6）DRD2通過下調(diào)DDX5和eEF1A2來抑制NF-κB通路的***和**的發(fā)生
DRD2異位表達***抑制了p65和NF-κB靶基因IL-10的mRNA表達(圖6A)，表明在沒有配體***的情況下，DRD2是NF-κB通路的負調(diào)控因子。除了結合***β-arrestin2外，DRD2還可能通過其他方式抑制NF-κB信號通路。采用Co-IP法分離可能的結合蛋白，并采用質譜法進行蛋白鑒定。MDA-MB231和BT549細胞的所有結合蛋白中，DDX5、eEF1A2和ICAM-1均被異位表達的DRD2下調(diào)(圖6B-C)。根據(jù)以往的研究，DDX5和eEF1A2是幾種**中的兩種致*基因。WB也證實了DDX5和eEF1A2蛋白水平下調(diào)(圖6D)。在293T和MDA-MB231中，通過Co-IP和IB實驗證實了DRD2、DDX5和eEF1A2的結合(圖6E)，表明這三種蛋白形成了一個復合物。根據(jù)以往的研究，DDX5可以結合p50，并協(xié)助IκB釋放p50。本研究還揭示了293T和MDA-MB231中DDX5與p50的結合(圖6E)。 soRNA測序的 整套服務。醫(yī)學相關課題地區(qū)科學基金
細胞因子結合改變外泌體的生物分布和細胞譜系特異性攝取
為了確定上述觀察到的 TIF 偶聯(lián)外泌體分布改變的機制，將 CCL2 偶聯(lián)、熒光標記的 EO771 BC 細胞衍生的外泌體靜脈注射到同基因小鼠中。各種***（包括肝、脾、腎、肺、心臟和骨髓）的離體成像證明 CCL2 偶聯(lián)的外泌體在肺中的積累顯著增加，這通過肺組織切片的熒光顯微鏡證實。CCL2 優(yōu)先與其受體 CCR2 結合，肺白細胞通常為 CCR2 +。相反，據(jù)報道也作為 CCL2 受體發(fā)揮作用的 CCR4，在肺白細胞中無法檢測到。與未結合的外泌體相比，CCL2 結合的外泌體被肺 CD45.2 + CCR2 +白細胞更有效地吸收，而 CD45.2 + CCR2 -白細胞沒有表現(xiàn)出不同的吸收。特別是在顯示不同 CCR2 +和 CCR2 -群體的mMDSC 中，我們發(fā)現(xiàn)與 CCR2 -細胞相比，CCL2 +細胞中CCL2 偶聯(lián)的外泌體更豐富，而未偶聯(lián)的外泌體攝取相似。 醫(yī)學科研課題細胞實驗我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達譜。
4.ELNAT1直接與hnRNPA1相互作用
由于lncRNA的分子功能與其亞細胞定位相關，通過FISH和亞細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)ELNAT1在UM-UC-3和T24細胞的細胞質和細胞核均有表達（SupplementalFigure7A,B）。并且通過RNA-pulldown實驗，發(fā)現(xiàn)在分子量35~40kDa上有明顯的條帶（Figure4A）。對此，通過質譜（MS）和Westernblot分析顯示，hnRNPA1是**豐富的ELNAT1相互作用蛋白（Figure4B-D）。熒光染色和RNA免疫沉淀（RIP）證實了ELNAT1和hnRNPA1在UM-UC-3和T24細胞中的共定位，并且ELNAT1通過內(nèi)源性hnRNPA1富集（Figure4E,F），進一步驗證了ELNAT1和hnRNPA1之間的相互作用。
QKI促進NSCLC細胞中circNDUFB2的生物發(fā)生
circNDUFB2和NDUFB2均來自NDUFB2 pre-mRNA，而NDUFB2 mRNA在NSCLC中略有上調(diào)。因此，推測circNDUFB2的下調(diào)在轉錄后發(fā)生。我們在circNDUFB2中搜索與潛在QRE匹配的序列。接下來進行了RIP分析，確認QKI確實與NDUFB2 pre-mRNA中的假定QRE結合。在NSCLC細胞中QKI過表達可能會上調(diào)circNDUFB2。 這些數(shù)據(jù)表明，QKI與NDUFB2 pre-mRNA的circNDUFB2形成外顯子側翼的內(nèi)含子結合，從而促進circNDUFB2的形成。 促*分泌體通過外泌體傳遞和運輸是轉移前微環(huán)境形成和轉移的關鍵。
4）CircMAPK1編碼109個氨基酸的新蛋白MAPK1-109aa
根據(jù)在線數(shù)據(jù)庫circRNADb的預測結果，circMAPK1序列中包含一個開放閱讀框，起始密碼子為ATG，IRES位于274-327nt。這一觀察結果表明circMAPK1具有編碼109aa蛋白的潛能，本研究將其命名為MAPK1-109aa(圖4a)。為了驗證預測的IRES在circMAPK1中的活性，我們進行了雙熒光素酶檢測，結果顯示野生型IRES報告基因的熒光素酶活性明顯高于突變型IRES報告基因的熒光素酶活性(圖4b)。為了進一步證實MAPK1-109aa的存在，我們將circMAPK1IRES突變質粒和circMAPK1過表達質粒轉入HEK293T細胞。銀染色結果顯示，在分子量為13kDa時存在明顯的蛋白帶，與MAPK-109aa的預測大小一致。MS檢測到AMEIMLNSKLCL序列，與MAPK1-109aa含有特定C端序列LCL的氨基酸序列一致(圖4c)。為了檢測該多肽產(chǎn)物，我們使用了一種識別MAPK1中間部分的抗體(圖4d)。WesternBlot檢測40對胃*組織(圖4e)和細胞系(圖4f)中MAPK1-109aa和MAPK1的水平。 英拜生物對整體實驗實施的全局把控。炎癥課題售后服務
有肝轉移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉移的PDAC患者。醫(yī)學相關課題地區(qū)科學基金
英拜生物提供糖尿病風險評估7項檢測：1型糖尿病、1型糖尿病腎病、2型糖尿病等。基因芯片(genechip)是目前生物芯片家族中**完善、應用*****的芯片，將許多特定的寡聚核苷酸或DN**段(稱為探針)固定在芯片的每個預先設置的區(qū)域內(nèi)，將待測樣本標記后同芯片進行雜交，利用堿基互補配對原理進行雜交，通過檢測雜交信號并進行計算機分析，從而檢測對應片段是否存在、存在量的多少，以用于疾病的臨床診斷和檢測等眾多方面。運用縮微技術，基因芯片能夠同時分析成千上萬個生物樣本，將許多不連續(xù)的分析過程集成于玻璃介質上，使這些分析過程連續(xù)化、微型化、集成化和自動化。醫(yī)學相關課題地區(qū)科學基金
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