單細(xì)胞相關(guān)課題科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

相反，miR-199a-5p抑制劑處理可提高WT小鼠脾CD4+T細(xì)胞中Sirt1的表達(dá)(圖5E)，并降低衰老標(biāo)志物p21,p16和乙酰p53水平(圖5F)。***，與MRL/lpr相比，hUC-MSCs可增加miR-199a-5p的產(chǎn)生，表明hUC-MSCs是miR-199a-5p來源的關(guān)鍵調(diào)控因子(圖5G)。在transwell系統(tǒng)中，hUC-MSCs與MRL/lpr脾CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)48h后，細(xì)胞內(nèi)miR-199a-5p升高，Sirt1基因表達(dá)降低，CD4+T細(xì)胞中衰老標(biāo)志物的表達(dá)水平恢復(fù)，而miR-199a-5p抑制劑處理后仍處于抑制狀態(tài)(圖5G-I)?？偟膩碚f，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過miR-199a-5p介導(dǎo)的Sirt1下調(diào)和隨后p53去乙?；臏p少，增加了脾臟CD4+T細(xì)胞的衰老。英拜生物提供專業(yè)的編輯潤色團(tuán)隊(duì)保證服務(wù)到文章接收為止。單細(xì)胞相關(guān)課題科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

HOXBLINC的缺失擾亂了NPM1c+介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄程序和白血病發(fā)生

隨后鑒定了NPM1c+AML和NPM1cWTAML病人中的差異表達(dá)基因，與WT相比，有871個(gè)下調(diào)基因和980個(gè)上調(diào)基因，包括HoxBlinc和NPM1c+的特征基因HoxB2-5，HoxA7,9-11，Meis1，Runx1（圖1c）。然后，通過RNA-seq分析比較了對照組和HOXBLINCi細(xì)胞的全基因組轉(zhuǎn)錄組變化。一致地，NPM1c+細(xì)胞表現(xiàn)出HOXBLINClncRNA和常見的NPM1c+AML標(biāo)記基因的高表達(dá)(圖1d)。有趣的是，在OCI-AML3細(xì)胞中抑制HOXBLINC***抑制了許多NPM1c+標(biāo)志性基因的轉(zhuǎn)錄，如HOXB2-5、HOXA9-11、RUNX1和MEIS1(圖1d)。 空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)科研技術(shù)指導(dǎo)Th1/Th2細(xì)胞失衡也是結(jié)腸炎的一個(gè)重要特征。

生化分析結(jié)果顯示，過表達(dá)circRNF13會抑制NPC細(xì)胞的葡萄糖攝取和乳酸生成。海馬實(shí)驗(yàn)也表明過表達(dá)增加細(xì)胞的糖酵解能力，干擾則相反。通過檢測細(xì)胞內(nèi)AMPK的水平監(jiān)測糖酵解通路。研究表明當(dāng)糖酵解被抑制，細(xì)胞內(nèi)AMPK水平被磷酸化***，***的AMPK通過抑制mTOR會抑制蛋白合成和轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而抑制**生長和轉(zhuǎn)移。結(jié)果顯示，過表達(dá)circRNF13***增加了NOC細(xì)胞中AMPKα的磷酸化并下調(diào)mTOR水平，并進(jìn)一步下調(diào)下游靶基因mTOR，pS6K和4EBP1的表達(dá)；而敲除circRNF13則有相反的效果。當(dāng)加入糖酵解抑制劑2-DG后，敲除circRNF13不能下調(diào)AMPKα的磷酸化。此外，敲除circRNF13造成的NPC的增殖和遷移會被2-DG所廢除。以上結(jié)果表明circRNF13通過抑制糖酵解抑制NPC的遷移和侵襲。

