m6A酶系統(tǒng)
METTL3是早先被鑒定為結(jié)合SAM的組件，其缺失引起小鼠胚胎干細(xì)胞、Hela細(xì)胞和HepG2 細(xì)胞中m6Apeaks的減少。METTL3及其同源蛋白METTL14定位在富含剪切因子的細(xì)胞核內(nèi)亞細(xì)胞器－核小斑（Nuclear speckle）上，顯示ｍ６Ａ修飾可能和ＲＮＡ的剪切加工相關(guān)。WTAP與METTL3–METTL14 二聚體相互作用，并共定位于核小斑，影響甲基化效率，參與mRNA剪。而KIAA1429作為候選的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的新亞基，是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為***個被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關(guān)， 揭示m6A可能對這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。 大量數(shù)據(jù)支持腸道微生物組在SCI中發(fā)揮重要作用。重慶標(biāo)書實驗外包
4）SsD通過直接抑制FTOm6A去甲基化活性來誘導(dǎo)m6A修飾
為了檢測m6A在RNA上的變化，我們在SsD處理的白血病細(xì)胞中進(jìn)行了m6A點印跡實驗。如圖4A所示，SsD***增加了m6A在轉(zhuǎn)錄組中的豐度。此外，HPLC-MS/MS定量證實了SsD處理的NB4和Kas-1細(xì)胞mRNA中細(xì)胞m6A的增加(圖4B)。接下來，我們檢測了FTO的兩個直接靶點MYC和RARA在SsD處理的細(xì)胞中的表達(dá)。SsD在mRNA和蛋白水平***下調(diào)了NB4和Kas-1細(xì)胞的MYC，而上調(diào)了RARA(圖4C-D)。有趣的是，SsD依賴的MYC和RARA的減少是由于FTO過表達(dá)細(xì)胞中mRNA和蛋白穩(wěn)定性的降低(圖4E-4H)。綜上所述，這些結(jié)果證明了FTO及其下游靶點(如MYC,RARA)是FTO過表達(dá)白血病細(xì)胞中SsD的主要效應(yīng)因子。 單細(xì)胞相關(guān)課題標(biāo)書FMT處理可以促進(jìn)下行運(yùn)動通路的恢復(fù)。
抑制piRNA-30473可降低DLBCL的發(fā)生
為了進(jìn)一步探索piRNA-30473在DLBCL中的功能作用，作者使用antiagomir-30473在DLBCL細(xì)胞中去除piRNA-30473。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，在DLBCL細(xì)胞中耗盡piRNA-30473導(dǎo)致增殖減少(圖2A)。此外，細(xì)胞周期分析顯示，在DLBCL細(xì)胞中抑制piRNA-30473可以增加G1期細(xì)胞的比例，減少S期和G2期細(xì)胞的比例(圖2B,2C)。然而，耗盡piRNA-30473并不誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(圖2D)。此外，通過SU-DHL-8異種移植DLBCL模型，以評估piRNA-30473對體內(nèi)DLBCL進(jìn)展的影響(圖2E)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制piRNA-30473抑制**增長(圖2F)。這些數(shù)據(jù)表明沉默piRNA-30473可以抑制DLBCL細(xì)胞在體內(nèi)和體外的活性。
隸屬于隸屬于梭狀芽孢桿菌目丁酸生成菌在移植后早期的腸道中枯竭,而變形菌門和乳酸菌門(如腸球菌)豐度增加,可能由于缺乏丁酸時腸腔內(nèi)的氧氣水平增加和***素耐藥性所致。然而，到目前為止，HSCT患者的微生物群動態(tài)主要在HSCT后的***個月進(jìn)行詳細(xì)監(jiān)測，而不是長期監(jiān)測。因此，目前尚不清楚微生物群是否以及何時恢復(fù)到造血干細(xì)胞移植前類似微生物群落結(jié)構(gòu)。條件誘導(dǎo)的腸上皮通透性可促進(jìn)細(xì)菌易位和菌血癥，被認(rèn)為是急性移植物抗宿主病(aGvHD)發(fā)病機(jī)制的第一步。急性GvHD是同種異體造血干細(xì)胞移植的常見副作用，同種異體供體T細(xì)胞對宿主體內(nèi)健康組織(包括腸道上皮)表現(xiàn)出細(xì)胞毒性活性。根據(jù)受影響***的程度，急性GvHD的嚴(yán)重程度可分為四個等級:0級I表現(xiàn)為無或輕度，II級IV表現(xiàn)為中度至重度aGvHD。**近，研究表明較低的腸道微生物群多樣性與aGvHD和aGvHD死亡率相關(guān)，并且某些細(xì)菌類群在HSCT后可能參與促進(jìn)aGvHD。然而，在HSCT之前的微生物群組成是否在預(yù)測可能的aGvHD嚴(yán)重程度方面具有預(yù)測價值尚未被檢驗，本研究對此進(jìn)行了探討。血清代謝產(chǎn)物的豐度也發(fā)生了***變化.
