抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過(guò)表達(dá)抑制**生長(zhǎng)測(cè)定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實(shí)驗(yàn)，每組小鼠3只。結(jié)果與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過(guò)表達(dá)miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析，與單獨(dú)轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達(dá)較低(圖8B)。抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過(guò)表達(dá)抑制**生長(zhǎng)我們測(cè)定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實(shí)驗(yàn)中，每組實(shí)驗(yàn)小鼠3只。結(jié)果表明與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過(guò)表達(dá)miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析顯示，與單獨(dú)轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達(dá)較低(圖8B)。結(jié)論：MIR210HG在子宮內(nèi)膜*患者中是一個(gè)**的預(yù)后因素，干擾MIR210HG的體內(nèi)外表達(dá)可抑制子宮內(nèi)膜*細(xì)胞的惡性表型。MIR210HG-miR-337-3p/137被發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)HMGA2調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜*細(xì)胞惡性行為的能力。MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸是新的子宮內(nèi)膜*分子預(yù)后標(biāo)志物和潛在的***靶點(diǎn)。 為了闡明胰腺*中m6A水平升高的分子機(jī)制。CAR-T科研中標(biāo)率高
6、MiR-199a-5p改善MRL/lpr小鼠疾病
接下來(lái)，在體內(nèi)評(píng)估了miR-199a-5p對(duì)MRL/lpr小鼠的影響。17周齡MRL/lpr小鼠每4天注射20nmolmiR-199a-5pagomir或?qū)φ?agomirnc)，共4周(圖6A)。末次注射后48h處死小鼠，分離脾臟CD4+T細(xì)胞。與對(duì)照組相比，miR-199a-5pagomir處理組顯示miR-199a-5p水平升高(圖6B)，Sirt1表達(dá)降低(圖6C)，衰老標(biāo)志物p21和p16的表達(dá)***上調(diào)(圖6D)。這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過(guò)miR-199a-5p增加MRL/lpr脾CD4+T細(xì)胞衰老。
接下來(lái)，研究系統(tǒng)給予miR-199a-5p agomir是否能挽救MRL/lpr小鼠的狼瘡表型。與agomir nc組相比，miR-199a-5p agomir處理組脾臟和淋巴結(jié)明顯縮小(圖7A-B)，血清中anti-dsDNA抗體、IgG水平下降(圖7D-E)。血清ANA水平有下降趨勢(shì)(圖7C)。miR-199a-5p agomir處理組的腎損傷，表現(xiàn)為尿蛋白下降（圖7F），腎小球增大和細(xì)胞增生減少(圖7G)，外周***袢中IgG沉積減少(圖7h)。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs移植通過(guò)miR -199a-5p介導(dǎo)的Sirt1信號(hào)下調(diào)從而增加脾CD4+ T細(xì)胞的衰老，改善MRL/lpr小鼠的疾病表型。 江蘇囊性纖維化科研血清或尿液中尿酸濃度的升高與痛風(fēng)腎臟和血管疾病密切相關(guān)。
3）RIC8A與circPDE4B相互作用，參與OA
為了鑒別與circPDE4B相互作用的蛋白，我們采用RPD-MS(圖3A)，共鑒定出112個(gè)與circPDE4B相互作用的蛋白(圖3B)，確定RIC8A。HCs中的RNA-蛋白共定位證實(shí)了RIC8A和circPDE4B之間的相互作用(圖3C)。RPD實(shí)驗(yàn)表明，體外線性轉(zhuǎn)錄的circPDE4B能拉下重組RIC8A(圖3D)。然后，我們使用catRAPID工具預(yù)測(cè)circPDE4B和RIC8A的相互作用區(qū)域(圖3E)。為了識(shí)別預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)，我們將FLcircPDE4B截短為3個(gè)片段。據(jù)預(yù)測(cè)，RIP結(jié)果顯示有FL和S3被RIC8A拉下(圖3F)。有綜合來(lái)看，這些結(jié)果表明circPDE4B在HCs中與RIC8A相互作用。我們進(jìn)一步的研究表明，circPDE4B調(diào)控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩(wěn)定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對(duì)照(NC)和sh-circPDE4B的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說(shuō)明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩(wěn)定性。經(jīng)PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過(guò)表達(dá)和下調(diào)細(xì)胞中均未發(fā)生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過(guò)蛋白酶體活性調(diào)節(jié)RIC8A。無(wú)論內(nèi)源性還是外源性RIC8A,RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過(guò)表達(dá)circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導(dǎo)的RIC8A的降解和周轉(zhuǎn)。
