2）阿爾茨海默病患者皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高
由于NOX4蛋白水平在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中升高，我們研究NOX4在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。我們用免疫熒光染色法檢測(cè)了AD患者或非AD供者大腦顳葉皮質(zhì)組織中GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖2A)。免疫熒光染色顯示，AD患者(AD)皮質(zhì)區(qū)分子層GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽性染色強(qiáng)度相對(duì)于非AD供者增加(圖2A、B)。此外，AD患者皮質(zhì)區(qū)ML中受損的GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞4-HNE陽性染色強(qiáng)度高于非AD供者(圖2A和B)。AD患者中4-HNE與GFAP亞細(xì)胞共定位陽性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖2C)。此外，相對(duì)于非AD供體，4-HNE在AD患者的NOX4陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖2D)。AD患者的NOX4和4-HNE陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于非AD供者***增加(圖2E)。這些結(jié)果提示AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高。 課題外包服務(wù)找英拜放心安心。單細(xì)胞相關(guān)課題課題省自然科學(xué)基金
二、YTHDF1缺乏可抑制胃*進(jìn)展和轉(zhuǎn)移
YTHDF1在不同胃*細(xì)胞株中的蛋白表達(dá)水平，遠(yuǎn)高于正常胃腺細(xì)胞GES-1。為了進(jìn)一步探討YTHDF1在胃*中的作用，采用了胃*細(xì)胞系、細(xì)胞系來源的異種移植(CDX)和PDX模型(圖2A)。首先，通過產(chǎn)生兩種穩(wěn)定的shRNA表達(dá)人胃*細(xì)胞株MGC-803和HGC-27，研究了YTHDF1的抑制作用，這兩種細(xì)胞株在所有被檢測(cè)的胃*細(xì)胞株中YTHDF1的表達(dá)相對(duì)較高(補(bǔ)充圖S2B)。YTHDF1基因敲除確實(shí)降低了胃*細(xì)胞的增殖(圖2B)。此外，在MGC-803和HGC-27細(xì)胞中YTHDF1敲除降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力(圖2C)。隨后通過皮下注射YTHDF1敲除的MGC-803細(xì)胞到免疫缺陷裸鼠，研究YTHDF1的抑制是否會(huì)影響體內(nèi)胃*的發(fā)生。 cancer免疫課題創(chuàng)新服務(wù)TRF測(cè)序課題整體服務(wù)。
關(guān)聯(lián)研究已將血液來源的microRNA(miRNA)的改變與結(jié)直腸*(CRC)聯(lián)系起來。miRNA譜可能在CRC進(jìn)展過程中多樣化，并在血液中反映CRC進(jìn)展水平。但是，尚無研究評(píng)估不同CRC階段血液中miRNA的變化。本研究對(duì)來自不同階段的健康供體、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸憩室炎和CRC患者（UICCstagesI/II,III,andIV）的80份血液樣本中的2,549種miRNA的譜進(jìn)行了基于微陣列的比較。
接下來通過RT-PCR進(jìn)行確認(rèn)，并對(duì)另外 36 份血液樣本中miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。與健康對(duì)照相比，有 179 個(gè) CRC 相關(guān) miRNA 的豐度差異。只有三個(gè)（miR-1225-5p、miR-1207-5p 和 miR-4459）在所有 CRC 階段表現(xiàn)出增加的水平。
對(duì)3個(gè)miRNA進(jìn)行通路分析，發(fā)現(xiàn)了miRNAs 以各種方式對(duì)幾種**相關(guān)通路起作用。
這項(xiàng)研究為改進(jìn) CRC 篩查的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供了線索，是***項(xiàng)提供 CRC 血液表達(dá)譜的研究，******評(píng)估了不同 CRC不同階段血液中 miRNA 的變化。 這也為其他疾病biomarker的研究提供了新的思路。
*細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體miR-138-5p下調(diào)巨噬細(xì)胞中KDM6B的表達(dá)
