7）NOX4通過(guò)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人體星形膠質(zhì)細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化促進(jìn)鐵死亡
為了探討NOX4調(diào)控AD星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的分子機(jī)制，我們檢測(cè)NOX4的升高是否能通過(guò)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人星形膠質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化促進(jìn)鐵死亡。我們用免疫熒光染色法測(cè)定了4-HNE在人星形膠質(zhì)細(xì)胞中的蛋白水平。免疫熒光染色顯示，與對(duì)照組相比，NOX4的升高增加了4-HNE蛋白的水平，增加了質(zhì)膜中脂質(zhì)過(guò)氧化源性液滴的含量，細(xì)胞的形狀出現(xiàn)收縮(圖7A)。NOX4過(guò)表達(dá)使4-HNE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量***增加(圖7B)。NOX4過(guò)表達(dá)增加了4-HNE水平和MDA水平(圖7C)。值得注意的是，與對(duì)照組相比，NOX4的升高增加了鐵的積累，這是鐵死亡的特異性標(biāo)志(圖7D)。 英拜提供可靠的技術(shù)咨詢。血細(xì)胞科研實(shí)驗(yàn)外包
對(duì)于我們檢測(cè)到的與血漿外泌體相關(guān)的大多數(shù)細(xì)胞因子，BC 外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)評(píng)估并未識(shí)別出同源受體。然而，分析我們的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，我們發(fā)現(xiàn)了大量的硫酸乙酰肝素 (HS) 和硫酸軟骨素 (CS) 蛋白聚糖，包括 CD44、HSPG2、glypican-1（GPC -1）、多聚糖（VCAN）和 syndecan-1（SDC1），在 BC 外泌體中。有趣的是，兩種鼠 BC 細(xì)胞來(lái)源的 EO771 和 PyMT 外泌體的蛋白多糖譜非常不同。定量地，ELISA 分析顯示 MDA-MB-231 細(xì)胞衍生的外泌體表現(xiàn)出與 EO771 相似的蛋白聚糖譜。GAG的存在于蛋白聚糖已顯示出結(jié)合細(xì)胞因子在不同細(xì)胞背景。因此，我們?cè)u(píng)估了這種結(jié)合在外泌體環(huán)境中是否也可能存在，并表明 versican、syndecan-1 和 CD44，以及 HSPG2，與外泌體結(jié)合的 CCL2 共沉淀。此外，添加分別催化蛋白聚糖的 HS 和 CS 鏈降解的肝素酶 III (HepIII) 和軟骨素酶 ABC (ChABC) 裂解酶，減少了 CCL2 與外泌體的結(jié)合。總體而言，這些數(shù)據(jù)表明細(xì)胞外細(xì)胞因子可以通過(guò)蛋白聚糖的外泌體表面 GAG 側(cè)鏈與*細(xì)胞分泌的外泌體結(jié)合。
METTL14作用于ELMO13'utr區(qū)特定的m6A修飾位點(diǎn)
作者進(jìn)一步研究了METTL14如何加快ELMO1mRNA的看降解。CLIP-PCR結(jié)果顯示，ELMO1在METTL14組比IgG組更富集，提示METTL14能特異性結(jié)合MSC中ELMO1mRNA轉(zhuǎn)錄本。先前的一項(xiàng)研究表明METTL14主要與mRNA的3'UTR結(jié)合，促進(jìn)mRNA變性。在雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中，與對(duì)照組相比，野生型中帶有ELMO13’utr的報(bào)告基因質(zhì)粒的熒光素酶活性明顯降低，而突變型METTL14則沒(méi)有。接下來(lái)，作者構(gòu)建了帶有突變ELMO13'UTR的報(bào)告質(zhì)粒用來(lái)驗(yàn)證ELMO1的m6A修飾位點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，只有突變的1型ELMO13’UTR的報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性恢復(fù)到正常水平。進(jìn)行2，3型ELMO13’UTR突變的報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性與野生型ELMO13’UTR報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性相當(dāng)。通過(guò)CLIP檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ELMO1mRNA結(jié)合得失YTHDF2和YTHDF3，而不是YTHDF1、YTHDC1和YTHDC2。
