另外，相對于對照組，在生理條件下，單獨使用siFth不能顯著增加ROS的產(chǎn)生。對鐵死亡的抗性與抑制BODIRY-C11氧化有關(guān)。與上述ROS結(jié)果一致。測量了鐵死亡的幾種推定生物標志物，包括xCT，Cox2和4HNE表達。如預(yù)期的那樣，與對照組+刮擦損傷組相比，在siFth轉(zhuǎn)染的HT-22細胞中，刮擦損傷的xCT表達顯著下降，而Cox-2和4HNE的表達顯著增加。重要的是，與未經(jīng)***的siFth組相比，用褪黑素處理siFth轉(zhuǎn)染的HT-22細胞在刮傷后未能顯著改變xCT，Cox2和4HNE的表達。另外，在生理條件下，單獨的siFth與對照組之間上述蛋白質(zhì)的表達沒有顯著差異。這些結(jié)果表明，用siFth轉(zhuǎn)染的HT-22細胞易受機械性刮擦損傷誘導的脂質(zhì)過氧化和鐵死亡的影響，而褪黑素在統(tǒng)計學上并未減輕損傷后的鐵死亡，并且siFth不會影響褪黑素受體的表達。2108年俞立團隊明確闡述了收集和檢測遷移體的實驗方法。北京科研贈送提供技術(shù)路線
在Fth- KO小鼠中， TBI后褪黑素對神經(jīng)的保護作用被**取消
為了進一步探索神經(jīng)元Fth的喪失是否影響褪黑素對TBI誘導的鐵死亡的影響，測量了鐵死亡的幾種假定的生物標志物。發(fā)現(xiàn)***KO小鼠上皮層非血紅素鐵的水平?jīng)]有影響。令人驚訝的是，盡管褪黑素***的和未***的Fth -KO小鼠的Tfr1 mRNA和蛋白表達水平?jīng)]有顯著差異，但是在褪黑素***的小鼠中，觀察到Fpn mRNA和蛋白表達水平顯著增加Fth- KO小鼠。值得注意的是，與未***的Fth- KO小鼠相比，用褪黑素***Fth- KO小鼠未能顯著改變mRNA（Slc7a11，Ptgs2）和蛋白質(zhì)（xCT，Cox2、4HNE）的表達。另外，用褪黑素***Fth- KO小鼠并沒有統(tǒng)計學上降低GSH和MDA以及4HNE的水平，和FJB陽性細胞的數(shù)目。這些結(jié)果表明褪黑素沒有統(tǒng)計學上減少TBI引起的鐵死亡和神經(jīng)元變性。 湖北科研細胞實驗大黃酸處理對正常組沒有任何明顯的副作用或促炎反應(yīng)。
TDP-43是一種主要的核DNA/RNA結(jié)合蛋白，穿梭于細胞核和細胞質(zhì)之間。TDP-43調(diào)控RNA處理，如基因轉(zhuǎn)錄、mRNA剪接、mRNA穩(wěn)定性、mRNA運輸和定位，病理突變破壞RNA代謝。在許多神經(jīng)退行性疾病中，TDP-43偏離細胞核并聚集在細胞質(zhì)中。細胞質(zhì)TDP-43聚集體被認為是神經(jīng)退行性變的重要機制，因為這些聚集體被異常磷酸化和泛素化。有多種機制被提出來解釋神經(jīng)退行性疾病中TDP-43異常的細胞質(zhì)積累和TDP-43病理的進行性擴散。
TDP-43包含一個類似朊病毒的低復雜度域，并具有一個本質(zhì)上的無序區(qū)域(IDR)，使TDP-43易于聚集。RNA結(jié)合蛋白(rbp)中的IDRs被認為在核糖體蛋白顆粒(如p -小體、應(yīng)激顆粒和神經(jīng)元顆粒)的組裝中起關(guān)鍵作用，提示rbp的突變或異常聚集可能會破壞這些顆粒的動力學。此外，rbp中的IDRs如TDP-43經(jīng)歷了液-液相分離，TDP-43的病理突變改變了液-液相分離，這可能有助于疾病進程。因此，rbp如TDP-43的改變可能是神經(jīng)退行性變的重要指標。然而，盡管這些機制可能解釋了TDP-43病理突變在神經(jīng)退行性疾病中的作用，但TDP-43如何在無突變的情況下聚集形成并導致神經(jīng)退行性疾病，如反復創(chuàng)傷患者的大腦，目前尚不清楚。
