2.Lnc-PMIF抑制OPCs遷移到骨形成表面
在成骨細胞分化過程中，lnc-PMIF在早期增加，在礦化啟動后減少，表明lnc-PMIF可能在成骨分化的早期階段發(fā)揮作用。過表達/敲低lnc-PMIF不影響OPCs的增殖和成骨分化。敲低lnc-PMIF的細胞遷移減弱，敲低組細胞處理的小鼠脛骨中Dil標記細胞數(shù)量升高，小鼠中l(wèi)nc-PMIF表達更高。這些表明lnc-PMIF可抑制OPCs向骨形成表面的遷移，而不干擾其增殖和成骨潛能。
3.Lnc-PMIF與HuR相互作用抑制β-actin的表達以抑制OPC遷移
為探索Lnc-PMIF介導的OPC遷移的調(diào)節(jié)機制。RNApulldown-MS實驗尋找lnc-PMIF的相互作用蛋白，鑒定出一種RNA結(jié)合蛋白HuR，WB證實HuR在生物素標記的lnc-PMIF細胞裂解的下拉組分中富集，RNA免疫沉淀(RIP)試驗lnc-PMIF與HuR的結(jié)合。 METTL14的上調(diào)可以通過m6A修飾降低PERP水平。醫(yī)學相關(guān)科研國家自然科學基金
2）TGF-β1促進腎小管上皮細胞分泌外泌體，并在體外***成纖維細胞我們研究了腎小管來源的外泌體在介導成纖維細胞***中的潛在作用。TGF-β1作為主要的成纖維因子，用于刺激UUO腎損傷/應激小管細胞的狀態(tài)。不同濃度TGF-β1伴或不伴GW4869孵育24小時后，NRK-52E細胞與無外泌體培養(yǎng)基孵育24小時，從條件培養(yǎng)基中收集外泌體來刺激正常大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞(NRK-49F細胞)。如圖2B-D所示，NTA、DLS和TEM顯示大部分分離的細胞外囊泡為外泌體。CD63的Westernblot分析證實，外泌體的分泌依賴于TGF-β1的濃度，而GW4869處理明顯抑制了細胞外基質(zhì)的沉積(圖2E-F)。隨后我們用PKH-67標記NRK-52E細胞，熒光強度***增強，進一步證實TGF-β1處理后外泌體分泌增加。此外，PKH-67標記的外泌體與NRK-49F細胞孵育后被成纖維細胞吸收。從TGF-β1處理的NRK-52E細胞中分離的外泌體能夠誘導NRK-49F細胞增殖和基質(zhì)生成，表現(xiàn)為α-SMA、PCNA、Col-I和纖連蛋白表達增加。而GW4869處理明顯逆轉(zhuǎn)了上述變化。自噬醫(yī)學相關(guān)科研實驗外包嘌呤在細胞中執(zhí)行許多重要的功能。
固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白(SREBPs)是***高脂血癥特征性膽固醇、脂肪酸和甘油三酯生物合成的主要轉(zhuǎn)錄因子。本研究中發(fā)現(xiàn)了一種小分子，白樺素，它通過誘導SREBP裂解***蛋白(SCAP) 與Insig相互作用特異性地抑制SREBP的成熟，進而*****和脂肪酸的生物合成，改善飲食誘導的肥胖，降低血清和組織中的脂質(zhì)含量，提高胰島素敏感性，減小***斑塊的大小。樺樹皮中含有豐富的白樺素，有望成為開發(fā)***高脂血癥藥物的先導化合物。本研究于2021年1月發(fā)表在《Cell Metabolism》IF:21.567期刊上。
7）在體外，上調(diào)UCP1減少AKI期間的脂質(zhì)積累可通過AMPK/ULK1途徑促進自噬
自噬已被證實在AKI中發(fā)揮重要作用。因此，自噬已經(jīng)成為我們關(guān)注的重要途徑之一。在通過慢病毒轉(zhuǎn)染過表達UCP1或UCP1激動劑CL316243的AKI細胞模型中，自噬相關(guān)指標顯示AMPK/ULK1/自噬通路******(圖7A-B)。電子顯微鏡圖像也顯示，上調(diào)UCP1消除AKI中的脂質(zhì)積累后，細胞自噬得到促進(圖7C)?；谶@些發(fā)現(xiàn)，為了驗證自噬在UCP1功能中的重要性，我們進行了功能恢復實驗。如圖7D-F所示，氯喹抑制自噬***逆轉(zhuǎn)了順鉑組UCP1引起的炎癥指標下降。同樣，TUNEL染色顯示，使用氯喹抑制自噬，可以明顯逆轉(zhuǎn)UCP1促進的凋亡抑制作用(圖7G)。這些結(jié)果表明，脂質(zhì)積累通過作用于AKI細胞自噬，在調(diào)節(jié)細胞功能方面發(fā)揮著重要作用。 Th1/Th2細胞失衡也是結(jié)腸炎的一個重要特征。
作者進行了PAR-CLIP實驗，以評估SLC7A11 mRNA-YTHDC2相互作用是否依賴于m6A甲基化。結(jié)果表明，在H1299細胞中，通過過表達METTL3來提高m6A的甲基化水平，促進YTHDC2與SLC7A11 mRNA的結(jié)合(圖6D)。無論METTL3是否過表達，YTH結(jié)構(gòu)域的缺失都阻斷了SLC7A11 mRNA-YTHDC2的相互作用(圖6D)。作者通過SLC7A11 3’-UTR探針進行RNA-pull down實驗，發(fā)現(xiàn)YTHDC2WT，優(yōu)先結(jié)合于含有m6A的SLC7A11 mRNA的3'UTR，而不是含有未甲基化腺苷的mRNA(圖6E)。此外，YTHDC2傾向于結(jié)合m6A共識基元GGAC (圖6E)。通過在H1299和H1975細胞中進行METTL3的功能增加和丟失實驗，發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)SLC7A11 mRNA-YTHDC2的相互作用是由m6A水平?jīng)Q定的(圖6F和G)。這些數(shù)據(jù)表明YTHDC2優(yōu)先與m6A甲基化的SLC7A11 mRNA結(jié)合。乳酸菌是益生菌在嘌呤代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。河南科研實驗可參觀
英拜跟客戶形成產(chǎn)學研合作模式。醫(yī)學相關(guān)科研國家自然科學基金
7）MIR210HG通過miR-337-3p和miR-137促進**進展
為了確定MIR210HG下調(diào)對Ishikawa和HEC-1A細胞系惡性行為的抑制作用是否通過miR-337-3p/137介導，我們進行了功能挽救實驗。結(jié)果證實MIR210HG沉默對Ishikawa和HEC-1A細胞遷移和侵襲的惡性抑制作用被miR-337-3p/137敲低***逆轉(zhuǎn)(圖7A-7E)。這表明MIR210HG通過miR-337-3p/137調(diào)控Ishikawa和HEC-1A細胞的惡性生物學行為。
8）抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過表達抑制**生長
我們測定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實驗中，每組實驗小鼠3只。結(jié)果表明與對照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過表達miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時過表達miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析顯示，與單獨轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達較低(圖8B)。
結(jié)論：MIR210HG在子宮內(nèi)膜*患者中是一個**的預后因素，干擾MIR210HG的體內(nèi)外表達可抑制子宮內(nèi)膜*細胞的惡性表型。MIR210HG-miR-337-3p/137被發(fā)現(xiàn)介導HMGA2調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜*細胞惡性行為的能力。MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸是新的子宮內(nèi)膜*分子預后標志物和潛在的***靶點。 醫(yī)學相關(guān)科研國家自然科學基金
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