3）LINC00926通過抑制乳腺*細胞中PGK1的表達來抑制糖酵解
由于PGK1是一種關鍵的糖酵解酶，而LINC00926被鑒定為負調控PGK1的lncRNA，我們想知道需氧糖酵解是否在LINC00926介導的乳腺*細胞增殖抑制中發(fā)揮作用。我們測試了LINC00926對葡萄糖攝取、乳酸生成和ATP生成的調節(jié)作用。結果表明，LINC00926降低了葡萄糖攝取、乳酸生成和ATP生成(圖3A)。在LINC00926轉染的細胞中，PGK1的表達逆轉了這些作用。LINC00926還顯示出細胞外酸化率下降(圖3B和3C)。PGK1在LINC00926轉染的細胞中重新表達挽救了這些效果。在PGK1敲低的MDA-MB-231或MCF-7細胞中敲低LINC00926對糖酵解表型沒有影響(圖3D-3F)，表明LINC00926通過PGK1抑制糖酵解表型。綜上所述，LINC00926通過抑制乳腺*細胞中PGK1的表達來抑制糖酵解。 英拜生物提供生物科學內的專業(yè)的技術咨詢，技術合作。安徽科研技術指導
巨噬細胞在AP恢復不同階段的不同作用
鑒于AP恢復過程中巨噬細胞的表型變化，接下來試圖通過用脂質體***巨噬細胞來檢查巨噬細胞在不同修復/再生階段的作用。首先，我們在急性炎癥反應后（從第1天到第2天）立即消耗了胰腺巨噬細胞，并在第3天檢查了胰腺。如圖所示，第3天之前巨噬細胞的消耗可以在很大程度上減少導管樣結構，這表明巨噬細胞在ADM的形成。AP損傷后第3天巨噬細胞的消耗顯著延遲了胰腺修復。Ki67+細胞在第3天達到峰值，并隨著胰腺恢復逐漸下降。與組織學結果一致，發(fā)現(xiàn)CN處理組的Ki67+細胞從第5天到第7天大幅下降，但在CL處理組中沒有，表明CL處理小鼠的修復過程受損。 代謝科研分子生物學實驗英拜生物是國內承接各類高通量測序科研項目以及一站式的測序文章發(fā)表服務的公司之一。
2、miR-138-5p介導*細胞誘導的巨噬細胞KDM6B表達抑制
構建了miR-138-5p過表達的乳腺*細胞系，取其培養(yǎng)基與巨噬細胞共培養(yǎng)，結果巨噬細胞中miR-138-5p表達***上調，同時KDM6B的表達***下降。證實miR-138-5p介導*細胞誘導的巨噬細胞KDM6B表達抑制。
3、*細胞來源的外泌體miR-138-5p下調KDM6B的表達
隨后為了判定上述巨噬細胞中miR-138-5p表達上調的原因，檢測了巨噬細胞中原代(pri-)和前體(pre-)miR-138的水平。結果顯示共培養(yǎng)和對照組間原代和前體miR-138的水平沒有差異，表明miR-138-5p是外源供應的（圖1A）。此外，使用RNaseA處理miR-138-5p水平不變，使用TritonX-100其水平***下降。提示miR-138-5p被膜狀結構包裹（圖1B）。進一步分析表明使用外泌體抑制劑GW4869處理組和外泌體刪除組的培養(yǎng)基中miR-138-5p的表達***下降（圖1C）。表明外泌體來源于乳腺*細胞。類似的，外泌體抑制劑GW4869處理導致共培養(yǎng)的巨噬細胞中miR-138-5p的水平***下降，而KDM6B的水平***上升（圖1D-E）。
4）LINC00926通過增強STUB1介導的泛素-蛋白酶體途徑調節(jié)PGK1蛋白的穩(wěn)定性
亞細胞定位結果顯示，LINC00926主要定位于細胞質，F(xiàn)ISH實驗進一步證實了這一點(圖4A和4B)。結合LINC00926沒有改變PGK1mRNA水平的事實，我們推測LINC00926在轉錄后水平下調了PGK1的表達。事實上，蛋白酶體抑制劑MG132的加入阻斷了LINC00926過表達介導的PGK1降解，這表明泛素-蛋白酶體途徑參與了LINC00926對PGK1蛋白穩(wěn)定性的調節(jié)(圖4C)。LINC00926過表達增加PGK1泛素化(圖4D)。下調LINC00926基因后，PGK1蛋白水平升高，泛素化水平降低(圖4E)。為了尋找負責LINC00926調控PGK1蛋白穩(wěn)定性的E3泛素連接酶STUB1，我們接下來通過RNA下拉實驗確定了LINC00926在乳腺*細胞中的蛋白伴侶。質譜分析結果顯示了特異性差異表達譜帶。 英拜可解放您的雙手釋放您的時間。
外泌體circ_0072083與膠質瘤患者的TMZ耐藥、診斷和生存有關
為了分析外泌體 circ_0072083 在膠質瘤患者中的價值，從患者的血清樣本中分離外泌體。通過 TEM 和特定標記物（CD63、CD81 和 TSG101）驗證外泌體。此外，大小主要在100-200 nm，并且在耐藥患者中其濃度更高。此外，與TMZ敏感患者（n ?=33）相比，TMZ耐藥患者（n =36）的外泌體circ_0072083水平顯著上調。此外，通過將這些外泌體暴露于不同條件來評估外泌體 circ_0072083 的穩(wěn)定性，結果表明 TMZ 耐藥患者中外泌體 circ_0072083 的豐度不受不同孵育時間和不同 pH 值的顯著影響。此外，外泌體 circ_0072083 可以作為神經膠質瘤的**診斷靶標（AUC= 0.85，P ?< 0.05），并且外泌體 circ_0072083 水平高的患者總生存率較低（P ?< 0.05）。?根據(jù)平均水平將患者分為高（n ?= 36）或低（n = 33）外泌體circ_0072083組。桌子表格11總結出高外泌體circ_0072083水平與膠質瘤患者的**大小、晚期WHO分級、MGMT甲基化和TMZ抗性相關。這些發(fā)現(xiàn)表明外泌體circ_0072083在神經膠質瘤患者中具有重要作用。這表明外泌體circ_0072083可以通過在Warburg效應下調節(jié)ALKBH5介導的去甲基化來調節(jié)miR-1252-5p/NANOG軸來增加膠質瘤中的TMZ抗性。 英拜的員工福利待遇很好。內蒙古科研贈送提供技術路線
英拜提供分子生物學以及免疫病理相關實驗。安徽科研技術指導
磷酸肌醇3-激酶(PI3K)信號通路在**中經常過度***。在胞外刺激下，I類PI3K在質膜內葉上轉化為磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PI(3,4,5)P3)，通過肌醇聚磷酸5-磷酸酶快速轉化為磷脂酰肌醇3,4-二磷酸(PI(3,4)P2)。PI(3,4,5)P3和PI(3,4)P2共同增加了致*PI3K信號的中樞效應蛋白激酶AKT2,3的招募和***。PI(3,4,5) P3/PI(3,4)P2信號通路***質膜上的許多其他效應因子，包括蛋白激酶PDK1，該蛋白激酶進而磷酸化AKT和其他AGC激酶，如SGK34。**抑制因子，磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)，將PI(3,4,5)P3轉化為PI(4,5)P2，從而抑制PI3K/AKT信號。II類肌醇多磷酸4-磷酸酶(INPP4B)可使I類PI3K下游的PI(3,4)P2去磷酸化，形成磷脂酰肌醇3-磷酸(PI(3)P)，也可抑制AKT信號，并被認為在某些**中起抑*作用。
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