為了進一步確定過表達的Caspase-11是否足以加重MCD誘導的NASH，我們給小鼠使用了Caspase-1抑制劑belnacasan。belnacasan******降低MCD***對照組小鼠的脂肪變性評分(圖8H)。相比之下，belnacasan***不影響MCD處理的Caspase-11過表達小鼠的脂肪變性評分。同樣，belnacasan處理***降低了MCD處理對照組小鼠的腫脹評分(圖8I)、血清ALT(圖8J)、AST(圖8K)和肝臟甘油三酯(圖8L)，而MCD處理過表達Caspase-11小鼠的這些指標沒有明顯影響。綜上所述，過表達Caspase-11足以促進MCD誘導的小鼠脂肪性肝炎的嚴重程度。
結(jié)論MCD處理后Caspase-11缺陷小鼠的肝損傷、纖維化和炎癥明顯減輕。Caspase-11缺失可改善NASH患者的肝細胞焦亡。 大黃酸可以改變腸道菌群組成。
3、MAO-A促進巨噬細胞免疫抑制極化
為了研究MAO-A對巨噬細胞極化的調(diào)控，體外培養(yǎng)MaoaWT和KOBMDMs，并通過添加***刺激（IL4和IL-13）使這些巨噬細胞向免疫抑制表型極化（圖3a）。觀察到，在M-CSF誘導的巨噬細胞分化過程中，MaoamRNA的表達在Maoa野生型BMDMs中有明顯的誘導作用，Maoa在成熟的BMDMs中表達趨于穩(wěn)定，并維持IL-4/IL-13誘導的免疫抑制極化（圖3b-c）。MaoaKOBMDMs中MAO-A表達未檢測到，證實了其MAO-A缺失基因型（圖3b,d）。與野生型巨噬細胞相比，在IL-4/IL-13刺激下，MaoaKO巨噬細胞表現(xiàn)出更低的免疫抑制表型，這在其免疫抑制標記物的表達減少中得到了證明（圖3e-g）。在巨噬細胞/T細胞共培養(yǎng)試驗中（圖3h），IL-4/IL-13極化的MaoaKO巨噬細胞在抗CD3/CD28刺激下，與免疫抑制表型的減弱一致，其對野生型CD8+T細胞的抑制作用減弱（圖3i-k）。 這些數(shù)據(jù)表明大黃酸***可以消除尿酸引起的腸道通透性增強。河南科研整體服務(wù)
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一、Pten398A加速MMTVneu驅(qū)動的乳腺**發(fā)生
為了研究ATM磷酸化PTEN的體內(nèi)功能，我們在小鼠中設(shè)計了一個敲入等位基因，其中398位絲氨酸取代了丙氨酸(Pten398A)。Pten398A/+和Pten398A/398A小鼠存活，發(fā)育明顯正常。為了研究atm依賴的PTEN磷酸化在乳腺*中的可能作用，我們在小鼠乳腺**病毒(MMTV)啟動子/增強子轉(zhuǎn)錄控制下表達滅活neu (Erbb2)融合基因的小鼠背景下培養(yǎng)了Pten398A等位基因。在這個成熟的模型中，MMTVneu基因在正常乳腺上皮中低水平表達，導致乳腺**的發(fā)展，據(jù)報道中位發(fā)生率為205天。Pten+/+;MMTVneu小鼠發(fā)生了預(yù)期潛伏期的乳腺**，顯示了233天的中位生存期(圖1A)。
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1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