CircACTN4促進(jìn)體內(nèi)異種移植**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移
為了評(píng)估circACTN4在體內(nèi)的致*作用，通過(guò)皮下注射和尾靜脈注射在裸鼠中建立人BC細(xì)胞**模型。用過(guò)表達(dá) circACTN4 慢病毒或 circACTN4 shRNA 慢病毒及其對(duì)照***的 MCF-7 細(xì)胞接種雌性裸鼠。結(jié)果表明，circACTN4過(guò)表達(dá)組異種移植**的體積和重量明顯大于對(duì)照組，而circACTN4敲低顯著抑制了**生長(zhǎng)。與對(duì)照組相比，circACTN4的上調(diào)明顯增加了轉(zhuǎn)移性肺結(jié)節(jié)的數(shù)量，而circACTN4沉默顯著抑制了自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移，侵襲性**細(xì)胞較少。此外，circACTN4 的過(guò)表達(dá)可以顯著促進(jìn)**血管生成，而 circACTN4 敲低顯著降低**微血管密度。WB結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)或沉默circACTN4組的異種移植**組織中MYC的蛋白質(zhì)水平分別顯著增加或減少。 上海英拜生物的動(dòng)物建模實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)科研服務(wù)兩年
為了闡明miR-934是否主要來(lái)源于CRC細(xì)胞的外泌體，使用GW4869抑制CRC細(xì)胞的外泌體分泌，發(fā)現(xiàn)miR-934在CRC細(xì)胞來(lái)源的外泌體中的表達(dá)水平明顯高于外泌體耗盡的CRC細(xì)胞（Fig.2h）。此外，采用qPCR分析miR-934在總CM、外泌體耗盡CM(超離心耗竭)和外泌體中的表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-934在總CM或外泌體中的表達(dá)***高于外泌體缺失的CM（Fig.2i）。此外，使用qPCR研究了上述四種CRC細(xì)胞系的外泌體中miR-934的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)外泌體中miR-934的表達(dá)模式與CRC細(xì)胞CM中的表達(dá)模式一致（Fig.2j）。以上結(jié)果表明miR-934主要包裹在CRC細(xì)胞來(lái)源的外泌體中。江蘇DNA 損傷信號(hào)通路科研m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。
LC3陽(yáng)性囊泡在質(zhì)膜損傷后在修復(fù)部位積聚用激光照射*細(xì)胞MCF7，致使細(xì)胞膜上形成小孔。使用膜不可滲透的FM1-43染料測(cè)量膜完整性，發(fā)現(xiàn)在Ca2+存在下，細(xì)胞能夠在20到30s內(nèi)修復(fù)它們的質(zhì)膜(Fig.1,AandB,left)；在缺乏Ca2+的培養(yǎng)基中受損的細(xì)胞無(wú)法修復(fù)并繼續(xù)吸收細(xì)胞不可滲透的染料(Fig.1B,right)。使用穩(wěn)定表達(dá)融合蛋白增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)-LC3的MCF7細(xì)胞研究激光照射后自噬是否參與該過(guò)程，結(jié)果顯示，LC3陽(yáng)性點(diǎn)在損傷后大約8-10min開(kāi)始在修復(fù)部位形成（Fig.1C）；在未損傷區(qū)域中LC3陽(yáng)性點(diǎn)未增加（Fig.1D）；LC3依賴(lài)于ATG7（Fig.1E-H）。
WB結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)或沉默circACTN4組的異種移植**組織中MYC的蛋白質(zhì)水平分別顯著增加或減少。生物發(fā)光成像結(jié)果顯示，在circACTN4過(guò)表達(dá)組中檢測(cè)到更強(qiáng)和更多的生物發(fā)光信號(hào)，而circACTN4沉默組中的小鼠與對(duì)照組相比顯示出更少的生物發(fā)光轉(zhuǎn)移數(shù)量。與對(duì)照組相比，circACTN4 過(guò)表達(dá)組的小鼠總體存活率較低，肝轉(zhuǎn)移范圍更廣。