在肝轉(zhuǎn)移的病例中（Fig.1e）。
湖南課題實驗可參觀我們使用抗體陣列評估了表達PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細胞裂解液的應激反應和凋亡通路的活性。
TRIM25的RNA結合活性對于其對底物的泛素連接酶活性是必需的。構建了一個帶有FLAG標記RNA結合域（RBD）缺失突變體。TRIM25ΔRBD不影響IGF2BPs的蛋白質(zhì)水平，對IGF2BPs的泛素化水平?jīng)]有明顯影響，表明TRIM25完整的RBD對于IGF2BPs的有效泛素化和降解是必要的。這些結果表明，TRIM25通過泛素-蛋白酶體途徑促進NSCLC細胞中IGF2BPs的降解，并且TRIM25的RNA結合活性對其在底物泛素化中的作用至關重要。
已經(jīng)顯示，TRIM25使用RNA作為其靶標有效泛素化的支架。然后，探討了TRIM25對IGF2BPs的泛素連接酶活性是否取決于circNDUFB2的存在。 circNDUFB2的丟失顯示了TRIM25對IGF2BPs泛素化和降解的顯著減弱作用。進一步驗證實驗數(shù)據(jù)并檢查circNDUFB2是否充當支架來增強TRIM25與IGF2BP的結合，進行了Co-IP分析。在帶有circNDUFB2但沒有circNDUFB2-MUT過表達的A549細胞中，TRIM25和IGF2BP之間的關聯(lián)得到增強。由于circNDUFB2對RNA核酸外切酶的抗性，使用RNase A***會嚴重破壞相互作用。此外，在METTL3 / 14敲低后，IGF2BP的泛素化作用顯著降低。結果表明，circNDUFB2充當支架，以增強TRIM25和IGF2BPs之間的相互作用，隨后促進TRIM25介導的IGF2BPs泛素化和降解。
circNDUFB2過表后IGF2BPs的mRNA無***變化，蛋白質(zhì)水平***降低。此外，circNDUFB2突變體不影響IGF2BPs的蛋白質(zhì)水平。因此推測circNDUFB2可能通過相互作用使IGF2BP蛋白失穩(wěn)。發(fā)現(xiàn)circNDUFB2的過度表達***降低了IGF2BP蛋白的水平，這可以通過MG132（蛋白酶抑制劑）恢復。circNDUFB2***增加了IGF2BPs的泛素化水平，但這種作用因其突變而受損。這些結果表明circNDUFB2通過促進泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性。
TRIM25是介導IGF2BP泛素化的E3連接酶 動物建模模型實驗的整體服務。
ALKBH3參與了5’-tRF-GlyGCC的生物發(fā)生
LKBH3是一個tRNA去甲基化酶，*被鑒定為誘導tDRs的生成。為了研究ALKBH3是否參與了5’-tRF-GlyGCC的生物發(fā)生。首先，檢測5’-tRF-GlyGCC和ALKBH3在9種人CRC細胞系和人結腸黏膜上皮細胞NCM460中的表達。結果顯示，在大多數(shù)測量的CRC細胞系中，5’-tRF-GlyGCC和ALKBH3mRNA均***高于NCM460細胞。同樣，westernblot分析證實，在CRC細胞中，ALKBH3蛋白表達上調(diào)。此外，5’-tRF-GlyGCC的表達與測量的CRC細胞中ALKBH3的mRNA水平***正相關。
過表達ALKBH3可以增加5’-tRF-GlyGCC的表達。ALKBH3沉默降低了SW480、RKO和PENG-EBV細胞中5’-tRF-GlyGCC的水平。一致地，在RKO和SW480細胞中過表達ALKBH3可以增加5’-tRF-GlyGCC的表達，而在HCT15和HCT116細胞中，抑制ALKBH3的表達可以降低5’-tRF-GlyGCC的表達。證明了，tRNA去甲基化酶ALKBH3參與了CRC和血細胞中5’-tRF-GlyGCC的生物發(fā)生。 上海英拜提供課題外包服務。湖南課題實驗可參觀
產(chǎn)生關于環(huán)境影響疾病的病因和分子機制的可測試的假設。湖南課題實驗可參觀
抑制METTL14表達可增加ELMO1表達，促進MSC定向遷移
作者接下來構建了LV-METTL14載體（LV-M14），進一步在蛋白水平上證實了Lv-M14對MSC中METTL14的抑制作用，并且增強了ELMO1的表達，但未影響MSC增殖。m6ARIPPCR結果顯示，轉(zhuǎn)染lv-m14的MSC中ELMO1的m6A修飾水平明顯低于轉(zhuǎn)染lv-nc的MSC。與對照組相比，MSC中抑制METTL14的表達延長了ELMO1mRNA的半衰期。轉(zhuǎn)染Lv-M14后MSC中Rac1水平上調(diào)。接下來，作者研究抑制METTL14是否會影響MSC的遷移能力，在傷口愈合試驗中，Lv-M14組染色的遷移MSC數(shù)量和遷移面積遠高于對照組Lv-NC對照組。此外，轉(zhuǎn)染lv-m14的MSC裸鼠中生物發(fā)光區(qū)域也增加了。 湖南課題實驗可參觀
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