六、INPP4B通過增強(qiáng)GSK3β的溶酶體降解促進(jìn)pi3k依賴的Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
通過nanoStringRNA譜分析，我們檢測(cè)了GFP-INPP4B和gfp載體表達(dá)MCF-7細(xì)胞中已知的**通路，結(jié)果顯示幾種Wnt/β-catenin通路基因的表達(dá)發(fā)生了改變(圖6a)。定量RTPCR證實(shí)GFP-INPP4B-MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin靶基因AXIN2(1.8倍)、LEF1(5.6倍)、DKK1(3.3倍)和MYCN(2倍)的mRNA表達(dá)增加，表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路增加(圖6b)。它結(jié)合TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)Wnt靶基因的轉(zhuǎn)錄。Wnt/β-catenin信號(hào)通路被Wnt3a和R-spondin處理***，在這些條件下，與gfp載體對(duì)照相比，GFP-INPP4B細(xì)胞表現(xiàn)出AXIN2mRNA表達(dá)和非磷酸化-β-catenins33/S37/T41(活性-β-catenin)水平增加(圖6c,d)。 細(xì)菌可能是導(dǎo)致小鼠腸道尿酸降低的主要原因。深圳腸道失調(diào)科研
2IFNγ也會(huì)促進(jìn)PD-L1-Lnc的表達(dá)已有研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞分泌的IFN-γ（干擾素-γ）能上調(diào)PD-L1mRNA和蛋白的表達(dá)，那么**細(xì)胞是否能連接T細(xì)胞表面的PD-1進(jìn)而抑制細(xì)胞免疫有待進(jìn)一步驗(yàn)證。與PD-L1-mRNA相比，PD-L1-Lnc在638-744和832-899處存在缺失，進(jìn)一步假設(shè)IFNγ會(huì)增強(qiáng)PD-L1-Lnc的轉(zhuǎn)錄。為進(jìn)一步驗(yàn)證，在沒有IFN-γ的前提下對(duì)五個(gè)細(xì)胞系中的PD-L1蛋白含量、PD-L1mRNA，以及PD-L1-Lnc水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IFNγ確實(shí)能極大地促進(jìn)PD-L1蛋白的表達(dá)。5個(gè)肝*細(xì)胞系中進(jìn)行IFNγ***也明顯提高了PD-L1mRNA的表達(dá)水平，為了進(jìn)一步研究PD-L1-Lnc在肺*細(xì)胞中的分布，從A549細(xì)胞系中分離純化了PD-L1-Lnc，分離的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)部分都表現(xiàn)出高水平的標(biāo)記蛋白，組蛋白H3和***DH證實(shí)了分離產(chǎn)物中細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)富集的富集情況，RT-PCR結(jié)果顯示IFNγ處理上調(diào)細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中PD-L1-Lnc和PD-L1mRNA的表達(dá)。血漿科研國(guó)家自然科學(xué)基金N6甲基腺苷（m6A）是一種常見的真核細(xì)胞mRNA修飾。
固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白(SREBPs)是***高脂血癥特征性膽固醇、脂肪酸和甘油三酯生物合成的主要轉(zhuǎn)錄因子。本研究中發(fā)現(xiàn)了一種小分子，白樺素，它通過誘導(dǎo)SREBP裂解***蛋白(SCAP) 與Insig相互作用特異性地抑制SREBP的成熟，進(jìn)而降低膽固醇和脂肪酸的生物合成，改善飲食誘導(dǎo)的肥胖，降低血清和組織中的脂質(zhì)含量，提高胰島素敏感性，減小***斑塊的大小。樺樹皮中含有豐富的白樺素，有望成為開發(fā)***高脂血癥藥物的先導(dǎo)化合物。本研究于2021年1月發(fā)表在《Cell Metabolism》IF:21.567期刊上。
