**近有報道稱，ALS/FTD中TDP-43的聚集可以隔離核孔蛋白、轉(zhuǎn)運蛋白和其他因子，表明TDP-43的聚集強烈破壞核質(zhì)轉(zhuǎn)運(NCT)和核孔復(fù)合體。此外，在AD、ALS和亨廷頓氏病(HD)中NCT也被破壞，提示在這些神經(jīng)退行性疾病中有一個共同的功能失調(diào)途徑。然而，TDP-43在反復(fù)顱腦損傷致神經(jīng)退行性變中的病理機制尚不清楚。此報道之前曾證明，重復(fù)的創(chuàng)傷導(dǎo)致果蠅大腦中的泛素、p62和TDP-43包涵體以及應(yīng)激顆粒病理。在這里，我們對果蠅的大腦進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以確定創(chuàng)傷損傷后改變的分子通路。提供***科研設(shè)計咨詢及輔助實驗。海綿體
4.Caspase-11缺失抑制MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥
接下來，我們評估了Caspase-11缺乏對MCD誘導(dǎo)炎癥的影響。首先，我們比較了野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟白細(xì)胞浸潤情況。在正常情況下，野生型小鼠和caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例相似(圖4A和B)。MCD***導(dǎo)致野生型小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例增加。相比之下，MCD****輕微增加了Caspase11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例。與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例明顯下降(圖4A和B)，表明MCD處理后Caspase-11缺陷導(dǎo)致肝臟中白細(xì)胞浸潤減少。相應(yīng)地，我們發(fā)現(xiàn)了MCD***促進(jìn)肝臟F4/80的表達(dá)而Caspase-11缺乏則抑制MCD誘導(dǎo)的F4/80上調(diào)(圖4C)。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MCD***誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟中TNF-α(圖4D)、IL-1β(圖4E)和CCL2(圖4F)的表達(dá)。相比之下，與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中TNF-α(圖4D)、IL-1β(圖4E)和CCL2(圖4F)蛋白水平***降低。這些結(jié)果表明Caspase-11缺陷抑制了MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥。 炎癥反應(yīng)與自身免疫高通量測序后續(xù)的機制實驗。
巨噬細(xì)胞在AP恢復(fù)不同階段的不同作用
鑒于AP恢復(fù)過程中巨噬細(xì)胞的表型變化，接下來試圖通過用脂質(zhì)體***巨噬細(xì)胞來檢查巨噬細(xì)胞在不同修復(fù)/再生階段的作用。首先，我們在急性炎癥反應(yīng)后（從第1天到第2天）立即消耗了胰腺巨噬細(xì)胞，并在第3天檢查了胰腺。如圖所示，第3天之前巨噬細(xì)胞的消耗可以在很大程度上減少導(dǎo)管樣結(jié)構(gòu)，這表明巨噬細(xì)胞在ADM的形成。AP損傷后第3天巨噬細(xì)胞的消耗顯著延遲了胰腺修復(fù)。Ki67+細(xì)胞在第3天達(dá)到峰值，并隨著胰腺恢復(fù)逐漸下降。與組織學(xué)結(jié)果一致，發(fā)現(xiàn)CN處理組的Ki67+細(xì)胞從第5天到第7天大幅下降，但在CL處理組中沒有，表明CL處理小鼠的修復(fù)過程受損。
為了進(jìn)一步探討m6A修飾在FZD7 mRNA中的作用，我們構(gòu)建了三種FZD7突變體，其中一種突變體為***個m6A峰(FZD7- peak1 Mut)，另一種突變體為第二個m6A峰(FZD7- Peak2 Mut)，以及雙突變體(FZD7- peak1 &2 Mut;圖5)。與野生型相比FZD7 (FZD7-WT)突變在第二m6A峰和雙m6A峰值突變(FZD7-Peak2傻瓜和FZD7-Peak1&2Mut)野生型YTHDF1沒有反應(yīng)過度(7和8)圖5 h,面板,建議第二m6A峰FZD7 YTHDF1的主要網(wǎng)站的監(jiān)管。同樣，m6a結(jié)合能力的喪失完全消除了YTHDF1促進(jìn)FZD7 mRNA翻譯的作用(圖5H，圖9 12)。這些結(jié)果表明YTHDF1介導(dǎo)的FZD7的翻譯控制依賴于m6A修飾。提供整體課題外包實驗構(gòu)思。
piRNA-30473通過調(diào)控WTAP的表達(dá)介導(dǎo)m6A的甲基化
為了進(jìn)一步探討piRNA-30473在DLBCL中轉(zhuǎn)錄組調(diào)控中的作用，我們在轉(zhuǎn)染antiagomir-30473后48h檢測m6A整體甲基化水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染antiagomir-30473的細(xì)胞總體m6A水平降低(圖3A,3B)。METTL3,METTL14,WTAP,FTO和ALKBH5是關(guān)鍵的m6A甲基轉(zhuǎn)移酶或去甲基化酶，它們的失調(diào)可能導(dǎo)致DLBCL中m6A修飾譜異常。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制piRNA-30473降低了WTAP的表達(dá)(圖3C,3D)，而其他蛋白表達(dá)無明顯差異。同時，免疫共沉淀表明，antiagomir-30473處理降低了WTAP與METTTL3和METTTL14的相關(guān)性(圖3E)。接下來為了證明piRNA-30473在WTAPmRNA中是否存在結(jié)合位點，作者先使用miRNA特異性靶檢測算法確定假定的結(jié)合位點(圖3F)，后續(xù)實驗結(jié)果證明，piRNA-30473通過與WTAP的3’-UTR結(jié)合，降低了WTAPmRNA的衰減，進(jìn)而增強了mRNA的穩(wěn)定性(圖3G,3H)。 IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。出生缺陷拷貝數(shù)
完善的實驗平臺提供可視化的建模服務(wù)。海綿體
用戶界面SC2disease提供瀏覽器和搜索引擎，以查詢有關(guān)不同疾病中特定于細(xì)胞類型的基因的詳細(xì)信息，具體流程如圖。
“疾病”和“單元格類型”是SC2disease瀏覽器的根類別?！凹膊 备悇e中總共包括25種疾病，通過單擊疾病名稱可以顯示與所關(guān)注疾病相關(guān)的特定于細(xì)胞類型的基因的詳細(xì)信息。**初將所有細(xì)胞類型分為16組，以幫助想要瀏覽特定細(xì)胞類型中標(biāo)記基因的研究人員。還可以使用“搜索”功能搜索他們感興趣的疾病，基因或細(xì)胞類型。每個基因的信息將在表格中以一行顯示，其中包括疾病名稱，實驗組織，細(xì)胞類型，基因名稱，用于描述基因表達(dá)的變量名稱（log 2 FC或均值），變量的值，DEG比較，源發(fā)布的標(biāo)識符，排序平臺和詳細(xì)信息。 海綿體
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