在Fth- KO小鼠中， TBI后褪黑素對神經(jīng)的保護(hù)作用被**取消
為了進(jìn)一步探索神經(jīng)元Fth的喪失是否影響褪黑素對TBI誘導(dǎo)的鐵死亡的影響，測量了鐵死亡的幾種假定的生物標(biāo)志物。發(fā)現(xiàn)***KO小鼠上皮層非血紅素鐵的水平?jīng)]有影響。令人驚訝的是，盡管褪黑素***的和未***的Fth -KO小鼠的Tfr1 mRNA和蛋白表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異，但是在褪黑素***的小鼠中，觀察到Fpn mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著增加Fth- KO小鼠。值得注意的是，與未***的Fth- KO小鼠相比，用褪黑素***Fth- KO小鼠未能顯著改變mRNA（Slc7a11，Ptgs2）和蛋白質(zhì)（xCT，Cox2、4HNE）的表達(dá)。另外，用褪黑素***Fth- KO小鼠并沒有統(tǒng)計學(xué)上降低GSH和MDA以及4HNE的水平，和FJB陽性細(xì)胞的數(shù)目。這些結(jié)果表明褪黑素沒有統(tǒng)計學(xué)上減少TBI引起的鐵死亡和神經(jīng)元變性。 大黃酸處理沒有改變?nèi)樗峋蛩岬漠a(chǎn)生。海南科研贈送提供技術(shù)路線
然后使用單細(xì)胞RNA-seq來描述移植后30天脾臟中存留的T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜（Fig. 4G）。使用pseudobulk RNA-seq分析和預(yù)轉(zhuǎn)移體外培養(yǎng)的基因比較，生成了持續(xù)細(xì)胞的基因標(biāo)記，其標(biāo)志是記憶相關(guān)基因(Sell，F(xiàn)oxp1，Tcf7，Cd7，Il7r，Klf2，Ccl5)的高表達(dá)和效應(yīng)相關(guān)基因(Gzmd，Ifng，Prf1，Gzma，Gzmb)的低表達(dá)(Fig. 4H-I)。對先前的體外單細(xì)胞數(shù)據(jù)（Fig. 2H-J）的進(jìn)一步分析顯示，CDK4/6i處理后，具有這種持續(xù)性特征的細(xì)胞頻率從7.5%增加至26.8%（Fig. 4J-K）。這些數(shù)據(jù)表明，抑制CDK4/6促進(jìn)T細(xì)胞向真實(shí)的記憶表型分化，其特征是功能的長期持久性。醫(yī)學(xué)相關(guān)科研推薦咨詢上海英拜生物有經(jīng)驗(yàn)豐富的科研團(tuán)隊。
1）UUO誘導(dǎo)的腎纖維化模型中TGF-β1的表達(dá)和外泌體的產(chǎn)生增加我們首先通過Masson三色染色、Sirius紅染色、westernblotting和免疫組化方法評估UUO-3d和UUO-7d模型腎纖維化和TGF-β1的表達(dá)。結(jié)果提示，TGF-β1表達(dá)和腎纖維化與梗阻天數(shù)呈正相關(guān)。為了進(jìn)一步闡明外泌體是否在UUO模型中發(fā)揮作用，我們進(jìn)行了透射電鏡、免疫熒光和westernblotting檢測。透射電鏡顯示UUO后細(xì)胞外囊泡分泌明顯增加。此外，許多細(xì)胞外囊泡的外泌體直徑為30-150nm。CD63和TSG101(外泌體標(biāo)記物)的Westernblot和免疫染色顯示，外泌體在UUO-3d組中明顯增加，在UUO-7d組中進(jìn)一步增加。此外，外泌體主要分布在腎小管上皮周圍。
4.篩選關(guān)鍵模塊（hubmodule）并進(jìn)行富集分析分析發(fā)現(xiàn)，棕色模塊與CD8+T細(xì)胞***相關(guān)（R2=-0.05，P=9e-05），因此選擇棕色模塊為hubmodule進(jìn)行富集分析。
5.在hubmodule中篩選出關(guān)鍵基因（hubgene）并驗(yàn)證為了研究與樞紐模塊中CD8+T細(xì)胞浸潤相關(guān)的潛在樞紐基因，構(gòu)建了蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)[臨界標(biāo)準(zhǔn)：reliability>0.7andconnectivity>15(node/edge)]將hubmodule中的基因識別為中心節(jié)點(diǎn)，并通過Cytoscape對其進(jìn)行可視化;對hubmodule中所有基因進(jìn)行基于TCGA數(shù)據(jù)的預(yù)后分析，八個基因（CLCN2，ERLIN2，F(xiàn)5，F(xiàn)AM107B，GFM1，HSPB3，METTL8和SYT3）與LSCC患者的預(yù)后相關(guān)，接下來對這8個基因進(jìn)行差異表達(dá)分析，六個基因（GFM1，HSPB3，SYT3，ERLIN2，METTL8和CLCN2）在LSCC組織中顯著差異表達(dá)。
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Ran***1對Ran-GTP的水解對于核出口過程中貨物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)至關(guān)重要。Ran***1維持核/細(xì)胞質(zhì)Ran梯度，其丟失會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在非tbi對照組大腦中，Ran***1在核膜內(nèi)分布均勻，少數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的核信號。但tbi暴露后，Ran***1染色分布異常，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)強(qiáng)度高(圖2E）。與對照組相比，腦外傷后Ran***1分布異常的細(xì)胞百分比明顯增高(圖2F）。反復(fù)的創(chuàng)傷損傷會干擾Ran***1在大腦中的定位。TBI大鼠損傷皮質(zhì)(同側(cè)半球)下海馬區(qū)域的腦細(xì)胞表現(xiàn)出錯誤定位和/或聚集(箭頭)或強(qiáng)烈的Ran***1核染色(箭頭)，而假手術(shù)對照組主要是光滑的核周染色(圖2H)。與假對照相比，創(chuàng)傷性腦損傷大鼠的NUP62顯示了明顯的胞質(zhì)(箭頭)和核(箭頭)錯位，假對照顯示了很少的胞質(zhì)(而沒有核)錯位(圖2J)。創(chuàng)傷性腦損傷腦組織中NUP62病理細(xì)胞的百分比明顯高于假手術(shù)對照組(圖2K).英拜提供一年三節(jié)的購物卡津貼。云南科研地區(qū)科學(xué)基金
尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。海南科研贈送提供技術(shù)路線
為了使細(xì)胞在G1/S檢查點(diǎn)同步，我們對它們施加雙胸腺嘧啶脈沖。這種處理有效地抑制了PTEN-WT和PTEN-398A細(xì)胞在G1/S邊界(圖4B)。然后在正常生長培養(yǎng)基中釋放細(xì)胞，在S期進(jìn)展期間用IR處理，6小時后收集細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布(實(shí)驗(yàn)方案見補(bǔ)充圖7A)。大部分PTEN-WT細(xì)胞被阻滯在s期，而PTEN-398A細(xì)胞未能阻滯細(xì)胞周期，而是發(fā)展到G2/M期(圖4C)。通過測定表達(dá)磷酸化組蛋白H3(Ser10)的細(xì)胞比例，證實(shí)了這一觀察結(jié)果。磷酸化組蛋白H3(Ser10)標(biāo)志著細(xì)胞處于有絲分裂階段。(圖4d)。海南科研贈送提供技術(shù)路線
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)