5、外泌體miR-934通過(guò)下調(diào)PTEN表達(dá)和***PI3K/AKT信號(hào)通路誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化
進(jìn)一步探索**來(lái)源的外泌體miR-934誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化的機(jī)制。miR-934序列與PTEN的3'-UTR序列存在比對(duì)，提示miR-934可能靶向PTEN誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化（Fig.5a）。如Fig.5b所示，將miR-934mimics或anti-miR-934及其控制載體轉(zhuǎn)染到PMA處理的THP-1細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)分別轉(zhuǎn)染miR-934mimics或anti-miR-934和PTEN野生型結(jié)合位點(diǎn)組中PTEN的3’-UTR熒光素酶活性***降低或升高（Fig.5b）。有趣的是，當(dāng)細(xì)胞與轉(zhuǎn)染了anti-miR-934、miR-934mimics或其對(duì)照載體的HCT-8或HT29細(xì)胞的外泌體共培養(yǎng)時(shí)，熒光素酶活性模式顯示出與上述趨勢(shì)相同（Fig.5c）。此外，PMA處理的THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-934mimics或anti-miR-934，與各自的對(duì)照細(xì)胞相比，分別在mRNA和蛋白水平下調(diào)或上調(diào)了PTEN的表達(dá)（Fig.5d）。類似的，分別用轉(zhuǎn)染anti-miR-934或miR-934mimics的CRC細(xì)胞的外泌體孵育PMA處理的THP-1細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PTEN，PI3K/AKT的表達(dá)明顯高于或低于各自的對(duì)照組（Fig.5e,f）。這些表明在PMA處理的THP-1細(xì)胞中，外泌體來(lái)源的miR-934可以通過(guò)靶向其3'-UTR和***PI3K/AKT通路來(lái)下調(diào)PTEN的表達(dá)。 英拜提供分子生物學(xué)以及免疫病理相關(guān)實(shí)驗(yàn)。重慶胃腸道科研
然而，在單細(xì)胞方法中，尚未出現(xiàn)一種適用于所有三種模式的統(tǒng)一方法，這種方法可以應(yīng)用于高度特定的功能免疫細(xì)胞類型。我們系統(tǒng)地測(cè)試了PBMCs的全細(xì)胞和核純化和制備方法，以克服以往的分析只限于測(cè)量細(xì)胞表面的核成分(ATAC和核rna)或蛋白質(zhì)的局限性。我們發(fā)現(xiàn)完整的透性細(xì)胞的scATAC-seq表現(xiàn)非常好，在某些測(cè)量中超過(guò)了傳統(tǒng)的細(xì)胞核scATAC-seq(圖1b)。這一發(fā)現(xiàn)使得一種類似于轉(zhuǎn)錄組和表位的細(xì)胞索引(CITE-seq)的新方案能夠測(cè)量表面蛋白豐度和染色質(zhì)可及性:染色質(zhì)景觀和表位的整合細(xì)胞索引(ICICLE-seq，圖1a和3)。***，我們證明了我們優(yōu)化的可滲透細(xì)胞方法可以與基于液滴的多組學(xué)平臺(tái)相結(jié)合，從而能夠同時(shí)測(cè)量細(xì)胞的三個(gè)不同的分子隔間:mRNA(通過(guò)scRNA-seq)，蛋白質(zhì)(使用寡聚標(biāo)記抗體)和DNA(通過(guò)scATAC-seq)，我們根據(jù)轉(zhuǎn)錄、表位和可及性將其稱為TEA-seq(圖4)?？傊瑢?duì)單細(xì)胞水平上基因調(diào)控和表達(dá)的分子基礎(chǔ)有了新的、更統(tǒng)一的看法。熱休克蛋白科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)英拜注重客戶的隱私。
7）USP35敲除增強(qiáng)肺*細(xì)胞的化療敏感性
鑒于USP35在肺*細(xì)胞中的高表達(dá)及其在調(diào)節(jié)鐵死亡中的作用，我們**終評(píng)估了USP35沉默是否能使肺*細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感。如圖9A-C所示，USP35缺乏的H460和H1299細(xì)胞在體外對(duì)DDP和PTX的毒性作用更敏感，細(xì)胞活力和定殖的降低證明了這一點(diǎn)。相應(yīng)地，接種USP35缺陷*細(xì)胞的荷瘤小鼠經(jīng)DDP或PTX***后**體積和重量均減少(圖9D，E)。酪氨酸激酶抑制劑(TKI)已成為常規(guī)化療的替代藥物，并為肺*患者提供了***的生存益處。然后，我們?cè)贖460和H1299細(xì)胞中測(cè)量了USP35敲除和TKI之間的協(xié)同效應(yīng)，數(shù)據(jù)表明USP35沉默在體內(nèi)和體外使H460和H1299細(xì)胞對(duì)GFB化療敏感(圖9F-H)。
