YTHDF1水平的降低導致MGC-803移植**的**進展延遲(補充圖S2D和S2E)；與對照組相比，YTHDF1缺陷**的重量和體積***減少(圖2D)。因此，在YTHDF1缺陷**中，增殖標記物Ki-67下調(diào)，凋亡標記物cleavedcaspase-3上調(diào)(圖2E)。通過兩種轉(zhuǎn)移模型探討YTHDF1是否參與了胃*的體內(nèi)轉(zhuǎn)移。尾靜脈注射MGC-803-sicontrol細胞導致肺轉(zhuǎn)移，而注射MGC-803-siYTHDF1l細胞幾乎完全消除轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的形成。***建立了PDX模型，發(fā)現(xiàn)敲除YTHDF1抑制了**的生長和重量。上述結(jié)果表明YTHDF1在胃*發(fā)生中起重要作用。轉(zhuǎn)座酶染色質(zhì)可及性單核測序(snATAC-seq)也是一種單細胞表觀遺傳組測序技術?？臻g轉(zhuǎn)錄組學標書
PTEN功能的喪失通常與基因組的不穩(wěn)定性有關。此外，小鼠胚胎成纖維細胞(mef)中PTEN基因的缺失導致了未修復的DNA雙鏈斷裂的積累。PTEN缺失被認為通過至少兩種分子機制促進了基因組的完整性。在細胞核中，PTEN與著絲粒結(jié)合蛋白CENP-C結(jié)合，促進著絲粒組裝和中期到后期的轉(zhuǎn)變。此外，作為轉(zhuǎn)錄因子E2F1的輔助因子，核PTEN似乎調(diào)節(jié)Rad51的表達，Rad51是DNA修復機制的關鍵組成部分。然而，后續(xù)的研究得出了不一致的結(jié)果，表明PTEN在轉(zhuǎn)錄水平上對RAD51的調(diào)控可能***于特定的細胞環(huán)境。標書與未接受FMT***的受傷小鼠相比接受FMT***的小鼠表現(xiàn)出相對更大的運動恢復。
一、scRNA-Seq和scATAC-Seq的整合
共嵌入的UMAP圖顯示，scRNA-seq和scATAC-seq數(shù)據(jù)集中分析的大部分細胞相互重疊，這表明在大多數(shù)細胞簇中，染色質(zhì)可及性和相應的基因轉(zhuǎn)錄表達的變化是一致的(圖2A)。整合結(jié)果顯示，兩個數(shù)據(jù)集中所有巨噬細胞簇幾乎完全重疊，表明我們的研究中確定的所有巨噬細胞簇沒有明確區(qū)分。scATAC-seq和scRNA-seq數(shù)據(jù)的單個UMAP圖顯示了各自的小區(qū)集群標識(圖2B和2C)。然后使用每個細胞簇中**個上調(diào)的基因生成熱圖(圖2D)。如圖2E所示，暴露于慢性d-流中的ec表現(xiàn)出許多與致***途徑相關的已知生物學過程的誘導。
2、CDK4/6i介導的CD8+T細胞記憶獲得是細胞固有的
為了確定在CDK4/6i處理的**中觀察到的T細胞記憶是否由于CDK4/6在這些細胞內(nèi)的直接抑制，在體外將活化的小鼠CD8+T細胞暴露于CDK4/6i中，并監(jiān)測Tcm獲取和分裂數(shù)。***CDK4/6i暴露0、24、72h后，Tcm細胞平均分裂數(shù)減少，同時細胞比例增加，且呈劑量依賴性，*在24h內(nèi)發(fā)生(Fig.2A)。這表明CDK4/6i不是簡單地抑制分化，而是直接促進記憶形成，表明細胞周期機制與分化之間存在方向性關系。通過3'RNA-seq進一步分析發(fā)現(xiàn)，在CDK4/6i處理后，記憶相關轉(zhuǎn)錄本增加，GSEA分析證實了記憶相關特征的富集，以及細胞周期相關特征的減少，包括E2F靶點(Fig.2B-E)。矛盾的是，CDK4/6抑制也誘導了效應相關轉(zhuǎn)錄本，包括Gzma、Gzmc和Pdcd1(Fig.2B-C)，這與之前CDK4/6i促進T細胞活化的報道一致。 水蘇糖確實改善了PCOS大鼠卵巢功能障礙改善了卵巢組織病理損傷。
結(jié)果1）DRD2通過啟動子甲基化在轉(zhuǎn)錄上下調(diào)為了研究新的潛在TSGs，采用BrCa組織和正常組織進行RNA-seq篩選。與正常乳腺組織相比，BrCa組織中DRD2mRNA表達明顯下調(diào)(圖1A)。免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，與BrCa組織相比，正常乳腺組織中DRD2蛋白水平也較高(圖1B)。同樣，基于TCGA，在BrCa中也觀察到DRD2mRNA的下調(diào)，并且在BrCa中DRD2啟動子甲基化也更頻繁(圖1C)。根據(jù)Kmplot，DRD2的高表達促進了BrCa患者的更長的生存期，這也在HER2陽性基因型患者中可見。但這一優(yōu)勢在LuminalA患者中未見(圖1D)。根據(jù)RT-PCR和MSP結(jié)果，幾乎所有的BrCa細胞系與永凍的正常乳腺細胞系相比，都可以看到DRD2mRNA表達下調(diào)或缺失以及啟動子甲基化(圖1E)。因此，DRD2的高甲基化頻率可能有助于其下調(diào)BrCa。Aza藥物去甲基化恢復了兩種沉默的BrCa細胞系MDA-MB231和BT549中DRD2的表達(圖1F)。Tempol減輕PCOS大鼠腸道微生物失調(diào).北京標書中標率高
circNDUFB2通過增強泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性?？臻g轉(zhuǎn)錄組學標書
4）APP/PS1小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細胞中氧化應激誘導的脂質(zhì)過氧化水平升高
我們研究了NOX4來源的氧化應激在APP/PS1小鼠受損星形膠質(zhì)細胞中的作用。我們用免疫熒光染色法測定了APP/PS1小鼠和野生型(WT)小鼠大腦皮層GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中4-HNE的蛋白水平(圖4A)。免疫熒光染色顯示，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中4-HNE陽性染色強度增加(圖4A、C)。APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)受損的GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中4-HNE陽性染色強度升高。此外，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠中4-HNE和GFAP亞細胞共定位呈陽性的受損星形膠質(zhì)細胞數(shù)量***增加(圖4D)。與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞(圖4B和E)和MDA與GFAP亞細胞共定位陽性的受損星形膠質(zhì)細胞(圖4F)數(shù)量增加。4-HNE在APP/PS1小鼠NOX4陽性星形膠質(zhì)細胞***定位(圖4G)。此外，APP/PS1小鼠NOX4和4-HNE陽性星形膠質(zhì)細胞數(shù)量***增加(圖4H)。這些結(jié)果提示APP/PS1受損小鼠星形膠質(zhì)細胞中氧化應激誘導的脂質(zhì)過氧化水平升高。 空間轉(zhuǎn)錄組學標書
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1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