接下來探索miR-138-5p的水平如何增加。為此測(cè)量了巨噬細(xì)胞中初級(jí) (pri-) 和前體 (pre-) miR-138 的水平。發(fā)現(xiàn)處理后THP-1細(xì)胞中pri-或pre-miR-138沒有增加，表明miR-138-5p是外源供應(yīng)的。此外，與用 RNase A 加 Triton X-100 處理相比，當(dāng)我們用 RNase A 處理 MDA-MB-23 的 CM 時(shí)，miR-138-5p的水平?jīng)]有變化。這些發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞外miR-138-5p被包裹在膜結(jié)構(gòu)中的結(jié)論。通過觀察到與未處理的CM相比，GW4869 處理的CM或外泌體耗盡的 CM 中miR-138-5p的水平顯著降低，獲得了進(jìn)一步的證據(jù)，表明外泌體miR-138-5p參與了KDM6B表達(dá)的調(diào)節(jié)。這些結(jié)果表明 miR-138-5p 被包裹在乳腺*細(xì)胞釋放的外泌體中。 小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細(xì)胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)。
紡錘體裝配檢查點(diǎn)(SAC)作為一個(gè)傳感器的**的著絲點(diǎn)延遲有絲分裂進(jìn)入后期，直到適當(dāng)?shù)娜旧w分離得到保證。這一安全機(jī)制的破壞導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定和非整倍體，這是胚胎死亡、先天性出生缺陷、智力殘疾和**的遺傳原因。然而，盡管了解了控制SAC的基本機(jī)制，但信號(hào)通路如何直接與有絲分裂檢查點(diǎn)活動(dòng)相互作用和調(diào)節(jié)仍是未知的。在對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)中，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、生存和分化的多種信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)被***，這一過程***受到Ras家族小鳥苷三磷酸酶(GTPases)的調(diào)控。RIT1是一種ras相關(guān)的GTPase，調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和應(yīng)激反應(yīng)，是通過有絲分裂和適當(dāng)?shù)娜旧w分離及時(shí)進(jìn)展的必要條件。RIT1在有絲分裂期間從質(zhì)膜(PM)分離，并直接與SAC蛋白MAD2和p31conmet相互作用，該過程受周期蛋白依賴性激酶1 (CDK1)活性的調(diào)節(jié)。此外，致病水平的RIT1沉默了SAC，并通過將MAD2從有絲分裂檢查點(diǎn)復(fù)合體(MCC)中分離出來，加速了通過有絲分裂的轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，致病性RIT1抑制SAC促進(jìn)染色體分離錯(cuò)誤和非整倍體。我們的研究結(jié)果突出了RIT1與其他Ras GTPases相比的獨(dú)特功能，并闡明了信號(hào)通路與SAC之間通過一種新的調(diào)節(jié)機(jī)制的直接聯(lián)系。根據(jù)自身需要檢索相關(guān)基因或者化學(xué)品。焦亡生物相關(guān)課題創(chuàng)新服務(wù)
caspase-3抗體是一種***用于檢測(cè)凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。單細(xì)胞相關(guān)課題課題省自然科學(xué)基金
Lnc-DC促進(jìn)他莫昔芬耐藥
為了證實(shí)Lnc-DCgRNA對(duì)上調(diào)Lnc-DC表達(dá)的作用，從gRNA區(qū)域和支架區(qū)域設(shè)計(jì)了引物來檢測(cè)外源性的Lnc-DCgRNA水平。雖然該SAM文庫中包含5種不同的Lnc-DCgRNA，但選擇后只有Lnc-DCgRNA1(Lnc-DC1)高度富集。另外，只有LncDC1能夠***內(nèi)源性的Lnc-DC表達(dá)，這表明雖然不是所有的gRNA都能誘導(dǎo)內(nèi)源性基因表達(dá)，但那些能夠誘導(dǎo)內(nèi)源性基因表達(dá)的gRNA可以通過雌***剝奪等選擇手段富集。接下來，作者確定了Lnc-DC對(duì)他莫昔芬耐藥的貢獻(xiàn)。用它莫西芬處理Lnc-DC1細(xì)胞和載體對(duì)照細(xì)胞。如圖2C所示，Lnc-DC1細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的抗性是載體對(duì)照細(xì)胞的3倍。同樣，Lnc-DC1導(dǎo)致的凋亡率低于載體對(duì)照。此外，Lnc-DC1細(xì)胞顯示Bcl2和Bcl-xL水平升高，這可能是觀察到的對(duì)他莫昔芬耐藥的部分原因。Lnc-DC也降低了PARP和Caspase3的裂解水平。 單細(xì)胞相關(guān)課題課題省自然科學(xué)基金
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1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)