輸尿管梗阻引起的腎積水與腎纖維化和進(jìn)行性慢性腎病(CKD)有關(guān)。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞通訊被認(rèn)為與各種疾病有關(guān)，包括腎纖維化。然而，對于外泌體如何調(diào)節(jié)梗阻腎臟的腎纖維化知之甚少。2021年8月發(fā)表于Theranostics（IF=11.556）的文章“Exosomal miR-21 from tubular cells contributes to renal fibrosis by activating fibroblasts via targeting PTEN in obstructed kidneys“對此進(jìn)行了介紹。研究發(fā)現(xiàn)腎纖維化的增加與單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)的延長天數(shù)有關(guān)，外泌體分泌在UUO腎和TGF-β1刺激的NRK-52E細(xì)胞中***增加。從TGF-β1刺激的NRK-52E細(xì)胞中純化的外泌體可***成纖維細(xì)胞并加重腎纖維化。此外，Rab27a敲除或GW4869處理抑制外泌體分泌可消除成纖維細(xì)胞***，改善腎纖維化。TGFβ1-Exos中外泌體miR-21較Ctrl-Exos明顯升高，且PTEN是miR-21的靶點。在體外，上皮外泌體miR-21的促進(jìn)或抑制相應(yīng)地加速或消除成纖維細(xì)胞的***，而在體內(nèi)，miR-21缺陷的外泌體通過PTEN/Akt途徑緩解UUO后腎纖維化。我們的研究結(jié)果表明，來自腎小管上皮細(xì)胞的外泌體miR-21可能通過miR-21/PTEN/Akt通路***成纖維細(xì)胞，從而加速腎纖維化的發(fā)展。思路是您的操作我們來做。北京細(xì)胞發(fā)育與分化科研
基序分析發(fā)現(xiàn)E2F TF基序在乙?；档拖嚓P(guān)區(qū)域***富集，在T細(xì)胞記憶驅(qū)動因子相關(guān)基序乙?；黾樱ê骖^框因子(Fig. 2F)。為了確定這些變化是否伴隨著對不同細(xì)胞狀態(tài)的長期表觀遺傳影響，在CDK4/6抑制后對體外活化的T細(xì)胞進(jìn)行了ATAC-seq，觀察到染色質(zhì)開放性的整體降低，T細(xì)胞記憶相關(guān)基因區(qū)域的開放性增加，包括Tcf7、Ccr7和Sell (Fig. 2G)。為了解開CDK4/6抑制后記憶和效應(yīng)特征的明顯二分法，在暴露于CDK4/6i 24h后，對體外活化T細(xì)胞進(jìn)行了單細(xì)胞RNA-seq。該分析顯示存在CDK4/6i處理后改變的不同T細(xì)胞亞群，簇2、4、5和8增加，簇0減少，以及整體G1細(xì)胞周期停滯(Fig. 2H-I)。接下來對記憶和效應(yīng)基因標(biāo)記，并使用AUCell比較富集評分，確定細(xì)胞池中不同的記憶樣和效應(yīng)樣簇(Fig. 2J)。有趣的是，CDK4/6i處理后增加的細(xì)胞簇2和5是記憶樣細(xì)胞，8是效應(yīng)樣細(xì)胞，證明CDK4/6i抑制促進(jìn)異質(zhì)T細(xì)胞池中表型不同的亞群細(xì)胞的記憶分化，增***應(yīng)功能。丁酸科研總體生存率低與m6A水平增高***相關(guān)。
再生胰腺中胰腺巨噬細(xì)胞的動態(tài)轉(zhuǎn)錄組譜
為了進(jìn)一步了解AP恢復(fù)過程中巨噬細(xì)胞的表型和功能，分離出胰腺巨噬細(xì)胞用于RNA-seq分析。顯著性差異表達(dá)基因繪制熱圖。為了評估這些基因簇的功能，使用網(wǎng)絡(luò)工具DAVIDGeneOntology(GO)進(jìn)行了功能注釋分析。值得注意的是，在急性炎癥期（簇32，D1特征簇）高度表達(dá)的基因特別富集炎癥反應(yīng)和CCR2依賴性趨化性。簇25和27包含在ADM階段（第3天）高表達(dá)的基因，具有不同的表達(dá)模式和功能，表明該階段的巨噬細(xì)胞異質(zhì)性。例如，與ECM-受體相互作用和PI3K-AKT信號通路相關(guān)的基因在簇27中富集，而與細(xì)胞周期相關(guān)的基因在簇25中富集。
