現(xiàn)今研究表明tRNA-derivedsmallnoncodingRNAs（sncRNAs）主要分為兩類：tRNAhalves(tiRNAs)和fragments(tRFs)。前者在人類實(shí)體**中的的生物學(xué)功能吸引了越來(lái)越多的關(guān)注，但是其在**發(fā)生中的生物學(xué)機(jī)制仍知之甚少。tiRNAs和剪切相關(guān)蛋白之間的相關(guān)作用更是為未可知。本研究***發(fā)現(xiàn)一個(gè)5’-tRNAhalves，即tiRNA-Gly通過(guò)與RBM17結(jié)合誘導(dǎo)可變剪切進(jìn)而促進(jìn)**狀甲狀腺*（PTC）的增殖和遷移。本文于2021年7月發(fā)表在影響因子7.068的《JournalofExperimentalandClinicalCancerResearch》期刊上。m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。細(xì)胞表面標(biāo)志物科研中標(biāo)率高
2、miR-138-5p介導(dǎo)*細(xì)胞誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞KDM6B表達(dá)抑制構(gòu)建了miR-138-5p過(guò)表達(dá)的乳腺*細(xì)胞系，取其培養(yǎng)基與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，結(jié)果巨噬細(xì)胞中miR-138-5p表達(dá)***上調(diào)，同時(shí)KDM6B的表達(dá)***下降。證實(shí)miR-138-5p介導(dǎo)*細(xì)胞誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞KDM6B表達(dá)抑制。
3、*細(xì)胞來(lái)源的外泌體miR-138-5p下調(diào)KDM6B的表達(dá)
隨后為了判定上述巨噬細(xì)胞中miR-138-5p表達(dá)上調(diào)的原因，檢測(cè)了巨噬細(xì)胞中原代(pri-)和前體(pre-)miR-138的水平。結(jié)果顯示共培養(yǎng)和對(duì)照組間原代和前體miR-138的水平?jīng)]有差異，表明miR-138-5p是外源供應(yīng)的（圖1A）。此外，使用RNaseA處理miR-138-5p水平不變，使用TritonX-100其水平***下降。提示miR-138-5p被膜狀結(jié)構(gòu)包裹（圖1B）。進(jìn)一步分析表明使用外泌體抑制劑GW4869處理組和外泌體刪除組的培養(yǎng)基中miR-138-5p的表達(dá)***下降（圖1C）。表明外泌體來(lái)源于乳腺*細(xì)胞。 江蘇分子毒理通路發(fā)現(xiàn)者科研上海英拜生物設(shè)有專業(yè)的武漢技術(shù)中心。
miR-144在鼻咽*細(xì)胞釋放的EVs中高度富集
接下來(lái)，為了確定**分泌的miR-144是否具有通過(guò)EVs細(xì)胞外通信影響**-微環(huán)境串?dāng)_的能力，我們首先從C666-1、SUNE1和NP69細(xì)胞中分離EVs。透射電子顯微鏡(TEM)觀察發(fā)現(xiàn)，納米顆粒的直徑為30~100nm，每個(gè)囊泡呈杯狀(圖2A)。免疫印跡顯示，與相應(yīng)的細(xì)胞裂解液相比，這些來(lái)自C666-1、SUNE1和NP69細(xì)胞的納米顆粒中存在常見的EVs特異性標(biāo)記物，包括CD9、CD63和TSG101，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白calnexin明顯缺失(圖2B)。納米顆粒示蹤分析(NTA)進(jìn)一步顯示EV的平均直徑為94.1nm(C666-1細(xì)胞)、90.5nm(SUNE1細(xì)胞)和68.5nm(NP69細(xì)胞)(圖2C)。此外，我們檢測(cè)了C666-1、SUNE1和NP69細(xì)胞衍生EVs的表面電荷(圖2D)。添加RNase對(duì)這三種細(xì)胞系的EVs中miR-144的表達(dá)沒(méi)有影響，而TritonX-100處理的細(xì)胞中miR-144的表達(dá)明顯降低，說(shuō)明細(xì)胞膜對(duì)miR-144的表達(dá)具有保護(hù)作用(圖2E)。結(jié)果表明，這三種細(xì)胞系的EVs具有穩(wěn)定的膜態(tài)，對(duì)RNA具有保護(hù)作用。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)EVs中miR-144的表達(dá)，結(jié)果顯示miR-144在鼻咽*細(xì)胞EVs中表達(dá)高水平(圖2F)。這些發(fā)現(xiàn)為miR-144在npc細(xì)胞來(lái)源的ev中上調(diào)提供了證據(jù)。
