這可能部分解釋了第3天巨噬細胞的增加。此外，流式細胞術(shù)數(shù)據(jù)顯示M2樣巨噬細胞(CD206+IL4RA+)的百分比在第1天（急性炎癥期）下降并從第3天開始增加（ADM階段），而這些M2樣巨噬細胞的數(shù)量在第3天達到峰值，然后迅速減少。此外，流式細胞術(shù)數(shù)據(jù)與免疫熒光分析一致，其中F4/80+CD206+細胞在第3天**豐富。
接下來，我們想知道這些CCR2+單核細胞/巨噬細胞是否可以在胰腺損傷后重新編程為M2樣巨噬細胞。在植入和誘導(dǎo)AP8周后，我們發(fā)現(xiàn)第3天的增殖巨噬細胞(Ki67+)主要來自CCR2WT小鼠。與來自CCR2KO小鼠的巨噬細胞相比，來自CCR2WT小鼠的巨噬細胞表現(xiàn)出更高的CD206和IL4RA表達水平。綜上所述，結(jié)果表明，ADM階段的M2樣巨噬細胞主要來源于CCR2+單核細胞/巨噬細胞，這些細胞在AP早期募集。 ***ATM對PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***。肝脂肪變性課題設(shè)計實驗
細胞因子結(jié)合改變外泌體的生物分布和細胞譜系特異性攝取
為了確定上述觀察到的 TIF 偶聯(lián)外泌體分布改變的機制，將 CCL2 偶聯(lián)、熒光標記的 EO771 BC 細胞衍生的外泌體靜脈注射到同基因小鼠中。各種***（包括肝、脾、腎、肺、心臟和骨髓）的離體成像證明 CCL2 偶聯(lián)的外泌體在肺中的積累顯著增加，這通過肺組織切片的熒光顯微鏡證實。CCL2 優(yōu)先與其受體 CCR2 結(jié)合，肺白細胞通常為 CCR2 +。相反，據(jù)報道也作為 CCL2 受體發(fā)揮作用的 CCR4，在肺白細胞中無法檢測到。與未結(jié)合的外泌體相比，CCL2 結(jié)合的外泌體被肺 CD45.2 + CCR2 +白細胞更有效地吸收，而 CD45.2 + CCR2 -白細胞沒有表現(xiàn)出不同的吸收。特別是在顯示不同 CCR2 +和 CCR2 -群體的mMDSC 中，我們發(fā)現(xiàn)與 CCR2 -細胞相比，CCL2 +細胞中CCL2 偶聯(lián)的外泌體更豐富，而未偶聯(lián)的外泌體攝取相似。 重慶課題協(xié)同創(chuàng)作進一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細胞對基因毒性損傷的反應(yīng)。
我們進一步的研究表明，circPDE4B調(diào)控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩(wěn)定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對照(NC)和sh-circPDE4B 的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩(wěn)定性。經(jīng)PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過表達和下調(diào)細胞中均未發(fā)生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過蛋白酶體活性調(diào)節(jié)RIC8A。無論內(nèi)源性還是外源性RIC8A, RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過表達circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上所述，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導(dǎo)的RIC8A的降解和周轉(zhuǎn)。
piRNA-30473通過調(diào)控WTAP的表達介導(dǎo)m6A的甲基化
為了進一步探討piRNA-30473在DLBCL中轉(zhuǎn)錄組調(diào)控中的作用，我們在轉(zhuǎn)染antiagomir-30473后48h檢測m6A整體甲基化水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染antiagomir-30473的細胞總體m6A水平降低(圖3A,3B)。METTL3,METTL14,WTAP,FTO和ALKBH5是關(guān)鍵的m6A甲基轉(zhuǎn)移酶或去甲基化酶，它們的失調(diào)可能導(dǎo)致DLBCL中m6A修飾譜異常。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制piRNA-30473降低了WTAP的表達(圖3C,3D)，而其他蛋白表達無明顯差異。同時，免疫共沉淀表明，antiagomir-30473處理降低了WTAP與METTTL3和METTTL14的相關(guān)性(圖3E)。接下來為了證明piRNA-30473在WTAPmRNA中是否存在結(jié)合位點，作者先使用miRNA特異性靶檢測算法確定假定的結(jié)合位點(圖3F)，后續(xù)實驗結(jié)果證明，piRNA-30473通過與WTAP的3’-UTR結(jié)合，降低了WTAPmRNA的衰減，進而增強了mRNA的穩(wěn)定性(圖3G,3H)。 IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。
8）SOCS6通過泛素化和降解p65抑制NF-κB信號通路
鑒于miR-155通過增強細胞質(zhì)和細胞核中p65的表達負調(diào)控SOCS6的表達，并***NF-κB信號通路，我們下一步研究SOCS6與p65之間潛在的相互作用。首先，我們在bEnd.3細胞中過表達或下調(diào)SOCS6。發(fā)現(xiàn)p65表達與SOCS6水平呈負相關(guān)(圖8A)。DiscoveryStudio?分析的3D對接也表明SOCS6可能與p65相互作用(圖8B)。此外，熒光共定位實驗表明，SOCS6與p65在細胞質(zhì)***定位(圖8C和D)，Co-IP實驗進一步揭示了SOCS6與p65的相互作用(圖8E)。值得注意的是蛋白酶體MG132可以部分逆轉(zhuǎn)SOCS6過表達對p65蛋白水平的抑制作用(圖8F)。同時，在環(huán)己酰亞胺的情況下，SOCS6的沉默***延緩了內(nèi)源性p65的降解速率，而過表達SOCS6則***加速了p65的降解(圖8G)。***，通過泛素化實驗驗證SOCS6是否通過蛋白酶體降解誘導(dǎo)p65失穩(wěn)。我們發(fā)現(xiàn)過表達SOCS6增加了bEnd.3細胞中p65多聚泛素化。沉默SOCS6則相反(圖8H)。綜上所述，這些結(jié)果表明SOCS6可以與p65結(jié)合并誘導(dǎo)其多聚泛素化和蛋白酶體降解。 小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)?？肆_恩課題實驗檢測服務(wù)
TRF測序課題整體服務(wù)。肝脂肪變性課題設(shè)計實驗
3.Tempol可改善PCOS大鼠全身和腸道的氧化應(yīng)激
DHEA+PBS組大鼠血清MDA水平明顯高于油+PBS組，血清T-AOC水平明顯低于oil+PBS組。給藥Tempol可***降低PCOS大鼠血清MDA水平，提高血清T-AOC水平(圖3A-B)。研究發(fā)現(xiàn)，DHEA聯(lián)合或不聯(lián)合tempol對血清3’-NT和AGEs水平均無影響(圖3C-D)。作者測定卵巢中氧化應(yīng)激生物標志物的水平，PCOS大鼠卵巢MDA、3-NT、AGEs水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖3E-G)，PCOS大鼠卵巢T-AOC水平未見明顯下降(圖3H)；然而，這些大鼠的SOD活性降低(圖3I)。WB分析顯示，PCOS大鼠卵巢中SOD1表達下降，而SOD2表達未發(fā)生變化(圖3J)。Tempol對PCOS大鼠這些氧化應(yīng)激標志物的水平?jīng)]有明顯影響，甚至進一步降低了卵巢SOD活性(圖3E-I)，這表明Tempol對卵巢氧化應(yīng)激沒有直接影響。 肝脂肪變性課題設(shè)計實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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