服務(wù)流程2.1標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)流程1)客戶溝通,確認(rèn)實驗位點,并進(jìn)行相關(guān)分析,提示實驗可行性。2)建立實驗方案,并在此過程中和客戶保持密切溝通。3)大規(guī)模實驗,有嚴(yán)格的指控流程保證實驗結(jié)果可靠。4)補(bǔ)數(shù)據(jù)，盡可能提高樣本的使用率。實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量控制流程1)所有分型信號要求信號清晰***,排除不確定信號干擾。2)每板數(shù)據(jù)中都有陰性對照,質(zhì)控PCR和LDR污染數(shù)據(jù)。3)整個實驗服務(wù)流程有15%的雙盲重復(fù)對照,保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。4)利用HWE原理進(jìn)行數(shù)據(jù)評估。本公司在多年miRNA表達(dá)譜芯片服務(wù)的基礎(chǔ)上,推出基于lluminaGAllx的smallRNA測序服務(wù).海南測序贈送提供技術(shù)路線
長鏈非編碼RNAs(longnon-codingRNAs,IncRNAs)是-類長度大于200nt且不編碼蛋白質(zhì)的RNAS(不含rRNA),***存在于各種生物體內(nèi)。IncRNAs參與表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后等多水平的調(diào)控過程,在生命活動中具有重要作用。本公司IncRNA測序服務(wù)使用高通量測序技術(shù)結(jié)合先進(jìn)的生物信息學(xué)分析,-次性獲得樣本中幾乎全部的IncRNAs.信息,為您***、深入地研究IncRNAs的功能提供了全新的工具。實驗流程：1.樣品提取總RNA后,去除rRNA。2.RN**斷化。3.以短片段為模板,用六堿基隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cDNA。4.經(jīng)純化、末端修復(fù)、加堿基A、加測序接頭的步驟,根據(jù)測序長度和是否做對讀測序,確定瓊脂糖凝膠電泳回收片段的大小，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,完成測序文庫的制備。5.構(gòu)建好的文庫經(jīng)cBot擴(kuò)增,用IluminaHiseq2500進(jìn)行對讀測序。海南測序贈送提供技術(shù)路線人全外顯子組測序技術(shù)已逐步應(yīng)用到單基因致病基因和復(fù)雜疾病易感基因研究中。
連接酶檢測反應(yīng)(LigaseDetectionReaction,LDR)LDR是利用高溫連接酶實現(xiàn)對基因多態(tài)性位點的識別。高溫連接酶一旦檢測到DNA與互補(bǔ)的兩條穿聚核苷酸接頭對應(yīng)處存在著基因點突變類型的堿基錯配,則連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。如圖1:右邊的探針與模板有一個堿基不配對,所以連接反應(yīng)不能進(jìn)行,沒有連接產(chǎn)物;左邊的探針與模板DNA完全互補(bǔ)，故進(jìn)行連接反應(yīng)。通過溫控循環(huán)該特異性連接反應(yīng)可反復(fù)進(jìn)行,達(dá)到線性擴(kuò)增的效果。PCR-LDR技術(shù)分型實驗流程1)通過多重PCR(MultiplexPCR)獲得含有待檢測突變位點的基因片斷,2)進(jìn)行多重LDR(MultiplexLDR)進(jìn)行特異性分型檢測。3)***通過測序儀電泳讀取檢測結(jié)果。
piRNA是一類長度為26~31nt單鏈的小RNA,大部分集中在29~30nt。piRNA的表達(dá)具有組織特異性,只存在于具有全能性的動物細(xì)胞,如生殖細(xì)胞、**細(xì)胞和干細(xì)胞等。piRNA通過與Piwi亞家族蛋白結(jié)合形成piRNA復(fù)合物(piRC)來發(fā)揮生物學(xué)功能(沉默轉(zhuǎn)錄基因過程,維持生殖系和干細(xì)胞功能,調(diào)節(jié)翻譯和mRNA的穩(wěn)定性)。此外，piRNA在一些痘癥細(xì)胞中存在異常表達(dá)的現(xiàn)象,提示piRNA可能參與**的發(fā)生,并可作為**診斷和***中的潛在生物標(biāo)記物。PiRNA的沉默機(jī)制主要利用(1)通過轉(zhuǎn)錄自與轉(zhuǎn)座元件(TE)加工而成piRNA,并結(jié)合互補(bǔ)結(jié)合TE抑制其轉(zhuǎn)錄;(2)通過編碼蛋白基因區(qū)轉(zhuǎn)錄加工成piRNA,與AGO3,AUB蛋白形成復(fù)合體抑制靶基因:(3)由基因3'UTR轉(zhuǎn)錄生成piRNA，并結(jié)合與PIW1,抑制靶基因:(4)從piRNA簇生成piRNA,并與AUB等蛋白相互作用起到抑制靶基因的目的。(5)另外,piRNA也被報道有起到高甲基化調(diào)控的協(xié)同調(diào)控行為。piRNA的生成加工過程途徑(BiogenesisPathway)主要分為二大類:(a)轉(zhuǎn)錄自TE轉(zhuǎn)錄元件或piRNA簇的反義鏈經(jīng)過加工,加載到蛋白AUB或PIWI上形成功能piRNA。通常piRNA介導(dǎo)的piRISC復(fù)合體起到引發(fā)第二種生成加工途徑的激發(fā)作用。(b)通過AUB和AGO3蛋白的剪接體翠功能發(fā)生piRNA擴(kuò)增效應(yīng)。通過高通量smallRNA測序數(shù)據(jù)預(yù)測piRNA;
轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組研究是基因功能及結(jié)構(gòu)研究的基礎(chǔ)和出發(fā)點,通過新一代高通量測序,能夠***快速地獲得某一物種特定組織或***在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本序列信息,已曠泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。技術(shù)優(yōu)勢。任意物種的全轉(zhuǎn)錄組分析:無需預(yù)先設(shè)計特異性探針,因此無需了解物種基因或基因組信息,能夠直接對任何物種進(jìn)行*****的轉(zhuǎn)錄組分析。通過酶切富集啟動子及CpG島區(qū)域,并進(jìn)行Bisulfite測序,實現(xiàn)DNA甲基化狀態(tài)檢測的高分辨率。泌尿測序免費(fèi)設(shè)計
提高了測序覆蓋度和均一性,測序數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確、可靠。海南測序贈送提供技術(shù)路線
目前對circularRNA的研究還不多,特別是對這類RNA的生物學(xué)功能研究還有待挖掘。通過高通量測序技術(shù)尋找反向剪接的reads,即back-splicingreads?？梢詸z測樣本中circRNA表達(dá)及其發(fā)現(xiàn)樣本中新的circRNA。數(shù)據(jù)分析:1.基礎(chǔ)分析測序數(shù)據(jù)評估及預(yù)處理基因組比對circRNA預(yù)測circRNA注釋circRNA表達(dá)定量circRNA差異表達(dá)分析2.高級分析circRNA關(guān)聯(lián)基因的GO富集分析circRNA關(guān)聯(lián)基因的KEGG富集分析circRNA-miRNA靶向預(yù)測circRNA-miRNA-mRNAceRNA分析海南測序贈送提供技術(shù)路線
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