1）USP35敲除抑制肺*細(xì)胞生長(zhǎng)、集落形成和**進(jìn)展
我們首先檢測(cè)了肺*組織和細(xì)胞系中USP35豐度的變化。如圖1A所示，USP35在肺ADC和SCC**中都***上調(diào)。與正常的BEAS2B和HBE肺上皮細(xì)胞系相比，USP35mRNA水平在肺*細(xì)胞系(A549、H358、H460、H1299和H1650)中也高度表達(dá)(圖1B)。鑒于H460和H1299細(xì)胞中USP35mRNA的豐度較高，我們?cè)谙乱豁?xiàng)研究中使用了這兩種細(xì)胞系。與mRNA水平一致，在H460和H1299細(xì)胞中USP35蛋白也增加了(圖1C)。為了闡明USP35在肺*發(fā)病機(jī)制中的作用，我們?cè)贖460和H1299細(xì)胞中沉默了USP35(圖1D)。有趣的是，USP35敲除抑制了H460和H1299細(xì)胞在體外的生長(zhǎng)能力和集落形成(圖1E、F)。來(lái)自**異種移植實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，USP35沉默抑制了25天生長(zhǎng)后的**體積和重量(圖1G，H)。總之，USP35在調(diào)節(jié)肺*細(xì)胞生長(zhǎng)和**進(jìn)展中起著關(guān)鍵作用。 醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。云南課題國(guó)家自然科學(xué)基金
C.為了評(píng)估這種差異對(duì)每種方法獲得的數(shù)據(jù)的影響，在TSS和CTCF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)附近覆蓋了Tn5足跡。在透性細(xì)胞中，TSS的信號(hào)被保留，但是與孤立的核相比，TSS的側(cè)翼位置(被鄰近的核小體占據(jù))的信號(hào)減少了
D.用白細(xì)胞分離純化的pbmc比用Ficoll梯度離心純化的pbmc始終具有更高的FRIP評(píng)分和更少的非細(xì)胞條形碼。
E.F.FACS獲得的完整通透細(xì)胞具有比較高的frp和FRITSS評(píng)分，**少的非細(xì)胞條形碼和比較大的細(xì)胞捕獲效率，線粒體閱讀量*略有增加. 湖北課題實(shí)驗(yàn)外包公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)。
脂質(zhì)氧化先于胞質(zhì)Ca2+的增加和質(zhì)膜的破壞
體積細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中Ferroptosis特征之間的詳細(xì)時(shí)間關(guān)系被***后群體細(xì)胞發(fā)生Ferroptosis的異質(zhì)性所掩蓋。為了解決這個(gè)問(wèn)題，作者使用活細(xì)胞共聚焦顯微鏡在單細(xì)胞水平上量化了Fluo-4AM信號(hào)、細(xì)胞圓度和PI攝入量的增加。從單個(gè)細(xì)胞獲得的動(dòng)力學(xué)曲線(圖2C,F,K)中，計(jì)算出每個(gè)ferroptotic表型(t50)實(shí)現(xiàn)50%變化所需的時(shí)間，這使得可以設(shè)置Ferroptosis各過(guò)程之間的滯后時(shí)間(圖2D,G,L)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與所使用的Ferroptosis觸發(fā)器無(wú)關(guān)，胞漿Ca2+的增加先于細(xì)胞圓縮和質(zhì)膜完全坍塌(圖2A,B)。從流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)(圖1G)可以看出，Erastin-1存在時(shí)，胞質(zhì)Ca2+的增加是一個(gè)雙相行為的兩步過(guò)程(圖2C)。***個(gè)事件在比較大Ca2+信號(hào)的40%左右達(dá)到飽和，與不相關(guān)的鈣(Ca2+un)增加相對(duì)應(yīng)，因?yàn)樗鼪](méi)有受到Ferroptosis的抑制(圖1G)。
二、TBI破壞了NPC和Ran***1的分布，導(dǎo)致TBPH/NPC共聚集
使用鼻咽*標(biāo)記Mab414，它可以識(shí)別包括Nup62在內(nèi)的幾個(gè)Nups的FG結(jié)構(gòu)域，我們發(fā)現(xiàn)在非tbi控制的果蠅大腦中，核膜上有一個(gè)主要的同質(zhì)的環(huán)狀標(biāo)記。非腦外傷對(duì)照組的腹神經(jīng)索(VNC)鼻咽*染色呈均勻分布。相比之下，暴露于TBI的vnc核膜NPC染色不規(guī)則，顯示核形態(tài)紊亂。我們?cè)谀X外傷后觀察到核膜間隙和聚集(Mab414團(tuán)塊)的出現(xiàn)(圖2A)。TBI腦中Mab414染色異常的細(xì)胞百分比明顯高于非TBI對(duì)照(圖2B）。tbi暴露的vnc中Tbph和Mab414的核周和細(xì)胞質(zhì)共聚集，而對(duì)照大腦顯示很少或沒(méi)有共聚集(圖2C)。定量結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，tbi暴露的vnc中具有共聚集的Mab414 tbph陽(yáng)性細(xì)胞百分比***升高(圖2D)。 進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對(duì)基因毒性損傷的反應(yīng)。
