RBM17促進PTC細胞的增殖和遷移，并在PTC**組織中升高
接下來探究RBM17在PTC細胞中的功能，RBM17的mRNA和蛋白表達在K1細胞系中遠低于TPC-1和BCPAP細胞，其表達趨勢類似于tiRNA-Gly（圖4A-B）。于是構建了RBM17過表達的K1細胞系，發(fā)現(xiàn)其增殖和遷移曾麗***增加（圖4C-F）。RBM17敲低則效果相反（圖4G-J）。此外，RBM蛋白表達在PTC**組織中***高于*旁組織（圖4K）。以上結果表明RBM17的作用和tiRNA-Gly相似，在PTC中促進**進展。
RBM17的衰減抑制了tiRNA-Gly對PTC細胞的影響，RBM17在PTC組織中的表達受tiRNA-Gly的調控
隨后，作者分別檢測了人PTC組織中tiRNA-Gly高表達和tiRNA-Gly低表達的組織樣本中RBM17的表達水平，結果發(fā)現(xiàn)與預期一致，tiRNA-Gly高表達組RBM17的表達也***高于tiRNA-Gly低表達組（圖5A）。進行了類似于拯救實驗，即過表達tiRNA-Gly組，敲除RBM17組，以及過表達tiRNA-Gly的同時敲除RBM17組，結果表明，tiRNA-Gly過表達+siRBM17同時處理可以部分消除單獨處理時引起的TPC-1和BCPAP細胞增殖和遷移的改變（圖5B-C）。體內實驗表明，tiRNA-Gly敲低導致RBM17的表達急劇性下降（圖5D）。總之，tiRNA-Gly對PTC增殖和遷移的作用依賴于RBM17。 單細胞核測序能夠獲得組織的細胞圖譜.江蘇實驗設計標書
1）USP35敲除抑制肺*細胞生長、集落形成和**進展
我們首先檢測了肺*組織和細胞系中USP35豐度的變化。如圖1A所示，USP35在肺ADC和SCC**中都***上調。與正常的BEAS2B和HBE肺上皮細胞系相比，USP35mRNA水平在肺*細胞系(A549、H358、H460、H1299和H1650)中也高度表達(圖1B)。鑒于H460和H1299細胞中USP35mRNA的豐度較高，我們在下一項研究中使用了這兩種細胞系。與mRNA水平一致，在H460和H1299細胞中USP35蛋白也增加了(圖1C)。為了闡明USP35在肺*發(fā)病機制中的作用，我們在H460和H1299細胞中沉默了USP35(圖1D)。有趣的是，USP35敲除抑制了H460和H1299細胞在體外的生長能力和集落形成(圖1E、F)。來自**異種移植實驗的數(shù)據進一步表明，USP35沉默抑制了25天生長后的**體積和重量(圖1G，H)?？傊?，USP35在調節(jié)肺*細胞生長和**進展中起著關鍵作用。 褪黑素標書廣州FMT處理可以調節(jié)SCI小鼠的微生物群組成以改善腸道微生物失調。
五、gata1調控靶基因的染色質可及性及表達動態(tài)
METTL3增強APCmRNA的m6A和隨后的YTHDF結合抑制APC表達YTHDF1-3介導mRNA降解，針對YTHDF1的抗體進行RIP分析，實時定量PCR分析顯示，在KYSE180中，與APCmRNA結合的YTHDF2的數(shù)量遠遠多于YTHDF1和YTHDF3的數(shù)量，并且由于METTL3缺失而減少。這些結果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，在很大程度上促進了YTHDF2與APCmRNA的結合。為了研究YTHDF2與APCmRNA結合在APC表達中的作用，我們去除了YTHDF2，這增加了KYSE450細胞中APC的mRNA（圖5d和補充圖5e）和蛋白質表達。YTHDF1–3的聯(lián)合缺失進一步增加了這些細胞中APC的mRNA和蛋白質表達。此外，還進行了熒光素酶報告子分析，結果表明，缺失YTHDF2增強了由含m6A的WTAPCCDS序列驅動的熒光素酶活性，而突變的APC增強了熒光素酶活性，并使該活性抵抗了YTHDF2缺失的調節(jié)。此外，METTL3過表達抑制由WTAPCCDS序列驅動的熒光素酶活性通過YTHDF2耗竭恢復，其不影響突變的APC增強的熒光素酶活性。這些結果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，隨后的YTHDF結合抑制了APC的表達。間接量熱法測定平均呼吸交換商（RQ值）在SCI + FMT組恢復正常。
PGE2 增強 IL4Rα 信號以增強巨噬細胞的 M2 ***
巨噬細胞能夠響應可變的局部微環(huán)境信號從一種功能表型切換到另一種功能表型。除了經典的信號級聯(lián)（例如，IL4/IL4Rα），巨噬細胞還可以整合由細胞外刺激觸發(fā)的代謝線索，以***它們的 M2表型。在這里，我們想知道 PGE2 是否也參與了 AP 損傷后胰腺巨噬細胞的 M2 極化。為此，我們首先檢查了 AP 損傷后 PGE2 的動態(tài)表達。COX1 和 COX2 是產生前列腺素的兩種關鍵酶。在這里我們發(fā)現(xiàn)Ptgs2 (COX2)的表達在第 3 天達到峰值，而Ptgs1 (COX1)的表達在第 1 天下降并在第 3 天回到基礎水平。一致地，免疫熒光分析顯示 PGE2 在第 3 天升高，并在第 5 天迅速恢復到基礎水平。值得注意的是，PGE2在第 3 天主要與導管樣細胞（CK19 +細胞）共表達，以及部分與巨噬細胞（F4/80 +細胞）共表達。此外，根據我們的 RNA-seq 數(shù)據和流式細胞術分析，我們發(fā)現(xiàn)巨噬細胞中 COX2 的表達也在第 3 天達到峰值。更有趣的是，與 IL4Rα -巨噬細胞和單核細胞相比，IL4Rα +巨噬細胞表達了更高水平的 COX2。 FMT處理加速SCI小鼠的胃腸道消化。神經元損傷標書廣東
PCOS大鼠大部分血清代謝物的豐度與對照組大鼠完全不同.江蘇實驗設計標書
質膜塑造并保護真核細胞免受周圍環(huán)境的影響，對細胞生命至關重要。盡管重新密封受損膜的初始修復機制已經很好地建立，但關于細胞如何在重建受損膜后恢復體內平衡知之甚少。今年7月發(fā)表于《SCIENCE ADVANCES》的一篇研究表明，細胞通過***與巨胞飲作用相關的蛋白質來響應質膜損傷，特別是在受損的膜上。在膜重新密封之后，細胞形成源自修復部位的、LC3B蛋白陽性的胞吞小體。此過程**于 ULK1、ATG13 和 WIPI2，但依賴于 ATG7、p62 和 Rubicon。內化的胞吞小體在細胞質中收縮，可能是通過滲透排出，并**終與溶酶體融合。這是一種與非經典自噬相結合的巨胞飲作用，研究者將其稱為 LC3 相關巨胞飲作用 (LAM)，其功能是從質膜上去除受損物質并在損傷時恢復膜的完整性。接下來我們來看一下具體研究方法及結果：江蘇實驗設計標書
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