3）M1-BMDMs來源的外泌體上調(diào)ROS水平，損害bEnd.3細(xì)胞的線粒體功能
已有研究表明，ROS與BSCB中斷有關(guān)，調(diào)節(jié)ROS水平在促進(jìn)***系統(tǒng)損傷后功能恢復(fù)中起著至關(guān)重要的作用?；谥暗慕Y(jié)果，我們研究了M1-BMDMs和ROS在bEnd.3細(xì)胞中的關(guān)系。流式細(xì)胞術(shù)分析表明，M1-CM處理可***提高bEnd.3細(xì)胞中ROS水平。GW4869可以部分逆轉(zhuǎn)這種增加(圖3A和B)。此外，與M1-CM孵育后，線粒體超氧化物水平***升高，GW4869部分消除線粒體超氧化物水平(圖3C和D)。如圖JC-1染色所示，加入M1-CM后線粒體電位***降低，GW4869部分恢復(fù)線粒體電位(圖3E和F)。M1-CM處理使線粒體長度縮短、腫脹，線粒體破碎的細(xì)胞比例明顯增加。然而，GW4869可以部分逆轉(zhuǎn)線粒體形態(tài)變化(圖3G和H)。此外，M1-CM暴露***降低了氧化磷酸化的生物標(biāo)志物OCR(圖3I)?；A(chǔ)呼吸，ATP產(chǎn)生，呼吸能力，呼吸逆轉(zhuǎn)在添加M1-CM后***減少，而GW4869部分緩解了這一影響(圖3J)。 結(jié)腸炎也會導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子或趨化因子的增加。
如圖5所示，E8中的d-flow改變了白細(xì)胞流量和炎癥標(biāo)志物(Il1β、Il6、Ccl2和Ccl3);ECM調(diào)節(jié)(Adamts4, Lamb1, Timp3，和Timp4);血管調(diào)節(jié)(Nos3, Ptgs2，和Edn1);和脂質(zhì)代謝(Tm6sf2、Lsr和Mgll)，并與E2的s-flow進(jìn)行比較(圖5A-5D)。這些結(jié)果表明，d-flow***了致***的內(nèi)皮反應(yīng)，同時通過改變轉(zhuǎn)錄和染色質(zhì)可及性水平上的基因表達(dá)來抑制抗***通路。
三、體內(nèi)血流依賴TF結(jié)合基序的鑒定
使用Signac和ChromVar軟件包通過我們的scATAC-seq數(shù)據(jù)集來識別流敏感的TF結(jié)合基序(圖6)。在每個內(nèi)皮聚類(E1- E8)中識別出前20個TF結(jié)合基序，并繪制成熱圖(圖6A)。圖6B和6C顯示了TF結(jié)合基序和它們被發(fā)現(xiàn)的各自的細(xì)胞簇。 METTL14是其***的潛在靶點。動力學(xué)科研
神經(jīng)元中FTH的敲除抵消了褪黑素對創(chuàng)傷性腦損傷鐵死亡的保護(hù)作用。北京細(xì)胞發(fā)育與分化科研
3.Tempol可改善PCOS大鼠全身和腸道的氧化應(yīng)激
DHEA+PBS組大鼠血清MDA水平明顯高于油+PBS組，血清T-AOC水平明顯低于oil+PBS組。給藥Tempol可***降低PCOS大鼠血清MDA水平，提高血清T-AOC水平(圖3A-B)。研究發(fā)現(xiàn)，DHEA聯(lián)合或不聯(lián)合tempol對血清3’-NT和AGEs水平均無影響(圖3C-D)。作者測定卵巢中氧化應(yīng)激生物標(biāo)志物的水平，PCOS大鼠卵巢MDA、3-NT、AGEs水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖3E-G)，PCOS大鼠卵巢T-AOC水平未見明顯下降(圖3H)；然而，這些大鼠的SOD活性降低(圖3I)。WB分析顯示，PCOS大鼠卵巢中SOD1表達(dá)下降，而SOD2表達(dá)未發(fā)生變化(圖3J)。Tempol對PCOS大鼠這些氧化應(yīng)激標(biāo)志物的水平?jīng)]有明顯影響，甚至進(jìn)一步降低了卵巢SOD活性(圖3E-I)，這表明Tempol對卵巢氧化應(yīng)激沒有直接影響。 北京細(xì)胞發(fā)育與分化科研
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