2.Tempol能中度改善DHEA誘導(dǎo)的PCOS大鼠的糖耐量

由于多囊卵巢綜合征與代謝紊亂密切相關(guān)，評估了不同組的胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。DHEA+PBS組大鼠的空腹血糖水平雖然沒有明顯差異，但其空腹血清胰島素水平和HOMA-IR值均高于油+PBS組。Tempol***降低了空腹胰島素水平，而對PCOS大鼠的空腹血糖水平和HOMA-IR值無***影響(圖2A-C)。OGTTs顯示PCOS大鼠葡萄糖***延遲和曲線下面積增加，這表明DHEA處理降低了葡萄糖排泄能力。經(jīng)tempol***后，糖耐量受損情況得到改善(圖2D)。ITTs證明，三組大鼠對胰島素的反應(yīng)相同(圖2E)。 大黃酸導(dǎo)致嘌呤代謝正?；湍c道尿酸水平的降低。

支持了轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，流式細(xì)胞術(shù)表明帶有**記憶(Tcm)表型(CD44+CD62L+)的CD8+TILs的比例***更高，這在不同的**模型中是一致的(Fig.1H)。為了檢驗(yàn)抑制CDK4/6對抗**T細(xì)胞免疫的長期功能效應(yīng)，用CDK4/6i在短時(shí)間(抗**T細(xì)胞反應(yīng)**活躍的3-13天)處理MC38-OVA荷瘤小鼠，然后停藥。在停止***時(shí)，CDK4/6i處理小鼠和對照小鼠的**體積是相等的(Fig.1I-J)。引人注目的是，在停止***后，既往使用CDK4/6i***的小鼠中有21只小鼠**完全***，而對照組只有9只(Fig.1K)?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明CDK4/6的藥理抑制促進(jìn)T細(xì)胞記憶，并產(chǎn)生能夠驅(qū)動(dòng)有效和持續(xù)的抗**反應(yīng)的瘤內(nèi)T細(xì)胞室。英拜可解放您的雙手釋放您的時(shí)間。內(nèi)蒙古科研免費(fèi)設(shè)計(jì)

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我們接下來試圖識別circPDE4B上游調(diào)節(jié)器。我們首先對circPDE4B側(cè)翼序列進(jìn)行RNA pull-down-MS檢測，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)與RNA剪接相關(guān)的RBP，包括DExH-box helicase 9和FUS(圖1G)。RT-qPCR結(jié)果顯示，F(xiàn)US敲除后，HCs中circPDE4B表達(dá)下調(diào)，而pPDE4B和mPDE4B沒有明顯變化(圖1H)。此外，***兩種FUS shRNA慢病毒只降低了circPDE4B的表達(dá)(圖1I)，而過表達(dá)FUS則上調(diào)了circPDE4B的表達(dá)(圖1I)。接下來，RIP分析顯示FUS與外顯子相鄰的位點(diǎn)結(jié)合，而其他遠(yuǎn)端位點(diǎn)則可以忽略(圖1J，K)。我們還尋找了可能的FUS響應(yīng)元素，發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)可能的motifs，A位于上游，B位于下游。我們進(jìn)一步設(shè)計(jì)了兩個(gè)短的circPDE4B微基因，包括circPDE4B-s和circPDE4B-s-del(圖1L)。RIP顯示FUS與circPDE4B-s之間存在明顯的相互作用，但與circPDE4B-s-del之間沒有相互作用(圖1M)，表明FUS需要周圍內(nèi)含子中的假定位點(diǎn)來結(jié)合。我們接下來在表達(dá)circPDE4B-s/del的HCs中敲除FUS，發(fā)現(xiàn)與circPDE4B-del相比，circPDE4B-s***減少了FUS敲除的circPDE4B轉(zhuǎn)錄本(圖1N)。值得注意的是，在HCs中FUS被TNF-α下調(diào)(圖1O)。綜上所述，在OA中circPDE4B的下調(diào)至少部分是由FUS的抑制引起的。單細(xì)胞相關(guān)課題科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序

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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)

7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)