qRT-PCR結(jié)果表明，暴露于miR-144模擬物處理的鼻咽*細(xì)胞的HUVECs中miR-144上調(diào)，而暴露于miR-144inhibitor處理的鼻咽*細(xì)胞的HUVECs中miR-144下調(diào)(圖3C)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-144過(guò)表達(dá)EVs足以增強(qiáng)HUVECs的遷移和侵襲，而miR-144抑制EVs則表現(xiàn)出相反的趨勢(shì)(圖3D和3E)。此外，我們還通過(guò)傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVECs的增殖和遷移能力(圖3F)。結(jié)果顯示，與NC模擬EV組相比，miR-144模擬EV組細(xì)胞的創(chuàng)面愈合率升高，說(shuō)明C666-1-和SUNE1細(xì)胞來(lái)源的EVmiR-144均促進(jìn)HUVECs的增殖和遷移。與NC抑制EV組相比，miR-144抑制EV組的細(xì)胞創(chuàng)面愈合率降低，提示C666-1-和SUNE1EV細(xì)胞EVmiR-144抑制后，HUVECs的增殖和遷移受到抑制。大黃酸處理改變腸道菌群組成。
circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸通過(guò)***EMT促進(jìn)ESCC進(jìn)展
我們研究了circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸參與ESCC進(jìn)展的基本機(jī)制。KEGG分析、GSVA、GSEA表明LAMA1高表達(dá)與EMT***密切正相關(guān)，提示EMT可能是LAMA1在ESCC中致*作用的原因。正如預(yù)期的那樣，westernblotting顯示，LAMA1敲低后，MMP2/7/9、N-cadherin、Snail、Slug和vimentin的蛋白水平降低，E-cadherin的蛋白水平升高。此外，circPDE3B沉默后也觀察到類(lèi)似的抑制作用。拯救實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-4766-5pinhibitor共轉(zhuǎn)染***逆轉(zhuǎn)了circPDE3B沉默誘導(dǎo)的EMT抑制作用，然而LAMA1siRNA共轉(zhuǎn)染***逆轉(zhuǎn)了circPDE3B過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的EMT促進(jìn)作用。總之，circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸通過(guò)***EMT促進(jìn)ESCC進(jìn)展。 英拜生物提供生物科學(xué)內(nèi)的專(zhuān)業(yè)的技術(shù)咨詢，技術(shù)合作。成都眼缺血綜合癥科研
METTL14是其***的潛在靶點(diǎn)。血細(xì)胞科研實(shí)驗(yàn)外包
以上數(shù)據(jù)提示，miR-934異常高表達(dá)與結(jié)直腸***進(jìn)展及肝轉(zhuǎn)移***相關(guān)。生存分析顯示，與miR-934表達(dá)較低的患者相比，miR-934表達(dá)較高的患者總生存期(OS)和無(wú)病生存期(DFS)較低（Fig.1f,g）。因此，在CRLM患者中，miR-934高表達(dá)與CRLM進(jìn)展和預(yù)后不良呈正相關(guān)。
2、miR-934存在于CRC細(xì)胞衍生的外泌體中
miR-934在HCT-8和LoVo的CM中的表達(dá)***高于其它細(xì)胞（Fig.2a）。隨后，研究發(fā)現(xiàn)HCT-8和LoVo的CM中miR-934的表達(dá)***高于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（Fig.2b,c）。并且，miR-934在CM中的表達(dá)不隨RNaseA的處理而改變，而隨RNaseA+TritonX-100的處理***下降（Fig.2d），這表明細(xì)胞外的miR-934被膜包裹，而不是直接分泌。因此，推測(cè)miR-934可能是被外泌體傳輸。電鏡和納米顆粒追蹤分析表明，miR-934表達(dá)水平較高的CRC細(xì)胞分泌的外泌體比miR-934表達(dá)水平較低的CRC細(xì)胞分泌的外泌體更多（Fig.2e,f）。各組外泌體標(biāo)志物CD9，ALIX，TSG101均被WB檢測(cè)到（Fig.2g）。為了闡明miR-934是否主要來(lái)源于CRC細(xì)胞的外泌體，使用GW4869抑制CRC細(xì)胞的外泌體分泌，發(fā)現(xiàn)miR-934在CRC細(xì)胞來(lái)源的外泌體中的表達(dá)水平明顯高于外泌體耗盡的CRC細(xì)胞（Fig.2h）。
血細(xì)胞科研實(shí)驗(yàn)外包
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)