m6A RNA甲基化是mRNA轉(zhuǎn)錄后**常見(jiàn)的內(nèi)部甲基化。這是一個(gè)由m6A WER系統(tǒng)控制的可逆過(guò)程，由書(shū)寫(xiě)器(W)、擦除器(E)和閱讀器(R)組成，而m6A甲基化的**終結(jié)果取決于特異性閱讀器的識(shí)別并結(jié)合。目前研究發(fā)現(xiàn)抑制肺腺*(LUAD)與m6A閱讀器YTHDC2相關(guān)。該研究2021年1月發(fā)表在《Redox biology》，IF：11.799的期刊上。
1.YTHDC2表達(dá)在LUAD中被抑制，且與臨床預(yù)后差相關(guān)
為了驗(yàn)證m6A閱讀器在肺*的表達(dá)，作者通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析了LUAD中已知的閱讀器，包括YTHDF1/2/3、YTHDC1/2、HNRNPA2B1、HNRNPC/G、eIF3A、FMR1和IGF2BP1/2。如圖1A和B顯示，與正常肺相比，LUAD中YTHDC2、IGF2BP2表達(dá)下調(diào)，而結(jié)合Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)和Kaplan-Meier圖譜進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)較低的YTHDC2與LUAD患者較差的總生存率相關(guān)(圖1D)，這證實(shí)了YTHDC2與LUAD存在負(fù)相關(guān)的關(guān)系。 英拜生物提供生物科學(xué)內(nèi)的專(zhuān)業(yè)的技術(shù)咨詢(xún)，技術(shù)合作。趨化因子科研整體服務(wù)
3）USP35過(guò)表達(dá)阻斷erastin/RSL3介導(dǎo)的**抑制作用
細(xì)胞也用慢病毒載體***以在體外過(guò)表達(dá)USP35，并通過(guò)PCR驗(yàn)證其效率(圖3A)。然而，在基礎(chǔ)條件下，USP35過(guò)表達(dá)不影響H460和H1299細(xì)胞的細(xì)胞死亡和集落形成(圖3B，C)。裸鼠的**體積和重量也不受USP35過(guò)表達(dá)的影響(圖3D，E)。我們進(jìn)一步研究了USP35操作是否對(duì)鐵刺激引起的細(xì)胞死亡有影響。不出所料，erastin或RSL3處理***降低了H460和H1299細(xì)胞的細(xì)胞活力或集落形成，而這是通過(guò)USP35過(guò)表達(dá)來(lái)阻止的(圖3F，G)。相應(yīng)地，接種CTRL肺*細(xì)胞的裸鼠在erastin或RSL3***后**體積和重量減少；然而，這些**抑制作用被USP35過(guò)表達(dá)阻斷(圖3H，I)?？偟膩?lái)說(shuō)，USP35過(guò)表達(dá)阻斷了erastin/RSL33介導(dǎo)的**抑制作用。 染色科研大黃酸導(dǎo)致嘌呤代謝正?；湍c道尿酸水平的降低。
5）NOX4的升高通過(guò)抑制人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞線(xiàn)粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生來(lái)促進(jìn)線(xiàn)粒體代謝的損傷，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激
我們研究了AD期間NOX4升高誘導(dǎo)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的潛在分子機(jī)制。與對(duì)照組相比，NOX4過(guò)表達(dá)***抑制了OCR的基礎(chǔ)水平，且***降低了寡霉素和FCCP作用下的OCR水平(圖5A和B)。接下來(lái)，我們研究了NOX4上調(diào)對(duì)人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞線(xiàn)粒體呼吸途徑調(diào)控的分子靶點(diǎn)。我們分析了包括NADH在內(nèi)的5種線(xiàn)粒體ETC蛋白復(fù)合物的水平(圖5C)。與OCR水平一致，與對(duì)照組相比，NOX4過(guò)表達(dá)***抑制了5種線(xiàn)粒體氧化磷酸化酶復(fù)合物的蛋白水平并***減少ATP的產(chǎn)生(圖5D)。免疫熒光染色顯示，與對(duì)照組相比，NOX4的升高導(dǎo)致線(xiàn)粒體碎裂，并***增加了線(xiàn)粒體碎裂的細(xì)胞數(shù)量(圖5G)。這些結(jié)果表明，NOX4的升高通過(guò)抑制人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞線(xiàn)粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生，從而損害線(xiàn)粒體代謝，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激。