miR-335-5p通過(guò)靶向RASA1促進(jìn)CRC細(xì)胞的遷移和侵襲
作者使用TargetScan、miRDB和miRTarBasemiR-335-5p三種生物信息學(xué)算法預(yù)測(cè)潛在的靶基因。從TCGA下載的數(shù)據(jù)分析表明，RASA1的表達(dá)與CRC患者的miR-335-5p水平顯著相關(guān)。通過(guò)生物信息學(xué)分析確定的RASA13'UTR中的假定的miR-335-5p靶位點(diǎn)。使用野生型(WT)RASA13'UTR在SW480細(xì)胞中進(jìn)行的熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染miR-335-5p模擬物后熒光素酶活性顯著降低。相比之下，突變(mut)RASA1序列的報(bào)告基因的熒光素酶活性不受miR-335-5p的影響，表明miR-335-5p直接靶向RASA13'UTR的特定區(qū)域。為了確定miR-335-5p對(duì)RASA1的影響，使用Lipofectamine3000將miR-335-5p模擬物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到SW480和SW620細(xì)胞中。用定量逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行評(píng)估表明mRNARASA1和蛋白質(zhì)水平在模擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞中顯著下調(diào)。此外，miR-335-5p轉(zhuǎn)染增加了Ras蛋白的表達(dá)。miR-335-5p的上調(diào)可能伴隨著EMT***，如SW480和SW620細(xì)胞中波形蛋白表達(dá)增加和E-鈣粘蛋白表達(dá)降低所證明的。此外，miR-335-5p水平升高顯著促進(jìn)遷移和侵襲，而用miR-335-5p抑制劑抑制miR-335-5p顯著抑制CRC細(xì)胞的遷移和侵襲。 增加乳酸桿菌水平導(dǎo)致尿酸水平下降。
6）FPN蛋白在肺*細(xì)胞中的穩(wěn)定性需要USP35
USP35屬于DUBs家族，在控制各種蛋白質(zhì)的Ub依賴性降解中起關(guān)鍵作用。此外，F(xiàn)PN泛素化和隨后的內(nèi)吞作用導(dǎo)致鐵超載和鐵死亡。因此，我們研究了USP35是否通過(guò)影響其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性來(lái)調(diào)節(jié)FPN表達(dá)。如圖8A所示，USP35敲除增加，而USP35過(guò)表達(dá)降低泛素化FPN水平。用MG132蛋白酶體抑制劑***后，shUSP35***細(xì)胞的全部或膜裂解物中FPN水平的降低被阻止(圖8B)。隨后，我們檢查了USP35是否是FPN的直接結(jié)合伙伴。IP分析的數(shù)據(jù)揭示了內(nèi)源性USP35和FPN之間的聯(lián)系(圖8C)?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明USP35可以直接與FPN相互作用，并作為deubiquitinase發(fā)揮作用，以保持其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。 英拜有一支高精尖的團(tuán)隊(duì)。豐度科研
專注于生命科學(xué)內(nèi)的前沿研究。細(xì)胞表面標(biāo)志物科研中標(biāo)率高
4）circPDE4B促進(jìn)了RIC8A和MID1之間的三元配合物的形成，促進(jìn)了RIC8A的降解
我們?cè)噲D鑒定參與RIC8A蛋白酶體降解的E3連接酶。有趣的是，MS結(jié)果顯示circPDE4B也結(jié)合了兩個(gè)E3連接酶，包括RNF2和MID1。然而，由于RNF2定位于細(xì)胞核內(nèi)，我們選擇MID1進(jìn)行進(jìn)一步研究。實(shí)際上，通過(guò)免疫沉淀分析，MID1被發(fā)現(xiàn)與RIC8A結(jié)合(圖4A)。RIC8A和MID1的免疫熒光染色也證實(shí)了它們?cè)贖Cs***定位(圖4B)。IP結(jié)果表明，MID1敲低有效地削弱了RIC8A和MID1過(guò)表達(dá)的泛素化作用，增加了RIC8A泛素化作用(圖4C)。Co-IP實(shí)驗(yàn)也顯示，與對(duì)照組相比，circPDE4B敲低細(xì)胞中RIC8A和MID1的結(jié)合減少，而過(guò)表達(dá)circPDE4B則有相反的作用(圖4D)。 細(xì)胞表面標(biāo)志物科研中標(biāo)率高
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