3）IGF-1信號(hào)在Pex誘導(dǎo)的HSC活化和肝纖維化中至關(guān)重要
為了進(jìn)一步探索Pex調(diào)控HSC行為的機(jī)制，我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測(cè)序基因表達(dá)譜(圖3A)。在差異表達(dá)基因中，我們觀察到41個(gè)重疊的上調(diào)基因在Pan02exo組與Npex組和KPCexo組與Npex組之間存在部分交集(圖3B)。主要涉及的基因參與細(xì)胞外空間、細(xì)胞外區(qū)域和ECM(圖3C)，表明Pex調(diào)節(jié)HSC的ECM分泌。此外，GO和KEGG通路分析顯示，IGF-1及其下游PI3K/AKT是受Pex影響的排名比較高的信號(hào)通路(圖3D，E)。westernblot分析支持了Pex***增加HSC中IGF-1R、IRS-1和AKT磷酸化的發(fā)現(xiàn)(圖3F)。當(dāng)使用IGF-1R抑制劑時(shí)，Pex誘導(dǎo)的p-IGF-1R、p-IRS-1和p-AKT的上調(diào)被阻斷(圖3G)?；谶@些結(jié)果，我們推測(cè)IGF-1信號(hào)可能是介導(dǎo)Pex依賴(lài)的HSC活化的關(guān)鍵因素。與預(yù)期的一樣，IGF-1R抑制劑抑制了Pex誘導(dǎo)的HSC的活化、增殖和遷移(圖4A-D)。此外，IGF-1R抑制劑逆轉(zhuǎn)了Pex誘導(dǎo)的HSC中ECM的產(chǎn)生(圖4E)。我們的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，IGF-1R抑制劑可以阻斷Pex誘導(dǎo)的肝纖維化(圖4F-I)。這些數(shù)據(jù)表明IGF-1信號(hào)在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。 總體生存率低與m6A水平增高***相關(guān)。焦亡生物相關(guān)科研地區(qū)科學(xué)基金
5.沉默lnc-PMIF促進(jìn)老年OPCs向骨形成表面遷移，促進(jìn)老年小鼠骨形成
BMSCs中沉默lnc-PMIF，增殖無(wú)變化，OPCs成骨能力不改變，細(xì)胞遷移數(shù)量高，表明沉默lnc-PMIF可增強(qiáng)老年OPCs的遷移能力，而不干擾老年OPCs的體外增殖和成骨分化。接受si-PMIF處理的老年BMSCs的小鼠中骨形成表面Dil+細(xì)胞數(shù)***升高，提示沉默lnc-PMIF可促進(jìn)老年OPCs在體內(nèi)向骨形成表面遷移，大部分遷移的Dil+細(xì)胞中檢測(cè)到Runx2表達(dá)，表明si-PMIF處理的老年BMSCs遷移到骨形成表面發(fā)生正常的成骨分化，這將有助于小鼠的骨形成。接受si-PMIF處理的老年BMSCs小鼠骨表面TGF-β+細(xì)胞的平均積分光密度***更高，而TRAP+面積無(wú)***差異，表明si-PMIF處理的老化BMSCs可能影響細(xì)胞募集，而不是骨吸收。上述si-PMIF或si-NC處理的老年BMSCs對(duì)老年雄性小鼠進(jìn)行脛骨內(nèi)注射，4周后接受si-PMIF處理的老年BMSCs的小鼠骨量更高，脛骨干骺端微結(jié)構(gòu)更好，BMD和BV/TV更高，MAR和BFR/BS更高。這些結(jié)果證明，老年BMSCs敲低lnc-PMIF可促進(jìn)骨形成。 焦亡生物相關(guān)科研地區(qū)科學(xué)基金上海英拜生物有經(jīng)驗(yàn)豐富的科研團(tuán)隊(duì)。
MIR210HG與子宮內(nèi)膜*患者的低生存率相關(guān)為了識(shí)別子宮內(nèi)膜*組中異常表達(dá)的lncRNA，我們分析了來(lái)自TCGA的數(shù)據(jù)。表達(dá)陣列分析顯示332個(gè)lncRNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7個(gè)lncRNA表達(dá)上調(diào)(圖1A和1B)。然后，我們分析了GEO數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜*GSE17025隊(duì)列中MIR210HG的表達(dá)也上調(diào)(圖1C)。qPCR顯示MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中的表達(dá)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(圖1D)。此外，我們分析了MIR210HG的表達(dá)與子宮內(nèi)膜*患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)MIR210HG在從I、II期到III、IV期的進(jìn)展過(guò)程中增加。MIR210HG的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移***相關(guān)(圖1E)。原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中的表達(dá)水平高于正常子宮內(nèi)膜組織(圖1F)。MIR210HG高表達(dá)的子宮內(nèi)膜*患者生存率較低(圖1G)。