H460和H1299細(xì)胞是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)野生型細(xì)胞，我們進(jìn)一步確定了在EGFR突變的H1650細(xì)胞中，USP35對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、鐵死亡誘導(dǎo)和**生長(zhǎng)的作用。如圖5A-C所示，USP35沉默***減少了H1650細(xì)胞生長(zhǎng)、集落形成和**進(jìn)展。因此，在USP 35缺陷型H1650細(xì)胞中，ROS生成、MDA生成、細(xì)胞內(nèi)LIP和Fe2+增加，而GSH水平和GPX4活性降低(圖5D-F)。相反，USP35過(guò)表達(dá)***阻止了erastin/RSL3誘導(dǎo)的體內(nèi)外對(duì)H1650細(xì)胞生長(zhǎng)、集落形成和**進(jìn)展的抑制(圖5G-J)。在H1650細(xì)胞中過(guò)表達(dá)USP35也降低了ROS生成、MDA產(chǎn)生和鐵負(fù)荷的增加(圖5K-M)?？偟膩?lái)說(shuō)，USP35過(guò)表達(dá)減少了erastin/RSL3觸發(fā)的鐵紊亂和鐵死亡。血清或尿液中尿酸濃度的升高與痛風(fēng)腎臟和血管疾病密切相關(guān)。
環(huán)狀RNA（circRNA）是動(dòng)植物中一類(lèi)豐富且保守的RNA。**近的研究表明，circRNA可以通過(guò)充當(dāng)非編碼RNA或編碼RNA發(fā)揮多種生物學(xué)作用。體外合成的circRNA可以不依賴(lài)于帽的方式進(jìn)行翻譯。但鑒定circRNA編碼的蛋白質(zhì)是困難的，主要是因?yàn)閏ircRNA序列及其宿主基因的同源線(xiàn)性mRNA具有較大的重疊。近期NucleicAcidsResearch雜志在線(xiàn)發(fā)表了題名為：TransCirc:aninteractivedatabasefortranslatablecircularRNAsbasedonmulti-omicsevidence的文章，該文章主要講述了circRNA翻譯預(yù)測(cè)和分析的數(shù)據(jù)庫(kù)——TransCirc。METTL14上調(diào)促進(jìn)胰腺*生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。配體科研實(shí)驗(yàn)可參觀
降低腸上皮細(xì)胞尿酸的產(chǎn)生。趨化因子科研整體服務(wù)
三、在體內(nèi)，tbi介導(dǎo)的NCT缺陷和致死率被核輸出抑制劑抑制
為了確定TBI是否會(huì)損害體內(nèi)的核質(zhì)運(yùn)輸，我們?cè)诠夁\(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)了一個(gè)帶有核定位序列(NLS)和核輸出序列(NES)標(biāo)記的GFP蛋白(OK371-gal4)。在表達(dá)nlsnes -GFP的大腦中，GFP信號(hào)分布在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中(圖3A)。然而，定量分析顯示，在nls - nes -GFP表達(dá)的vnc暴露于TBI中，核GFP信號(hào)減少的細(xì)胞百分比***增加，而核GFP強(qiáng)度***降低(圖3B和C)，說(shuō)明GFP核進(jìn)口受到抑制和/或GFP核出口增加。接下來(lái)，我們?cè)谶\(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中表達(dá)了一種用NLS和突變的NES (ΔNES)標(biāo)記的沒(méi)有核輸出活性的GFP蛋白。表達(dá)NLS的非創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物的腦細(xì)胞-ΔNES-GFP顯示了GFP在細(xì)胞核的強(qiáng)大定位(圖3A)，而創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物的vnc顯示了核GFP減少的細(xì)胞數(shù)量***增加，核GFP強(qiáng)度降低((圖3B和C)。果蠅幼蟲(chóng)暴露于TBI，并在DMSO單獨(dú)、KPT-350(0.05、0.1或0.5 mM)或KPT-276(50、200或1000 nM)上飼養(yǎng)。對(duì)經(jīng)歷過(guò)TBI的果蠅幼蟲(chóng)的羽化試驗(yàn)顯示，KPT-350處理的動(dòng)物(圖3D)或KPT-276處理的動(dòng)物(圖3E)具有***的劑量依賴(lài)性的致死抑制。kpt -350處理的果蠅核GFP信號(hào)***高于dmso處理的對(duì)照組(圖3G）。 趨化因子科研整體服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶(hù)可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專(zhuān)題，外泌體研究專(zhuān)題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書(shū)奠定較好的基礎(chǔ)
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3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)