circNDUFB2觸發(fā)NSCLC細(xì)胞的免疫防御反應(yīng)
為了研究參與circNDUFB2的信號(hào)通路，使用RNA測(cè)序（RNA-seq）進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析。結(jié)果表明circNDUFB2過表達(dá)影響934個(gè)基因的表達(dá)水平，其中743個(gè)基因上調(diào)，191個(gè)基因被下調(diào)?；虮倔w生物學(xué)過程（GO_BP）和KEGG途徑富集分析表明circNDUFB2觸發(fā)了免疫防御和I型干擾素（IFNs）信號(hào)傳導(dǎo)。基因集富集分析（GSEA）也表明目標(biāo)基因的信號(hào)傳導(dǎo)途徑參與了免疫反應(yīng)。確認(rèn)了在circNDUFB2過表達(dá)的NSCLC細(xì)胞中一組免疫基因表達(dá)被上調(diào)，而circNDUFB2敲低降低了NSCLC細(xì)胞中這些基因的水平。這些結(jié)果表明，過量表達(dá)circNDUFB2，而不是其具有相同序列的線性RN**段，導(dǎo)致免疫基因上調(diào)。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）證實(shí)circNDUFB2過表達(dá)顯著增加了細(xì)胞培養(yǎng)上清液中CXCL10，CXCL11，CCL5和IFNβ的水平，而circNDUFB2敲低降低了細(xì)胞培養(yǎng)上清液中這些細(xì)胞因子的水平。這些結(jié)果證明circNDUFB2在NSCLC細(xì)胞中引發(fā)免疫應(yīng)答。 英拜提供可靠的技術(shù)咨詢。基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科研創(chuàng)新服務(wù)
7）NOX4通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人體星形膠質(zhì)細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化促進(jìn)鐵死亡
為了探討NOX4調(diào)控AD星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的分子機(jī)制，我們檢測(cè)NOX4的升高是否能通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人星形膠質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化促進(jìn)鐵死亡。我們用免疫熒光染色法測(cè)定了4-HNE在人星形膠質(zhì)細(xì)胞中的蛋白水平。免疫熒光染色顯示，與對(duì)照組相比，NOX4的升高增加了4-HNE蛋白的水平，增加了質(zhì)膜中脂質(zhì)過氧化源性液滴的含量，細(xì)胞的形狀出現(xiàn)收縮(圖7A)。NOX4過表達(dá)使4-HNE陽性細(xì)胞數(shù)量***增加(圖7B)。NOX4過表達(dá)增加了4-HNE水平和MDA水平(圖7C)。值得注意的是，與對(duì)照組相比，NOX4的升高增加了鐵的積累，這是鐵死亡的特異性標(biāo)志(圖7D)。 cancer科研服務(wù)兩年m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。
三、pten-s38a突變誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抵抗
為了進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對(duì)基因毒性損傷的反應(yīng)，我們使用抗體陣列評(píng)估了表達(dá)PTEN-wt或PTEN-398a的MCF10A細(xì)胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。Pten+/+和Pten398A/398AMEF培養(yǎng)，表達(dá)Pten-wt的MCF10A細(xì)胞與表達(dá)Pten-398A的MCF10A細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下的生長速率均無差異(圖3A和補(bǔ)充圖5C)。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同的基因毒性脅迫處理:IR、順鉑和柔紅霉素。在所有條件下，Pten398A/398AMEFs和PTEN-398A表達(dá)的MCF10A細(xì)胞對(duì)基因毒性脅迫的抗性均高于野生型PTEN的細(xì)胞(圖3BD和SupplementaryFig.5D,E)。通過流式細(xì)胞儀AnnexinV染色判斷(圖3E)。通過使用caspase-3抗體對(duì)Pten+/+、MMTVneu和Pten398A/398A、MMTVneu**進(jìn)行免疫組化染色，證實(shí)了這些觀察結(jié)果。