***，我們通過(guò) IHC 確定了 circACTN4 對(duì)其靶蛋白 MYC、下游細(xì)胞周期相關(guān)蛋白 CDK4 和 CCND2 以及細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白 Ki67 的影響。結(jié)果表明，circACTN4的上調(diào)可以增加**組織中MYC、CDK4、CCND2和Ki67的表達(dá)，而circACTN4的沉默降低了這些蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。綜上所述，上述結(jié)果進(jìn)一步證明了circACTN4在乳腺*中的致*作用，提示circACTN4可以通過(guò)***原*基因MYC促進(jìn)乳腺*的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。上海英拜生物有經(jīng)驗(yàn)豐富的科研團(tuán)隊(duì)。
MiR-101-3p和MiR-423-5p在體外MB細(xì)胞中作為**抑制因子發(fā)揮作用
我們使用CCK-8分析了miR-101-3p和miR-423-5p對(duì)MB細(xì)胞增殖能力的影響。與對(duì)照組相比，Daoy和D283Med細(xì)胞中miR-101-3p或miR-423-5p的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致**細(xì)胞增殖率降低。通過(guò)CCK-8分析，我們進(jìn)一步評(píng)估了添加來(lái)自MB患者血漿的外泌體對(duì)Daoy和D283Med細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明，兩種細(xì)胞系的**細(xì)胞的增殖能力均受到***抑制。接下來(lái)，我們研究了miR-101-3p和miR-423-5p對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。與陰性對(duì)照組相比，任一miRNA的過(guò)表達(dá)都導(dǎo)致Daoy和D283Med細(xì)胞的凋亡率***增加。此外，miR-101-3p或miR-423-5p的過(guò)表達(dá)抑制Daoy細(xì)胞的侵襲和遷移能力。綜上所述，這些數(shù)據(jù)證實(shí)miR-101-3p和miR-423-5p在MB細(xì)胞中均發(fā)揮抗**作用，并且任一miRNA的上調(diào)均可抑制MB細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，同時(shí)也可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 英拜提供分子生物學(xué)以及免疫病理相關(guān)實(shí)驗(yàn)。深圳人神經(jīng)束膜細(xì)胞科研
N6甲基腺苷（m6A）是一種常見(jiàn)的真核細(xì)胞mRNA修飾。蛋白質(zhì)科研服務(wù)兩年
AP損傷后胰腺巨噬細(xì)胞的表型變化
A動(dòng)物模型使用雨蛙素誘導(dǎo)，。為了研究AP后的修復(fù)/再生過(guò)程，用更高劑量的雨蛙素（100μg/kg，每小時(shí)10次）誘導(dǎo)AP，并在一周內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)收集胰腺。接受雨蛙素誘導(dǎo)***的AP小鼠在24小時(shí)后顯示出腺泡壞死和白細(xì)胞浸潤(rùn)的組織學(xué)跡象以及血清淀粉酶升高。第3天出現(xiàn)典型的腺泡-導(dǎo)管化生(ADM)結(jié)構(gòu)，第7天左右迅速恢復(fù)正常腺泡。
為了檢測(cè)免疫細(xì)胞的比例，分離并分析了AP誘導(dǎo)后的胰腺白細(xì)胞。發(fā)炎的胰腺內(nèi)**豐富的免疫細(xì)胞是巨噬細(xì)胞（CD11b+F4/80+CD11c-）。流式細(xì)胞術(shù)分析的胰腺巨噬細(xì)胞數(shù)量在第1天和第3天顯著增加。根據(jù)F4/80水平，胰腺巨噬細(xì)胞從第1天到第3天逐漸成熟。巨噬細(xì)胞在組織中的積累以?xún)煞N方式發(fā)生：?jiǎn)魏思?xì)胞的募集和駐留巨噬細(xì)胞的增殖。AP急性炎癥期的大多數(shù)巨噬細(xì)胞來(lái)自單核細(xì)胞的浸潤(rùn)。根據(jù)我們的研究結(jié)果，與第1天相比，第3天的胰腺巨噬細(xì)胞具有更高的增殖能力。 蛋白質(zhì)科研服務(wù)兩年
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7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)