4.ELNAT1直接與hnRNPA1相互作用
由于lncRNA的分子功能與其亞細(xì)胞定位相關(guān)，通過FISH和亞細(xì)胞定位實驗發(fā)現(xiàn)ELNAT1在UM-UC-3和T24細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有表達（SupplementalFigure7A,B）。并且通過RNA-pulldown實驗，發(fā)現(xiàn)在分子量35~40kDa上有明顯的條帶（Figure4A）。對此，通過質(zhì)譜（MS）和Westernblot分析顯示，hnRNPA1是**豐富的ELNAT1相互作用蛋白（Figure4B-D）。熒光染色和RNA免疫沉淀（RIP）證實了ELNAT1和hnRNPA1在UM-UC-3和T24細(xì)胞中的共定位，并且ELNAT1通過內(nèi)源性hnRNPA1富集（Figure4E,F），進一步驗證了ELNAT1和hnRNPA1之間的相互作用。 英拜生物對實驗可行性分析。項目課題分子生物學(xué)實驗
急性髓系白血病(AML)的靶向***的實施一直具有挑戰(zhàn)性。FTO是一種m6A去甲基酶，作為一種致*基因，促進白血病*基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病發(fā)生。因此為大家介紹于2021年3月發(fā)表于影響因子為8.579的Theranostics上文章“Saikosaponin D exhibits anti-leukemic activity by targeting FTO/m6A signaling”。在這里，我們研究了Saikosaponin-d (SsD)在AML中***的抗增殖作用中的作用，并通過靶向SsD的FTO來評估m(xù)6A去甲基化活性。SsD在體外和體內(nèi)均能***抑制AML細(xì)胞增殖，促進細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。機制上，SsD直接靶向FTO，從而增加了m6A RNA的甲基化，降低了下游基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，導(dǎo)致相關(guān)通路的抑制。重要的是，SsD還克服了FTO/m6A介導(dǎo)的白血病對酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性。總之，F(xiàn)TO依賴的m6A RNA甲基化介導(dǎo)了SsD的抗白血病作用，使SsD成為一種***白血病的藥物。cancer課題售后服務(wù)按照實驗設(shè)計路線和實驗結(jié)果進行文章的構(gòu)思與潤色。
circPDE3B的致*作用部分依賴于LAMA1
為了研究LAMA1在ESCC侵襲表型中的作用，我們進行了qRT-PCR，結(jié)果表明LAMA1在ESCC細(xì)胞系和組織中過表達。TCGAESCC數(shù)據(jù)集也得到了類似的結(jié)果。同樣，對10對匹配的ESCC組織和相鄰的非*組織進行westernblotting，發(fā)現(xiàn)在ESCC組織中LAMA1表達***上調(diào)。通過免疫組化研究LAMA1在組織中的表達，發(fā)現(xiàn)ESCC組織比相鄰的非*組織具有更強的LAMA1染色。與LAMA1低表達的患者相比，LAMA1高表達的患者平均OS和DFS天數(shù)減少。這些結(jié)果均提示LAMA1可能在ESCC進展中發(fā)揮致*作用。接著，我們驗證了circPDE3B在ESCC中的致*活性是否依賴于LAMA1。CCK-8和集落形成實驗表明，抑制LAMA1表達可損害細(xì)胞增殖。然而，共轉(zhuǎn)染circPDE3B載體***逆轉(zhuǎn)了這種抑制作用。同樣，與circPDE3B載體共轉(zhuǎn)染后，LAMA1沉默誘導(dǎo)的受損細(xì)胞遷移和侵襲能力被消除。
CircRNF13通過SUMO2促進SLUT1的泛素化
接下來探究circRNF13是否是通過SUMO2來促進SLUT1的泛素化的。利用anti-Flag-GLUT1抗體進行共免疫沉淀(Co-IP)實驗，驗證GLUT1與SUMO2蛋白之間的相互作用。在SUMOylation期間，UBC9是***可以直接識別底物并催化SUMO蛋白c端羧基與底物蛋白結(jié)合進行修飾的連接酶。Co-IP實驗揭示了GLUT1和UBC9之間的相互作用。免疫熒光也顯示SUMO2和GLUT1蛋白有共定位。WB顯示過表達circRNF13促進GLUT1的SUMOylation，敲低circRNF13抑制GLUT1的SUMOylation。此外，泛素化實驗表明，過表達SUMO2可加速GLUT1的泛素化，而當(dāng)共轉(zhuǎn)染si-circRNF13和SUMO2過表達載體時，si-circRNF13可減弱SUMO2誘導(dǎo)的GLUT1泛素化水平。這些結(jié)果提示，circRNF13通過與SUMO2結(jié)合調(diào)控GLUT1泛素化?？傊?，circRNF13促進GLUT1的泛素化，抑制GLUT1的表達，從而抑制NPC細(xì)胞的糖酵解過程。 高通量測序的后續(xù)成文服務(wù)。
為了驗證circMYH9 是否通過 p53 途徑調(diào)節(jié)SG的合成。qRT-PCR和WB 證明了circMYH9 對p53的負(fù)調(diào)節(jié)。Nutlin-3可*** p53。Nutlin-3處理過表達 circMYH9的 LoVo 細(xì)胞逆轉(zhuǎn)了p53和MDM2的下調(diào)，并抑制了SG生物合成途徑基因表達和細(xì)胞增殖。而circMYH9耗盡的HCT116細(xì)胞中的p53沉默則顯示出相反的效果。還在過度表達 circMYH9 的 LoVo 細(xì)胞中用 shRNA 敲低了 PHGDH。PHGDH 抑制顯示出與 Nutlin-3 處理類似的效果，但不影響 p53 表達。此外，與對照細(xì)胞相比，具有 circMYH9 敲除的體內(nèi)異種移植物的 IHC 顯示出更高的 p53 表達和更低的 PHGDH 和 PSPH 表達。相比之下，circMYH9 過表達異種移植物的 IHC 顯示 p53 的表達較低，而 PHGDH 和 PSPH 的表達高于載體細(xì)胞的表達。這些結(jié)果證實了 circMYH9 在 p53 通路和從頭 SG 代謝的調(diào)節(jié)中的主要作用。醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。內(nèi)分泌課題服務(wù)兩年
Pex調(diào)節(jié)HSC的ECM分泌。項目課題分子生物學(xué)實驗
LCAT3招募FUBP1***MYC轉(zhuǎn)錄
芯片分析表明，F(xiàn)UBP1在肺*細(xì)胞中與c-MYC啟動子結(jié)合。FUBP1在LCAT3敲低后***降低。因此，LCAT3似乎是FUBP1與c-MYC啟動子結(jié)合所必需的。然后，然后，我們測試了LCAT3是否通過將FUBP1招募到c-MYC啟動子上的FUSE序列中來***c-MYC表達。使用c-MYC啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因，在有或沒有FUSE序列的情況下，我們發(fā)現(xiàn)LCAT3或FUBP1基因敲低后，c-MYC啟動子活性受到抑制，這種抑制方式依賴于FUSE序列。因此，LCAT3將FUBP1招募到MYCFUSE序列中來***其轉(zhuǎn)錄。 項目課題分子生物學(xué)實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