2）在體內(nèi)和體外，DRD2的表達(dá)抑制BrCa細(xì)胞的**發(fā)生
構(gòu)建過(guò)表達(dá)DRD2的MDA-MB231和BT549細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR(Figure2A)和WB(Figure2B)驗(yàn)證。CCK8實(shí)驗(yàn)證明，DRD2異位表達(dá)抑制**細(xì)胞生長(zhǎng)(圖2C)。在單層集落形成實(shí)驗(yàn)(圖2D)和軟瓊脂形成實(shí)驗(yàn)(圖2E)中，DRD2也損害了存活能力。并進(jìn)行細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布分析。DRD2的表達(dá)***促進(jìn)了BrCa細(xì)胞凋亡(圖2F)，并阻斷了MDA-MB231和BT549在G2/M期的凋亡(圖2G)。此外，過(guò)表達(dá)DRD2促進(jìn)了BrCa細(xì)胞對(duì)PTX的敏感性(圖2H)。在傷口愈合實(shí)驗(yàn)中，異位表達(dá)的DRD2比對(duì)照組表現(xiàn)出更少的閉合人工傷口的能力(圖2I)。與此相一致的是，DRD2的過(guò)表達(dá)***降低了BrCa的遷移和侵襲(圖2J)。在體內(nèi)進(jìn)一步測(cè)定了DRD2的抑瘤作用。皮下**模型顯示過(guò)表達(dá)DRD2模型的**體積和重量均減小(圖2K)。 FMT處理促進(jìn)神經(jīng)元存活和突觸重建。吉林標(biāo)書細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
METTL3促進(jìn)小鼠ESCC細(xì)胞增殖和**生長(zhǎng)
為了確定METTL3在細(xì)胞增殖中的作用，通過(guò)轉(zhuǎn)染METTL3shRNAs來(lái)去除ESCC細(xì)胞中的METTL3。發(fā)現(xiàn)METTL3缺失減少了這些細(xì)胞的增殖和集落數(shù)。通過(guò)在KYSE180和KYSE450中重組表達(dá)METTL3，這些抑制作用被消除。
接下來(lái)在KYSE450細(xì)胞中建立四環(huán)素誘導(dǎo)的METTL3表達(dá)。四環(huán)素***以劑量依賴的方式增加METTL3的表達(dá)，相應(yīng)地引起細(xì)胞增殖水平的增加和集落形成水平的增加。與野生型（WT）METTL3的過(guò)表達(dá)相比，在ESCC細(xì)胞中METTL3非活性突變體的過(guò)表達(dá)未能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。這些結(jié)果有力地表明，METTL3促進(jìn)**細(xì)胞增殖依賴于其表達(dá)水平和完整的活性。
為了確定METTL3在小鼠**生長(zhǎng)中的作用，將KYSE180或KYSE450細(xì)胞皮下注射到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)METTL3缺失降低了**大小、體積和重量。與表達(dá)METTL3非活性突變體引起的有限效應(yīng)相比，WTMETTL3過(guò)表達(dá)極大地促進(jìn)了**生長(zhǎng)。這些結(jié)果表明METTL3的表達(dá)有助于小鼠**的生長(zhǎng)。 廣東標(biāo)書創(chuàng)新服務(wù)DHEA和tempol處理可影響腸道微生物的β-多樣性。
4、CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長(zhǎng)和肺部轉(zhuǎn)移隨后，作者在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證CLF1的功能。結(jié)果如圖3所以，敲除CFL1后***降低了HCC細(xì)胞的**體積和**，并減少了肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量。IHC表明CLF1的敲除也導(dǎo)致EMT相關(guān)蛋白的抑制。總之，CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長(zhǎng)和肺部轉(zhuǎn)移。
5、CFL1是HIF-1α在HCC細(xì)胞中的下游靶基因?yàn)榱岁U明低氧對(duì)HCC中CFL1表達(dá)的影響，將HCCLM3和Hep3B細(xì)胞在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1的表達(dá)升高，但是當(dāng)HIF-1α敲除后，低氧誘導(dǎo)并不能提高CFL1的表達(dá)，并且使用HIF-1α的抑制劑處理HCCLM3和Hep3B細(xì)胞，也能降低因低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1表達(dá)升高（圖4A-F）。ChIP-PCR檢測(cè)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和HIF-1β與HCC細(xì)胞CFL1啟動(dòng)子中的HRE直接結(jié)合（圖4G）。在低氧條件下，轉(zhuǎn)染HRE熒光素酶質(zhì)?；駽FL1啟動(dòng)子-熒光素酶質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因活性升高（圖4H）。