1、在響應(yīng)CDK4/6抑制中瘤內(nèi)記憶類CD8+T細(xì)胞的表現(xiàn)
為了***評(píng)價(jià)CDK4/6抑制對(duì)抗**T細(xì)胞免疫的影響，使用多模式單細(xì)胞測(cè)序(CITE-seq)分析了CDK4/6抑制劑palbociclib或?qū)φ仗幚淼腗C38-OVA**小鼠的瘤內(nèi)T細(xì)胞群體(Fig.1A)。維度分析顯示MC38-OVA**中有10個(gè)不同的T細(xì)胞群(Fig.1B)。用CDK4/6i處理的**有較低頻率的CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Foxp3+Tregs)，而CD8+記憶類T細(xì)胞頻率更高，以Tcf7、Sell、Bcl2和Cd7高表達(dá)為特征(Fig.1B-D)。CD8+T細(xì)胞池的基因動(dòng)態(tài)表達(dá)揭示來源于CDK4/6i處理的小鼠的CD8+**免疫浸潤（TILs）向更早、更像干細(xì)胞的分化狀態(tài)傾斜(Fig.1E-F)。與此一致，較早出現(xiàn)假時(shí)間軌跡的細(xì)胞表達(dá)更高水平的記憶相關(guān)基因(Tcf7,Sell,Il7r)，和更低水平的效應(yīng)相關(guān)基因(Prf1,Gzmb)和耗損標(biāo)志物(PD-1,TIM3)(Fig.1G)。 我們?cè)谌祟愐认?細(xì)胞系中過表達(dá)或敲除METTL14。
HOXBLINC的缺失擾亂了NPM1c+介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄程序和白血病發(fā)生
隨后鑒定了NPM1c+AML和NPM1cWTAML病人中的差異表達(dá)基因，與WT相比，有871個(gè)下調(diào)基因和980個(gè)上調(diào)基因，包括HoxBlinc和NPM1c+的特征基因HoxB2-5，HoxA7,9-11，Meis1，Runx1（圖1c）。然后，通過RNA-seq分析比較了對(duì)照組和HOXBLINCi細(xì)胞的全基因組轉(zhuǎn)錄組變化。一致地，NPM1c+細(xì)胞表現(xiàn)出HOXBLINClncRNA和常見的NPM1c+AML標(biāo)記基因的高表達(dá)(圖1d)。有趣的是，在OCI-AML3細(xì)胞中抑制HOXBLINC***抑制了許多NPM1c+標(biāo)志性基因的轉(zhuǎn)錄，如HOXB2-5、HOXA9-11、RUNX1和MEIS1(圖1d)。 英拜提供生命科學(xué)內(nèi)的一體化服務(wù)。新疆科研技術(shù)指導(dǎo)
英拜的實(shí)驗(yàn)室坐落在上海漕河涇園區(qū)浦江園區(qū)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)科研創(chuàng)新服務(wù)
脂質(zhì)氧化先于胞質(zhì)Ca2+的增加和質(zhì)膜的破壞
體積細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中Ferroptosis特征之間的詳細(xì)時(shí)間關(guān)系被***后群體細(xì)胞發(fā)生Ferroptosis的異質(zhì)性所掩蓋。為了解決這個(gè)問題，作者使用活細(xì)胞共聚焦顯微鏡在單細(xì)胞水平上量化了Fluo-4AM信號(hào)、細(xì)胞圓度和PI攝入量的增加。從單個(gè)細(xì)胞獲得的動(dòng)力學(xué)曲線(圖2C,F,K)中，計(jì)算出每個(gè)ferroptotic表型(t50)實(shí)現(xiàn)50%變化所需的時(shí)間，這使得可以設(shè)置Ferroptosis各過程之間的滯后時(shí)間(圖2D,G,L)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與所使用的Ferroptosis觸發(fā)器無關(guān)，胞漿Ca2+的增加先于細(xì)胞圓縮和質(zhì)膜完全坍塌(圖2A,B)。從流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)(圖1G)可以看出，Erastin-1存在時(shí)，胞質(zhì)Ca2+的增加是一個(gè)雙相行為的兩步過程(圖2C)。***個(gè)事件在比較大Ca2+信號(hào)的40%左右達(dá)到飽和，與不相關(guān)的鈣(Ca2+un)增加相對(duì)應(yīng)，因?yàn)樗鼪]有受到Ferroptosis的抑制(圖1G)。 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科研創(chuàng)新服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)