CircRNF13直接結(jié)合SUMO2mRNA的3’UTR穩(wěn)定SUMO2
為了探究circRNF13調(diào)節(jié)GLUT1泛素化的機(jī)制，作者進(jìn)行了LC-MS/MS，其中SUMO2引起了作者的注意。SUMO2類泛素化修飾（SUMOylation）是泛素化樣蛋白修飾成員可以調(diào)節(jié)蛋白降解通過泛素化途徑。并且研究表明SUMO2在NOC中是抑制糖酵解的。于是探究circRNF13與SUMO2的結(jié)合關(guān)系。與預(yù)期一致，過表達(dá)circRNF13會(huì)在mRNA和蛋白水平誘導(dǎo)SUMO2的表達(dá)上調(diào)，干擾circRNF13則效果相反。生信分析揭示circRNF13和SUMO2的非編碼區(qū)存在結(jié)合位點(diǎn)。RNApull-down顯示生物素標(biāo)記的circRNF13可以下拉SUMO2的mRNA在NPC細(xì)胞中。上熒光素酶實(shí)驗(yàn)表明過表達(dá)circRNF13會(huì)提高SUMO2的熒光素酶活性。以上數(shù)據(jù)表明circRNF13通過與SUMO2結(jié)合調(diào)節(jié)其表達(dá)。 增加乳酸桿菌水平導(dǎo)致尿酸水平下降。
AP損傷后胰腺巨噬細(xì)胞的表型變化
A動(dòng)物模型使用雨蛙素誘導(dǎo)，。為了研究AP后的修復(fù)/再生過程，用更高劑量的雨蛙素（100μg/kg，每小時(shí)10次）誘導(dǎo)AP，并在一周內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)收集胰腺。接受雨蛙素誘導(dǎo)***的AP小鼠在24小時(shí)后顯示出腺泡壞死和白細(xì)胞浸潤(rùn)的組織學(xué)跡象以及血清淀粉酶升高。第3天出現(xiàn)典型的腺泡-導(dǎo)管化生(ADM)結(jié)構(gòu)，第7天左右迅速恢復(fù)正常腺泡。
為了檢測(cè)免疫細(xì)胞的比例，分離并分析了AP誘導(dǎo)后的胰腺白細(xì)胞。發(fā)炎的胰腺內(nèi)**豐富的免疫細(xì)胞是巨噬細(xì)胞（CD11b+F4/80+CD11c-）。流式細(xì)胞術(shù)分析的胰腺巨噬細(xì)胞數(shù)量在第1天和第3天顯著增加。根據(jù)F4/80水平，胰腺巨噬細(xì)胞從第1天到第3天逐漸成熟。巨噬細(xì)胞在組織中的積累以兩種方式發(fā)生：?jiǎn)魏思?xì)胞的募集和駐留巨噬細(xì)胞的增殖。AP急性炎癥期的大多數(shù)巨噬細(xì)胞來自單核細(xì)胞的浸潤(rùn)。根據(jù)我們的研究結(jié)果，與第1天相比，第3天的胰腺巨噬細(xì)胞具有更高的增殖能力。 上海英拜生物提供可視化實(shí)驗(yàn)過程參觀。壞死科研
結(jié)腸炎也會(huì)導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子或趨化因子的增加。深圳腸道失調(diào)科研
4）circPDE4B促進(jìn)了RIC8A和MID1之間的三元配合物的形成，促進(jìn)了RIC8A的降解
我們?cè)噲D鑒定參與RIC8A蛋白酶體降解的E3連接酶。有趣的是，MS結(jié)果顯示circPDE4B也結(jié)合了兩個(gè)E3連接酶，包括RNF2和MID1。然而，由于RNF2定位于細(xì)胞核內(nèi)，我們選擇MID1進(jìn)行進(jìn)一步研究。實(shí)際上，通過免疫沉淀分析，MID1被發(fā)現(xiàn)與RIC8A結(jié)合(圖4A)。RIC8A和MID1的免疫熒光染色也證實(shí)了它們?cè)贖Cs***定位(圖4B)。IP結(jié)果表明，MID1敲低有效地削弱了RIC8A和MID1過表達(dá)的泛素化作用，增加了RIC8A泛素化作用(圖4C)。Co-IP實(shí)驗(yàn)也顯示，與對(duì)照組相比，circPDE4B敲低細(xì)胞中RIC8A和MID1的結(jié)合減少，而過表達(dá)circPDE4B則有相反的作用(圖4D)。 深圳腸道失調(diào)科研
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)