CRC中circPLCE1的特征及臨床意義
為了識別CRC中差異表達(dá)的circRNA，我們使用正常的人類腸道上皮細(xì)胞系和CRC細(xì)胞系進(jìn)行了總RNA測序。我們確定研究對象為circPLCE1(hsa_circ_0019223，命名為circPLCE1)。我們分析了85對CRC樣本中的circPLCE1表達(dá)，證實了88.2%(75/85)的CRC患者中circPLCE1表達(dá)下調(diào)。進(jìn)一步分析顯示，circPLCE1在晚期臨床期或T期患者中表達(dá)下調(diào)。使用qRT-PCR分析circPLCE1在正常人腸上皮細(xì)胞株和CRC細(xì)胞株中的表達(dá)水平差異，得到了相似的結(jié)果。circPLCE1由PLCE1外顯子2反向剪接而成。通過Sanger測序證實了circPLCE1的反向拼接連接。PLCE1的環(huán)狀轉(zhuǎn)錄本只能通過擴(kuò)增引物在cDNA中擴(kuò)增。circPLCE1還能抵抗RNaseR酶切。半衰期試驗進(jìn)一步表明，circPLCE1比circPLCE1線性mRNA更穩(wěn)定。通過核質(zhì)量分離試驗和熒光原位雜交(FISH)檢測了circPLCE1的定位，結(jié)果顯示circPLCE1在CRC細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中富集。此外，circPLCE1在臨床晚期或T期患者中表達(dá)較低。KaplanMeier曲線結(jié)果顯示，CRC患者circPLCE1表達(dá)較低與較差的生存率相關(guān)。這些數(shù)據(jù)驗證了circPLCE1的特征和臨床意義。 FMT處理調(diào)節(jié)SCI小鼠的腸道微生物組成。河南標(biāo)書地區(qū)科學(xué)基金
我們使用miR-127-3p抑制劑和模擬物在circSDHC缺失或過表達(dá)后進(jìn)行拯救實驗.重慶標(biāo)書實驗外包
Circ-0004872(本研究稱為““circMAPK1”)來自MAPK1基因的第2-4個外顯子，形成一個490 nt的重疊環(huán)狀轉(zhuǎn)錄本(圖1e)。Sanger測序證實了擴(kuò)增的circMAPK1的頭尾剪接(圖1f)。接下來，我們研究了circMAPK1在GC細(xì)胞系中的表達(dá)水平。如圖1g所示，與正常的胃粘膜上皮細(xì)胞系相比，培養(yǎng)的GC細(xì)胞系中circMAPK1表達(dá)***下調(diào)。另外，circMAPK1*從cDNA中擴(kuò)增，而不是從gDNA中擴(kuò)增(圖1h)，說明circMAPK1的環(huán)結(jié)構(gòu)是由back-splicing產(chǎn)生的。然后我們進(jìn)一步評估了circMAPK1的穩(wěn)定性和定位。經(jīng)過放線菌素D處理后，circMAPK1的半衰期明顯長于線性MAPK1(圖1i)。與MAPK1 mRNA的線性形式相比，circMAPK1對RNase R的降解具有抗性(圖1j)。隨后的細(xì)胞組分qRT-PCR分析(圖1k)和熒光原位雜交分析(圖1l)顯示，circMAPK1主要定位于細(xì)胞質(zhì)而不是細(xì)胞核。重慶標(biāo)書實驗外包
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