單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞來源的外泌體miR-101-3p和miR-423-5p可轉(zhuǎn)入MB細(xì)胞
前面發(fā)現(xiàn)miR-101-3p和miR-423-5p在MB患者血漿分離的PBMCs和外泌體中均上調(diào)，而這兩種miRNAs在**組織中的表達(dá)均低于相鄰正常腦組織。這表明含有這兩種mirna的外泌體來自免疫細(xì)胞而不是**細(xì)胞，是對**的免疫反應(yīng)的結(jié)果。巨噬細(xì)胞來源的外泌體占血液中循環(huán)微泡的很大比例。為了確定含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體的來源，從THP-1單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離出外泌體，并檢測miR-101-3p和miR-423-5p的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)miR-101-3p和miR-423-5p在分離的外泌體中的表達(dá)高于THP-1細(xì)胞。用轉(zhuǎn)染miR-101-3p/miR-423-5p模擬物或miR-NC的THP-1細(xì)胞衍生的外泌體培養(yǎng)Daoy細(xì)胞，觀察到這些外泌體也可以轉(zhuǎn)移到Daoy細(xì)胞中，并且培養(yǎng)后miR-101-3p和miR-423-5p的表達(dá)水平較高。與對照組相比，來自轉(zhuǎn)染miR-101/miR-423模擬物的THP-1細(xì)胞上清液的外泌體***抑制Daoy細(xì)胞的增殖能力。 FMT處理***增加了SCI小鼠腸道菌群的豐富度。醫(yī)學(xué)相關(guān)標(biāo)書細(xì)胞實驗
四、原始和committed亞型的免疫表型
我們采用質(zhì)譜耦合流式細(xì)胞儀(CyTOF)分析，在單細(xì)胞水平上探討9例原始AML npm1突變和8例committed npm1突變的患者的免疫表型差異。我們使用細(xì)胞術(shù)(diffcyt)27管道來計算定義具有相似高維表型的細(xì)胞群(免疫表型簇)。每個免疫表型聚類映射到二維t-隨機(jī)近鄰嵌入(t-SNE)圖上的離散區(qū)域(圖4A;補(bǔ)充圖20、21)，證實它們表達(dá)不同的免疫表型。分析顯示，七種不同水平的CD45和造血祖細(xì)胞標(biāo)記物(CD34, CD38)或骨髓單核細(xì)胞分化標(biāo)記物(CD33, CD14, CD11c, CD16, HLA-DR)的惡性免疫表型集群在這兩種亞型之間差異豐富(圖4B，C)。確診病例中也包含較高豐度的非白血病免疫表型集群，包括CD45hi T (CD3+)、B (CD19+)和NK (CD3 CD56+ CD16+)細(xì)胞(補(bǔ)充圖20)。 推薦標(biāo)書整體服務(wù)circNDUFB2敲低促進(jìn)這些表型。
3）IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的HSC活化和肝纖維化中至關(guān)重要
為了進(jìn)一步探索Pex調(diào)控HSC行為的機(jī)制，我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達(dá)譜(圖3A)。在差異表達(dá)基因中，我們觀察到41個重疊的上調(diào)基因在Pan02exo組與Npex組和KPCexo組與Npex組之間存在部分交集(圖3B)。主要涉及的基因參與細(xì)胞外空間、細(xì)胞外區(qū)域和ECM(圖3C)，表明Pex調(diào)節(jié)HSC的ECM分泌。此外，GO和KEGG通路分析顯示，IGF-1及其下游PI3K/AKT是受Pex影響的排名比較高的信號通路(圖3D，E)。westernblot分析支持了Pex***增加HSC中IGF-1R、IRS-1和AKT磷酸化的發(fā)現(xiàn)(圖3F)。當(dāng)使用IGF-1R抑制劑時，Pex誘導(dǎo)的p-IGF-1R、p-IRS-1和p-AKT的上調(diào)被阻斷(圖3G)?；谶@些結(jié)果，我們推測IGF-1信號可能是介導(dǎo)Pex依賴的HSC活化的關(guān)鍵因素。與預(yù)期的一樣，IGF-1R抑制劑抑制了Pex誘導(dǎo)的HSC的活化、增殖和遷移(圖4A-D)。此外，IGF-1R抑制劑逆轉(zhuǎn)了Pex誘導(dǎo)的HSC中ECM的產(chǎn)生(圖4E)。我們的體內(nèi)實驗表明，IGF-1R抑制劑可以阻斷Pex誘導(dǎo)的肝纖維化(圖4F-I)。這些數(shù)據(jù)表明IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。