circPLCE1-411與HSP90α/RPS3復(fù)合物結(jié)合，促進(jìn)泛素依賴的RPS3降解，抑制NF-κB信號(hào)通路
根據(jù)前期研究和相關(guān)文獻(xiàn)我們推測(cè)circPLCE1-411可能與HSP90α/RPS3復(fù)合物結(jié)合，調(diào)控NF-κB信號(hào)通路，從而抑制CRC的進(jìn)展。我們?cè)贖CT8和DLD1細(xì)胞中通過(guò)免疫沉淀鑒定了circPLCE1-411和HSP90α/RPS3復(fù)合物之間的相互作用。我們發(fā)現(xiàn)RPS3蛋白水平隨著circPLCE1-411表達(dá)的增加而***降低。然而，RPS3mRNA水平的豐度并沒(méi)有隨著circPLCE1-411表達(dá)的增加而改變。這提示circPLCE1-411可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄后機(jī)制調(diào)控RPS3。經(jīng)蛋白合成抑制劑環(huán)己亞胺CHX處理后，與對(duì)照組相比，HCT8和DLD1細(xì)胞中RPS3蛋白降解更快，circPLCE1-411表達(dá)增加。 第4周測(cè)定FITC標(biāo)記的葡聚糖(4kd)和血液中FITC水平。
作者構(gòu)建了 (WT) SLC7A113’-UTR和突變型(Mut) 3’-UTR兩種質(zhì)粒(圖6H)。結(jié)果表明，只有過(guò)表達(dá)YTHDC2WT降低SLC7A11 mRNA在H1299細(xì)胞中的穩(wěn)定性，敲除YTHDC2可以提高SLC7A11 mRNA在H1975細(xì)胞中的穩(wěn)定性。然而，與WT 3’-UTR相比，Mut報(bào)告基因的這些作用減弱(圖6I和J)。在檢測(cè)外源性F-Luc-SLC7A11融合mRNA的RNA穩(wěn)定性后，得到了類似的結(jié)果(圖6K-M)?？偟膩?lái)說(shuō)，3’-UTR上的m6A位點(diǎn)對(duì)于YTHDC2使SLC7A11 mRNA不穩(wěn)定至關(guān)重要。
7.抑制YTHDC2對(duì)XC-系統(tǒng)靶向***敏感，并與LUAD進(jìn)展相關(guān)
為了評(píng)估YTHDC2抑制在LUAD中的重要性，從cohort#1隨機(jī)抽取20例YTHDC2lowLUAD，其中50%屬于腺泡型(圖7A)。在cohort#2中，與相鄰組織相比，**中YTHDC2表達(dá)下調(diào)，62%(62/100)的腺泡組織被歸類為YTHDC2low(圖7B、C)。與無(wú)這種表達(dá)模式的腺泡性LUAD患者相比，YTHDC2low的患者總生存期要短得多(圖7D)，進(jìn)一步表明YTHDC2抑制可能對(duì)腺泡性LUAD的**進(jìn)展尤為重要。另外，相對(duì)于*旁組織，**中腺泡LUAD組織中SLC7A11mRNA和蛋白水平表達(dá)量都比較高(圖7E、F)。 circNDUFB2通過(guò)增強(qiáng)泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性。甘肅標(biāo)書服務(wù)價(jià)格
circSDHC是一個(gè)很有前景的RCC患者潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物和***靶點(diǎn)。吉林標(biāo)書細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
5）SsD可***抑制AML在體內(nèi)的進(jìn)展
為了研究SsD在體內(nèi)對(duì)白血病的***效果，我們建立了C1498和FLT3+白血病小鼠模型(圖5A)。對(duì)照組小鼠的白細(xì)胞生長(zhǎng)較快。0.1mg/kg或0.5mg/kg劑量的SsD***抑制WBC生長(zhǎng)(圖5B)。與對(duì)WBC的抑制作用一致，SsD也有效地?fù)p害了骨髓(BM)克隆原性潛能(圖5C和5D)。此外，與對(duì)照組相比，接受SsD***組的小鼠的脾臟更輕，表明SsD處理***逆轉(zhuǎn)了脾腫大，抑制了脾臟轉(zhuǎn)移性**細(xì)胞(圖5C和5E)。與病理表型一致，SsD處理小鼠的生存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)(圖5F)。機(jī)制上，SsD在體內(nèi)的抗白血病作用是通過(guò)其m6ARNA甲基化活性介導(dǎo)的(圖5G)；因?yàn)镾sD處理小鼠的BM增加了m6ARNA甲基化，從而調(diào)節(jié)靶基因(圖5H)。 吉林標(biāo)書細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
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5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
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