PTEN表達(dá)檢測(cè)的總有效率約為70%，而PTEN表達(dá)陰性患者的總有效率*為20%。PTEN功能的喪失通常與基因組的不穩(wěn)定性有關(guān)。此外，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mef)中PTEN基因的缺失導(dǎo)致了未修復(fù)的DNA雙鏈斷裂的積累。PTEN缺失被認(rèn)為通過(guò)至少兩種分子機(jī)制促進(jìn)了基因組的完整性。在細(xì)胞核中，PTEN與著絲粒結(jié)合蛋白CENP-C結(jié)合，促進(jìn)著絲粒組裝和中期到后期的轉(zhuǎn)變。此外，作為轉(zhuǎn)錄因子E2F1的輔助因子，核PTEN似乎調(diào)節(jié)Rad51的表達(dá)，Rad51是DNA修復(fù)機(jī)制的關(guān)鍵組成部分。然而，后續(xù)的研究得出了不一致的結(jié)果，表明PTEN在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)RAD51的調(diào)控可能***于特定的細(xì)胞環(huán)境。PTEN缺陷改變了多個(gè)細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，可能留下更少的時(shí)間進(jìn)行DNA損傷修復(fù)和/或染色體分離。細(xì)胞周期的進(jìn)展需要幾個(gè)分子過(guò)程的完美執(zhí)行，以確保一個(gè)熟練的，無(wú)錯(cuò)誤的，細(xì)胞分裂。這些事件發(fā)生的速度由周期蛋白依賴激酶(CDKs)的活性決定，CDKs磷酸化關(guān)鍵底物以促進(jìn)DNA合成和有絲分裂進(jìn)程TIMEOR是***個(gè)基于 Web 的自適應(yīng)時(shí)間序列多組學(xué)管道方法。福建課題中標(biāo)率高
致力于醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)和相關(guān)生物醫(yī)學(xué)課題的研究。云南課題國(guó)家自然科學(xué)基金
紡錘體裝配檢查點(diǎn)(SAC)作為一個(gè)傳感器的**的著絲點(diǎn)延遲有絲分裂進(jìn)入后期，直到適當(dāng)?shù)娜旧w分離得到保證。這一安全機(jī)制的破壞導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定和非整倍體，這是胚胎死亡、先天性出生缺陷、智力殘疾和**的遺傳原因。然而，盡管了解了控制SAC的基本機(jī)制，但信號(hào)通路如何直接與有絲分裂檢查點(diǎn)活動(dòng)相互作用和調(diào)節(jié)仍是未知的。在對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)中，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、生存和分化的多種信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)被***，這一過(guò)程***受到Ras家族小鳥(niǎo)苷三磷酸酶(GTPases)的調(diào)控。RIT1是一種ras相關(guān)的GTPase，調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和應(yīng)激反應(yīng)，是通過(guò)有絲分裂和適當(dāng)?shù)娜旧w分離及時(shí)進(jìn)展的必要條件。RIT1在有絲分裂期間從質(zhì)膜(PM)分離，并直接與SAC蛋白MAD2和p31conmet相互作用，該過(guò)程受周期蛋白依賴性激酶1 (CDK1)活性的調(diào)節(jié)。此外，致病水平的RIT1沉默了SAC，并通過(guò)將MAD2從有絲分裂檢查點(diǎn)復(fù)合體(MCC)中分離出來(lái)，加速了通過(guò)有絲分裂的轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，致病性RIT1抑制SAC促進(jìn)染色體分離錯(cuò)誤和非整倍體。我們的研究結(jié)果突出了RIT1與其他Ras GTPases相比的獨(dú)特功能，并闡明了信號(hào)通路與SAC之間通過(guò)一種新的調(diào)節(jié)機(jī)制的直接聯(lián)系。云南課題國(guó)家自然科學(xué)基金
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)