piRNA-30473通過調(diào)控WTAP的表達(dá)介導(dǎo)m6A的甲基化
為了進(jìn)一步探討piRNA-30473在DLBCL中轉(zhuǎn)錄組調(diào)控中的作用，我們在轉(zhuǎn)染antiagomir-30473后48h檢測m6A整體甲基化水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染antiagomir-30473的細(xì)胞總體m6A水平降低。METTL3,METTL14,WTAP,FTO和ALKBH5是關(guān)鍵的m6A甲基轉(zhuǎn)移酶或去甲基化酶，它們的失調(diào)可能導(dǎo)致DLBCL中m6A修飾譜異常。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制piRNA-30473降低了WTAP的表達(dá)，而其他蛋白表達(dá)無明顯差異。同時，免疫共沉淀表明，antiagomir-30473處理降低了WTAP與METTTL3和METTTL14的相關(guān)性。接下來為了證明piRNA-30473在WTAPmRNA中是否存在結(jié)合位點，作者先使用miRNA特異性靶檢測算法確定假定的結(jié)合位點，后續(xù)實驗結(jié)果證明，piRNA-30473通過與WTAP的3’-UTR結(jié)合，降低了WTAPmRNA的衰減，進(jìn)而增強(qiáng)了mRNA的穩(wěn)定性。 WB結(jié)果顯示結(jié)腸中炎癥分子的相對表達(dá)似乎低于脊髓中的。
放線菌素D處理后的 qRT-PCR 和 RT-PCR 分析表明，circACTN4 在指定的時間點具有抗性。隨后，生物信息學(xué)預(yù)測上游轉(zhuǎn)錄因子2(USF2)可能與ACTN4的啟動子結(jié)合。因此，構(gòu)建了攜帶全長野生型和突變型ACTN4啟動子的熒光素酶報告基因載體，結(jié)果表明USF2增強(qiáng)了熒光素酶野生型熒光素酶報告基因的活性。Chip-qPCR檢測進(jìn)一步證明USF2可以與ACTN4基因啟動子結(jié)合并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。設(shè)計并構(gòu)建了USF2過表達(dá)和敲低質(zhì)粒，通過qRT-PCR檢測到轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒的BC細(xì)胞中ACTN4的表達(dá)。結(jié)果表明，上調(diào)的 USF2 顯著增加了線性ACTN4和circACTN4的表達(dá)，而下調(diào)的USF2顯著降低了線性ACTN4和circACTN4的水平。這些結(jié)果表明ACTN4是轉(zhuǎn)錄因子USF2的靶基因。
FMT處理可能導(dǎo)致SCI后胃腸道消化活力變快。生物相關(guān)標(biāo)書售后服務(wù)
采用LEfSe方法分析經(jīng)DHEA和tempol處理后***改變的關(guān)鍵系統(tǒng)發(fā)育類型。醫(yī)學(xué)相關(guān)標(biāo)書細(xì)胞實驗
體內(nèi)ferroptosis與奧拉帕尼介導(dǎo)的**抑制相關(guān)
為了證實ferroptosis與奧拉帕尼體內(nèi)療效的潛在相關(guān)性，我們將A2780細(xì)胞接種到裸鼠中，并給小鼠注射奧拉帕尼、liproxstatin-1(一種穩(wěn)定的ferroptosis拮抗劑)，或兩者同時使用。與體外實驗結(jié)果一致，奧拉帕尼***降低了**的生長。單獨使用liproxstatin-1***并不影響**生長，但奧拉帕尼的療效部分消失，提示奧拉帕尼誘導(dǎo)**發(fā)生ferroptosis，抑制ferroptosis導(dǎo)致體內(nèi)奧拉帕尼耐藥。為了驗證在體內(nèi)使用FINs增強(qiáng)ferroptosis是否能使BRCA卵巢*對奧拉帕尼敏感，我們將HEY細(xì)胞接種到裸鼠中，并同時給小鼠使用奧拉帕尼、磺胺吡啶或兩種藥物。雖然單獨使用磺胺吡啶并沒有***降低**生長或延長小鼠存活率，但它確實***提高了這些HEY源性**對奧拉帕尼的敏感性，導(dǎo)致了有效的**抑制和生存益處。值得注意的是，與其他***相比，奧拉帕尼聯(lián)合磺胺吡啶的小鼠體重并沒有明顯下降，提示奧拉帕尼聯(lián)合磺胺吡啶的毒性在體內(nèi)是耐受的?？偟膩碚f，奧拉帕尼和磺胺吡啶聯(lián)合***BRCA野生型卵巢*是一種有前景的***策略。 醫(yī)學(xué)相關(guān)標(biāo)書細(xì)胞實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