為了確定METTL3誘導(dǎo)的APC表達(dá)下調(diào)在小鼠**生長(zhǎng)中的作用，將KYSE180細(xì)胞皮下注射到裸鼠體內(nèi)。發(fā)現(xiàn)通過(guò)APC去除，METTL3去除使**大小、體積和重量減小，并且**組織中的乳酸量恢復(fù)。此外，IHC染色顯示，METTL3缺失增加AP的表達(dá)，相應(yīng)地減少了**組織中β-連環(huán)蛋白、cyclind1、c-Myc和PKM2的表達(dá)。這些結(jié)果表明METTL3抑制APC的表達(dá)可以促進(jìn)**的發(fā)展。
APC表達(dá)下調(diào)與食管鱗*標(biāo)本METTL3上調(diào)及食管鱗*患者預(yù)后不良相關(guān)
為了確定METTL3抑制APC表達(dá)的臨床相關(guān)性，分析TCGA數(shù)據(jù)， APC mRNA表達(dá)與ESCC中METTL3 mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。發(fā)現(xiàn)與正常組織相比，ESCC標(biāo)本中APC的表達(dá)***下調(diào)。81例ESCC標(biāo)本的IHC染色觀察到METTL3蛋白表達(dá)與APC蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，METTL3蛋白表達(dá)與β-連環(huán)蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。此外，APC的高表達(dá)與ESCC患者的長(zhǎng)期總生存時(shí)間***相關(guān)。這些結(jié)果提示APC表達(dá)下調(diào)與METTL3表達(dá)上調(diào)及ESCC患者預(yù)后不良相關(guān)。 英拜的實(shí)驗(yàn)室坐落在上海漕河涇園區(qū)浦江園區(qū)。
MB患者血漿來(lái)源的外泌體中miR-101-3p和miR-423-5p水平上調(diào)，這些miRNA可通過(guò)外泌體轉(zhuǎn)移到**細(xì)胞中
在初步篩選中，使用超離心法從MB患者和健康對(duì)照組的血漿中分離出外泌體。通過(guò)透射電子顯微鏡分析分離出的外泌體，確定外泌體的平均大小和形態(tài)，顯示出典型的直徑<150nm的雙層球形結(jié)構(gòu)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們的外泌體制劑，我們通過(guò)westernblot檢測(cè)了外泌體標(biāo)志物CD9、CD63和GM130的表達(dá)。分離的顆粒外泌體**蛋白標(biāo)記CD9和CD63陽(yáng)性，GM130陰性。此外，我們通過(guò)miRNA-seq研究了血漿外泌體的miRNA表達(dá)譜。我們發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比，MB患者中有35個(gè)miRNA上調(diào)，5個(gè)miRNA下調(diào)。 英拜的員工福利待遇很好。過(guò)氧化物科研國(guó)家自然科學(xué)基金
代謝變化被認(rèn)為是腸病**重要的特征之一。CAR-T科研中標(biāo)率高
為了檢測(cè)該多肽產(chǎn)物，我們使用了一種識(shí)別MAPK1中間部分的抗體(圖4d)。Western Blot檢測(cè)40對(duì)胃*組織(圖4e)和細(xì)胞系(圖4f)中MAPK1-109aa和MAPK1的水平。通過(guò)半定量分析，胃*組織中MAPK1-109aa水平較正常胃組織中降低。Kaplan-Meier生存分析顯示，MAPK1-109aa表達(dá)水平較高的胃*患者總生存期明顯長(zhǎng)于MAPK1-109aa表達(dá)水平較低的胃*患者(圖4h)。一系列GC細(xì)胞系中MAPK1-109aa的含量也明顯低于正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1。在內(nèi)源性circMAPK1水平較低且?guī)缀鯖](méi)有MAPK1-109aa表達(dá)的MKN45細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染circMAPK1和MAPK1-109aa質(zhì)粒均產(chǎn)生預(yù)測(cè)的MAPK1-109aa帶，而過(guò)表達(dá)circMAPK1 IRES突變質(zhì)粒則沒(méi)有產(chǎn)生預(yù)測(cè)的MAPK1-109aa帶(圖4i)。相反，在內(nèi)源性circMAPK1和MAPK1-109aa更高表達(dá)的GES-1細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)兩種特異性靶向circMAPK1連接的shRNA***降低了MAPK1-109aa的表達(dá)(圖4j)。使用anti-flag抗體進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)，證實(shí)MAPK1-109aa-Flag位于過(guò)表達(dá)MAPK1-109aa-Flag質(zhì)粒的MKN45細(xì)胞的胞質(zhì)中，如圖4k所示。CAR-T科研中標(biāo)率高
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)