2）circPDE4B調(diào)節(jié)軟骨細胞活力和ECM代謝
為了評估circPDE4B在ECM代謝中的作用，我們分別用三種circPDE4BsiRNA轉(zhuǎn)染HCs(圖2A)。我們使用CCK-8方法評估了circPDE4B對軟骨細胞活力的影響。結(jié)果顯示，敲低circPDE4B的表達降低了軟骨細胞的活力(圖2B)。此外，shRNA腺病毒抑制circPDE4B***提高了MMP3、MMP13和ADAMTS4的表達，而SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan在HCs/MCs中的表達下調(diào)(圖2C和圖2D)。免疫熒光進一步證實，circPDE4B敲除影響了HCs/MCs的MMP3、MMP13、COL2和aggrecan水平(圖2E、F)。同時，HCs的阿爾新藍染色顯示，circPDE4B抑制導致軟骨細胞功能障礙，蛋白多糖藍染較少(圖2G)。然后通過CCK-8實驗(圖2H)發(fā)現(xiàn)，過表達circPDE4B增加了軟骨細胞的活力。在過表達circPDE4B-HCs中，MMP3、MMP13和ADAMTS4的mRNA和蛋白水平下調(diào)，SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan的mRNA和蛋白水平上調(diào)(圖2I-L)。此外，HCs的阿爾新藍染色表明，與單獨IL-1β***相比，circPDE4B過表達和IL-1β共處理減少了軟骨破壞(圖2M)。這些數(shù)據(jù)表明，circPDE4B/circPde4b在HCs中可以促進細胞活力，抑制分解代謝作用。 TRF測序課題整體服務。臨床醫(yī)學課題創(chuàng)新服務
3、白樺素可以改善小鼠飲食導致的肥胖并增加能量消耗
接下來，研究了白樺素在體內(nèi)的作用。洛伐他汀是一種HMGCR抑制劑，具有良好的有益作用，將其與白樺素進行比較。用對照（鹽水），洛伐他?。?0mg/kg/day）或白樺素（15或30mg/kg/day）處理西式飲食（WD）的C57BL/6J小鼠6周。在***期間，未觀察到白樺素或洛伐他汀的明顯毒性，并且不同組的小鼠顯示出相似的食物攝入（圖4A）。有趣的是，盡管小鼠以30mg/kg/day加WD飲食喂養(yǎng)的老鼠比chow飲食喂養(yǎng)的小鼠重，但它們的體重增加比WD喂養(yǎng)的老鼠少，這表明在此劑量下，白樺素和洛伐他汀可以預防飲食引起的肥胖癥（DIO）（圖4B）。洛伐他汀對體重的影響與以前的報道一致。 臨床醫(yī)學課題創(chuàng)新服務阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
8.EVs介導的ELNAT1上調(diào)HLECs中SOX18的表達
qRT-PCR分析UM-UC-3-EV1載體或UM-UC-3-EVELNAT1處理的HLECs中淋巴管生成相關基因的表達，結(jié)果顯示SRY-box轉(zhuǎn)錄因子18（SOX18）是**明顯的與EVs介導的ELNAT1表達正相關的基因（Figure8A,B）。此外，ChIRP分析表明EVs介導的ELNAT1與HLECs中SOX18啟動子的771~786bp（p4）直接相互作用（Figure8C,D）。SOX18-p4區(qū)域的突變降低了EVs介導的ELNAT1誘導的熒光素酶活性（Figure8E,F），表明SOX18-p4對于EVs介導的ELNAT1誘導HLECs中SOX18的上調(diào)至關重要。hnRNPA1和H3K4me3在SOX18啟動子上的富集與EVs介導的ELNAT1表達***相關（Figure8G,J）。EVs介導的ELNAT1過表達增強了HLECs的管形成和遷移能力，而干擾SOX18則HLECs的管形成和遷移能力受損（Figure8K,M），表明SOX18是EVs介導的ELNAT1驅(qū)動體外BCa淋巴管生成所必需的。綜上所述，這些結(jié)果表明，EVs介導的ELNAT1通過轉(zhuǎn)錄上調(diào)HLECs中SOX18的表達來促進BCa淋巴管生成。
五、阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配
研究了磷脂酰肌醇3,4,5磷酸(PIP3)在DNA損傷后的細胞定位。將MCF10A細胞按上述方法同步輻照，免疫熒光法分析PTEN的亞細胞分布。PTEN-WT和PTEN-398A蛋白在細胞核和質(zhì)膜穩(wěn)定定位(圖6A, B)。經(jīng)過IR處理后，PTEN-WT在質(zhì)膜上積累(圖6A, B)。相比之下，在這些條件下，沒有檢測到PTEN-398A蛋白的重新定位(圖6A, B)。B).我們通過細胞分離和膜相關PTEN的免疫印跡分析進一步證實了這些結(jié)果(圖6C, D)。這些結(jié)果表明，ATM對PTEN的磷酸化導致PTEN在質(zhì)膜上重新分布，這與AKT通路***減少有關 TIMEOR是***個基于 Web 的自適應時間序列多組學管道方法。
細胞間的相互作用在**進展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關鍵作用。目前關于這些**細胞是如何與其他細胞相互交流的仍有很多是未知的。**釋放的外泌體被認為是**進行細胞間溝通的有效介質(zhì)。Dong等探索了肝細胞*（HCC）外泌體在其轉(zhuǎn)移和預后價值中的功能。本文于2021年6月發(fā)表在《Signal Transduction and Targeted Therapy》期刊上，IF：13.493。
1、外泌體的分離與鑒定以及HCC細胞的釋放和吸收
使用投射電子顯微鏡觀察了外泌體的形態(tài)和形狀；納米粒子**分析發(fā)現(xiàn)外泌體直徑在40-200nm之間，并且在6個HCC細胞系外泌體中都檢測到了外泌體標志物CD63，CD9，和Alix的表達；然后使用DIO標記高轉(zhuǎn)移性HCC細胞的外泌體（HMH-exo）和低轉(zhuǎn)移性HCC細胞外泌體（LMH-exo），在激光掃描共焦顯微鏡下觀察到綠色標記的HMH-exo和LMH-exo都可以被低轉(zhuǎn)移性HCC細胞細胞系有效吸收（圖1）。這些結(jié)果表明已經(jīng)成功分離和純化HCC來源的外泌體并且他們可以被其它HCC細胞吸收。 課題外包服務找英拜放心安心。推薦課題推薦咨詢
外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物。臨床醫(yī)學課題創(chuàng)新服務
將人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)與鼻咽*細胞分離的EVs共培養(yǎng)后，通過Transwell室系統(tǒng)和matrigel基血管生成實驗評估其遷移、侵襲和血管樣管形成。使用體內(nèi)Matrigel血管生成模型檢測EVs的促血管生成活性以及候選microRNA 。結(jié)果表明，與鼻咽*正常組織相比，鼻咽*組織中miR-144水平上調(diào)，且與CD31的表達呈正相關。此外，miR-144在鼻咽*細胞EVs中高度富集，**終增強HUVECs和血管樣管在體內(nèi)和體外的遷移和侵襲。值得注意的是，miR-144通過抑制靶基因FBXW7和促進轉(zhuǎn)錄因子HIF1α依賴的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-A)。綜上所述，本研究強調(diào)了miR-144作為鼻咽***發(fā)生中細胞外促血管生成介質(zhì)的作用。臨床醫(yī)學課題創(chuàng)新服務
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