接下來(lái)，我們合成了野生型HuR蛋白(WT)和HuR蛋白的截短突變體（即分別為單獨(dú)HuR的RNA識(shí)別基序(RRM)1的突變體B1、單獨(dú)HuR RRM2的突變體B2和單獨(dú)HuR RRM3的突變體B3）（圖4 C）。同時(shí)，我們?cè)O(shè)計(jì)并合成了生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，分別特異性靶向lnc-PMIF的中心-莖環(huán)和生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，特異性靶向之前報(bào)道的與HuR蛋白相互作用的β-actin mRNA的序列。RNA電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)生物素標(biāo)記的lnc-PMIF探針與WT HuR或截短突變體B3共孵育時(shí)，才能檢測(cè)到lnc-PMIF-HuR復(fù)合物，這表明HuR的RRM3可介導(dǎo)HuR和lnc-PMIF之間的相互作用。lnc-PMIF與β-actin mRNA競(jìng)爭(zhēng)與HuR相互作用。過(guò)表達(dá)HuR-RRM3后細(xì)胞中β-actin的mRNA和蛋白表達(dá)下降***上調(diào)，遷移活性增強(qiáng)。所有這些表明lnc-PMIF可與HuR的RRM3結(jié)合，中斷HuR-β-actin的相互作用，抑制β-actin的表達(dá)，抑制OPC的遷移。英拜的員工福利待遇很好。
已有研究表明，甘氨酸結(jié)構(gòu)域和Pur-α中的PUR重復(fù)結(jié)構(gòu)域可能負(fù)責(zé)招募RNA分子，因此作者構(gòu)建了Pur-α全長(zhǎng)和截?cái)噘|(zhì)粒。RIP檢測(cè)結(jié)果表明PUR重復(fù)域(66-246aa)與CircCwc27直接結(jié)合。作者進(jìn)一步研究了CircCwc27對(duì)Pur-α的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CircCwc27的下調(diào)并不影響總Pur-αmRNA和蛋白水平，但CircCwc27引起的Pur-α沉淀的水平***上調(diào)。與野生型小鼠相比，APP/PS1和APP/PS1-lv-sh-Circon小鼠中CircCwc27沉淀的Pur-α***上調(diào)。在APP/PS1小鼠中敲低CircCwc27，CircCwc27和Pur-α的結(jié)合***降低。RIP測(cè)定也得到了類似的結(jié)果。由于CircCwc27主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，并且在AD中上調(diào)，我們探討了增強(qiáng)CircCwc27和Pur-α之間的結(jié)合是否影響了Pur-α的分布。免疫印跡結(jié)果顯示，APP/PS1小鼠中Pur-α在細(xì)胞核中的表達(dá)明顯減少，而在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)明顯增加。注射LV-shCircCwc27可***促進(jìn)Pur-α的分布。Th1/Th2細(xì)胞失衡也是結(jié)腸炎的一個(gè)重要特征。結(jié)腸通透性科研中標(biāo)率高
大黃酸處理改變腸道菌群組成。重慶胃腸道科研
乳腺*(BrCa)是世界范圍內(nèi)**常見(jiàn)的**，診斷為IV期患者的5年相對(duì)生存率有所下降。晚期BrCa被認(rèn)為是不可***的，目前仍缺乏有效的***策略。識(shí)別和表征新的**抑制基因?qū)τ诮⒂行У耐砥贐rCa預(yù)后生物標(biāo)志物或***靶點(diǎn)非常重要。2021年3月發(fā)表于Theranostics（IF=11.556）的文獻(xiàn)“Tumor suppressor DRD2 facilitates M1 macrophages and restricts NF-κB signaling to trigger pyroptosis in breast cancer”對(duì)此展開(kāi)了研究。在本文中，在BrCa中，DRD2被發(fā)現(xiàn)由于啟動(dòng)子甲基化而下調(diào)。DRD2的高表達(dá)與更長(zhǎng)的生存時(shí)間正相關(guān)，尤其是在HER2陽(yáng)性患者中。DRD2還能促進(jìn)BrCa細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。DRD2異位表達(dá)***抑制BrCa**發(fā)生。在體內(nèi)和體外，DRD2也能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死。DRD2通過(guò)與β-arrestin2、DDX5和eEF1A2相互作用抑制NF-κB信號(hào)通路的***。有趣的是，DRD2還調(diào)節(jié)微環(huán)境，促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1極化，并觸發(fā)GSDME執(zhí)行的焦亡。重慶胃腸道科研
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
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