同樣，Transwell實(shí)驗(yàn)(圖5h)也證明了**細(xì)胞的遷移能力。綜上所述，circMAPK1在沒(méi)有其編碼蛋白MAPK1-109aa的情況下，不能抑制GC細(xì)胞的惡性表型。隨后，為了進(jìn)一步驗(yàn)證MAPK1-109aa的功能，我們?cè)赟GC7901和MGC803細(xì)胞中恢復(fù)了MAPK1-109aa的表達(dá)，無(wú)論是否穩(wěn)定敲除circMAPK1，Western blot驗(yàn)證了這一點(diǎn)(圖6a)。將MAPK1-109aa質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SGC7901和MGC803細(xì)胞株后，細(xì)胞的增殖能力(圖6b-g)和遷移能力(圖6h)得到了有效的抑制。在轉(zhuǎn)染了shcirMAPK1的細(xì)胞系中，恢復(fù)了MAPK1-109aa的表達(dá)也逆轉(zhuǎn)了穩(wěn)定敲除circMAPK1所導(dǎo)致的惡性表型。綜上所述，上述結(jié)果表明circMAPK1對(duì)GC細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的抑制作用依賴(lài)于其編碼蛋白MAPK1-109aa。英拜生物提供生物科學(xué)內(nèi)的專(zhuān)業(yè)的技術(shù)咨詢(xún)，技術(shù)合作。
4）SsD通過(guò)直接抑制FTOm6A去甲基化活性來(lái)誘導(dǎo)m6A修飾
為了檢測(cè)m6A在RNA上的變化，我們?cè)赟sD處理的白血病細(xì)胞中進(jìn)行了m6A點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)。如圖4A所示，SsD***增加了m6A在轉(zhuǎn)錄組中的豐度。此外，HPLC-MS/MS定量證實(shí)了SsD處理的NB4和Kas-1細(xì)胞mRNA中細(xì)胞m6A的增加(圖4B)。接下來(lái)，我們檢測(cè)了FTO的兩個(gè)直接靶點(diǎn)MYC和RARA在SsD處理的細(xì)胞中的表達(dá)。SsD在mRNA和蛋白水平***下調(diào)了NB4和Kas-1細(xì)胞的MYC，而上調(diào)了RARA(圖4C-D)。有趣的是，SsD依賴(lài)的MYC和RARA的減少是由于FTO過(guò)表達(dá)細(xì)胞中mRNA和蛋白穩(wěn)定性的降低(圖4E-4H)。綜上所述，這些結(jié)果證明了FTO及其下游靶點(diǎn)(如MYC,RARA)是FTO過(guò)表達(dá)白血病細(xì)胞中SsD的主要效應(yīng)因子。 上海英拜生物設(shè)有專(zhuān)業(yè)的武漢技術(shù)中心。北京科研贈(zèng)送提供技術(shù)路線
英拜的實(shí)驗(yàn)室坐落在上海漕河涇園區(qū)浦江園區(qū)。焦亡生物相關(guān)科研地區(qū)科學(xué)基金
4）APP/PS1小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高
我們研究了NOX4來(lái)源的氧化應(yīng)激在APP/PS1小鼠受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用。我們用免疫熒光染色法測(cè)定了APP/PS1小鼠和野生型(WT)小鼠大腦皮層GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖4A)。免疫熒光染色顯示，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度增加(圖4A、C)。APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)受損的GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度升高。此外，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠中4-HNE和GFAP亞細(xì)胞共定位呈陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4D)。與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4B和E)和MDA與GFAP亞細(xì)胞共定位陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4F)數(shù)量增加。4-HNE在APP/PS1小鼠NOX4陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖4G)。此外，APP/PS1小鼠NOX4和4-HNE陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4H)。這些結(jié)果提示APP/PS1受損小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高。 焦亡生物相關(guān)科研地區(qū)科學(xué)基金
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶(hù)可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)