結(jié)果1）circPDE4B在OA組織中表達較低
我們之前對3個臨床OA和3個對照樣本的軟骨細胞核糖體RNA缺失的總RNA進行了RNA-seq分析。在數(shù)量**多的50個***調(diào)控異常的circRNA中，circPDE4B的表達水平排名***。我們評估了每個病例的OA嚴重程度(圖1A)。同時，我們進行了組織形態(tài)學和熒光原位雜交實驗，結(jié)果顯示軟骨降解程度增加對應(yīng)軟骨細胞中circPDE4B的表達降低(圖1B)。RT-qPCR檢測到嚴重OA組織軟骨細胞中circPDE4BRNA水平下調(diào)，而mPDE4BmRNA水平保持相對一致(圖1C)。綜上所述，circPDE4B的表達與OA的嚴重程度呈負相關(guān)?？紤]到circPDE4B在人和小鼠之間是保守的，我們也檢測了circPDE4B在人/小鼠軟骨細胞中的表達，發(fā)現(xiàn)IL-1β和TNF-α處理***降低了HCs（人）/MCs（鼠）中circPDE4的表達，且呈時間依賴性(圖1D)。核分離實驗結(jié)合RT-qPCR分析和FISH分析發(fā)現(xiàn)，circPDE4B/circPde4b主要位于HCs/MCs的細胞質(zhì)中(圖1E、F)。綜上所述，circPDE4B在OA中被下調(diào)，因此可能參與了OA的進展。 E2F1是一種有效的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子.大連Caspase-11標書
二、RIT1與MAD2和p31conmet的相互作用由CDK1磷酸化調(diào)控
在間期，RIT1 s c端尾部介導質(zhì)膜(PM)結(jié)合然而，在分析有絲分裂細胞時，我們觀察到RIT1在細胞進入有絲分裂和進入中期并在后期快速易位到PM時的彌漫性胞質(zhì)分布(圖2A和2B)。同樣，在有絲分裂細胞裂解物中檢測到內(nèi)源性RIT1的主要胞質(zhì)分布(圖2C)。(S209D/E)磷酸化，而非(S209A)缺磷，突變破壞了RIT1-MAD2/p31conmet結(jié)合(圖2D)。RIT1磷酸化在有絲分裂過程中**為豐富(圖2E)。抑制CDK1***降低了重組RIT1的磷酸化(圖2F)。免疫印跡檢測和質(zhì)譜證實CDK1/CyclinB1磷酸化RIT1 S209，(圖2G和2H)。 廣州SNP檢測標書miR-127-3p是一種*****因子可下調(diào)CDKN3/E2F1軸的活性。
3）RIC8A與circPDE4B相互作用，參與OA
為了鑒別與circPDE4B相互作用的蛋白，我們采用RPD-MS(圖3A)，共鑒定出112個與circPDE4B相互作用的蛋白(圖3B)，確定RIC8A。HCs中的RNA-蛋白共定位證實了RIC8A和circPDE4B之間的相互作用(圖3C)。RPD實驗表明，體外線性轉(zhuǎn)錄的circPDE4B能拉下重組RIC8A(圖3D)。然后，我們使用catRAPID工具預測circPDE4B和RIC8A的相互作用區(qū)域(圖3E)。為了識別預測的結(jié)合位點，我們將FLcircPDE4B截短為3個片段。據(jù)預測，RIP結(jié)果顯示有FL和S3被RIC8A拉下(圖3F)。有綜合來看，這些結(jié)果表明circPDE4B在HCs中與RIC8A相互作用。我們進一步的研究表明，circPDE4B調(diào)控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩(wěn)定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對照(NC)和sh-circPDE4B的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩(wěn)定性。經(jīng)PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過表達和下調(diào)細胞中均未發(fā)生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過蛋白酶體活性調(diào)節(jié)RIC8A。無論內(nèi)源性還是外源性RIC8A,RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過表達circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導的RIC8A的降解和周轉(zhuǎn)。
circACTN4促進BC細胞增殖并調(diào)節(jié)細胞凋亡
為了探索 circACTN4 在 BC 細胞中的生物學功能，將circACTN4過表達質(zhì)粒和circACTN4的siRNA轉(zhuǎn)染到BC細胞中。qRT-PCR驗證敲低過表達效率及不影響ACTN4線性轉(zhuǎn)錄本的表達水平。集落形成、EdU和CCK-8檢測表明 circACTN4的過表達顯著增強了BC細胞的增殖能力，而circACTN4的敲低顯著抑制了細胞活力。hoechst 33342染色顯示，轉(zhuǎn)染si-circACTN4后，BC細胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)特征，包括熒光更強、核片段、染色質(zhì)聚集和凋亡小體。使用AnnexinV/PI染色通過流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率，結(jié)果表明circACTN4敲低可以誘導BC的細胞凋亡。WB結(jié)果顯示，circACTN4 的下調(diào)導致更高水平的caspase-3和Bax以及更低的Bcl-2表達。 水蘇糖確實改善了PCOS大鼠卵巢功能障礙改善了卵巢組織病理損傷。
2.PC細胞衍生的外泌體中l(wèi)inc-ROR表達的增加可以轉(zhuǎn)移到脂肪細胞中，在共培養(yǎng)系統(tǒng)中誘導去分化作者接下來使用體外間接共培養(yǎng)模型研究了外泌體linc-ROR在誘導脂肪細胞去分化中的作用。為了探究外泌體linc-ROR在脂肪細胞脫分化中的作用機制，作者繼續(xù)誘導3T3-L1脂肪細胞5天，使其成為具有獨特脂滴的成熟脂肪細胞。脂滴經(jīng)紅油染色呈規(guī)則的圓形。當從PC細胞中分離出來的外泌體(綠色熒光染料，pkh67標記)與脂肪細胞共培養(yǎng)時，激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)顯示，受體細胞(藍色熒光染料，DAPI標記)隨著時間的增加表達更高的攝取潛能。這證實了吸收能力是依賴于時間的。GO和KEGG分析顯示circNDUFB2觸發(fā)免疫防御和I型干擾素(IFNs)信號。HE染色標書省自然科學基金
腸道微生物發(fā)酵的某些**終產(chǎn)物可進入血液影響宿主***系統(tǒng)的生理功能。大連Caspase-11標書
3）CircMAPK1在體內(nèi)抑制胃*的發(fā)生和轉(zhuǎn)移
為了進一步證實體外研究結(jié)果，我們在體內(nèi)驗證了circMAPK1在影響致瘤性方面的生物學作用。circMAPK1的沉默可***促進**的生長。相比之下，過表達circMAPK1***抑制了皮下**的生長(圖3a)。接下來，我們通過對增殖細胞標記物Ki67的染色來監(jiān)測異種移植瘤的增殖。穩(wěn)定敲除circMAPK1的**組織表現(xiàn)出更強的Ki67染色，而過表達circMAPK1的**組織表現(xiàn)出更弱的Ki67染色(圖3b和c)。為了研究circMAPK1在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移潛能，我們用熒光素酶質(zhì)粒穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染上述細胞系，然后注射到裸鼠的尾靜脈中。結(jié)果顯示，circMAPK1的敲低有效地增加了肺轉(zhuǎn)移病灶的數(shù)量和大小。相比之下，生物發(fā)光成像(圖3d和e)和H&E染色(圖3f和g)顯示，過表達circMAPK1減少了肺轉(zhuǎn)移病變。 大連Caspase-11標書
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