miR-101-3p或miR-423-5p過表達抑制體內(nèi)**的發(fā)生
為了評價miR-101-3p和miR423-5p在體內(nèi)的抗**作用，我們將轉(zhuǎn)染LV16-miR-101-3p、LV16-miR-423-5p或LV16-NC的Daoy細胞皮下注射Balb/c雄性裸鼠。RT-qPCR檢測miR-101-3p和miR-423-5p在慢病毒轉(zhuǎn)染的Daoy細胞中的相對表達水平。**在注射后2周被發(fā)現(xiàn)，小鼠在植入后7周被處死。與對照組相比，LV16-miR-101-3p-和LV16-miR-423-5p處理組的**生長明顯受到抑制。miR-101-3p或miR-423-5p***后，**重量也***降低。免疫組化檢測EZH2、FOXP4和Ki67在異種移植瘤組織中的表達。在表達LV16-miR-101-3p-和LV16-miR-423-5p的**組織中FOXP4和Ki-67的水平均下調(diào)，而在LV16-miR-101-3p組EZH2也下調(diào)。這些數(shù)據(jù)表明，miR-101-3p和miR-423-5p通過抑制FOXP4和EZH2的表達，在體內(nèi)抑制**生長。 了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。cancer課題國家自然科學基金
miR-335-5p通過靶向RASA1促進CRC細胞的遷移和侵襲
作者使用TargetScan、miRDB和miRTarBasemiR-335-5p三種生物信息學算法預測潛在的靶基因。從TCGA下載的數(shù)據(jù)分析表明，RASA1的表達與CRC患者的miR-335-5p水平顯著相關。通過生物信息學分析確定的RASA13'UTR中的假定的miR-335-5p靶位點。使用野生型(WT)RASA13'UTR在SW480細胞中進行的熒光素酶報告實驗，結果表明轉(zhuǎn)染miR-335-5p模擬物后熒光素酶活性顯著降低。相比之下，突變(mut)RASA1序列的報告基因的熒光素酶活性不受miR-335-5p的影響，表明miR-335-5p直接靶向RASA13'UTR的特定區(qū)域。為了確定miR-335-5p對RASA1的影響，使用Lipofectamine3000將miR-335-5p模擬物瞬時轉(zhuǎn)染到SW480和SW620細胞中。用定量逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡進行評估表明mRNARASA1和蛋白質(zhì)水平在模擬轉(zhuǎn)染細胞中顯著下調(diào)。此外，miR-335-5p轉(zhuǎn)染增加了Ras蛋白的表達。miR-335-5p的上調(diào)可能伴隨著EMT***，如SW480和SW620細胞中波形蛋白表達增加和E-鈣粘蛋白表達降低所證明的。此外，miR-335-5p水平升高顯著促進遷移和侵襲，而用miR-335-5p抑制劑抑制miR-335-5p顯著抑制CRC細胞的遷移和侵襲。 泌尿課題詢問報價***ATM對PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***。
DMF介導的體內(nèi)CRC細胞死亡依賴于HIF-2α
為了證實HIF-2α在DMF介導的體內(nèi)CRC細胞死亡中的作用，利用HIF-2α敲低HCT116細胞。在DMF和FG4592***前，將穩(wěn)定的非靶標擾亂和HIF-2α敲低的HCT116細胞皮下注射到免疫受損小鼠的兩側，并允許其生長10天。HIF-2α基因敲低的細胞對DMF和FG4592處理具有抗性。在DMF+FG4592處理的小鼠中，表達雜亂shRNA的細胞顯示**體積和重量***減少，而HIF-2α敲低的細胞則完全耐受。同樣，在DMF+FG4592處理后，HIF-2α敲低細胞的**增殖和凋亡沒有改變。這些數(shù)據(jù)表明，HIF-2α***增加了體內(nèi)氧化細胞死亡的脆弱性。
為了證明ELNAT1與BCa分泌的EV的關系，作者從BCa細胞培養(yǎng)基中分離出EVs，采用透射電子顯微鏡(TEM)、納米粒子**分析(NTA)及對EVs的蛋白標志物檢測，證明了作者準確分離出BCa分泌的EV（Figure 2 J-L）。并且從BCa患者和健康志愿者尿液樣本中分離的EVs中檢測ELNAT1的表達，發(fā)現(xiàn)ELNAT1在BCa分泌的EV中過表達（Figure 2 I）。以上數(shù)據(jù)表明，EVs介導的ELNAT1過表達與淋巴結轉(zhuǎn)移相關。
3.EVs介導的ELNAT1促進BCa體內(nèi)外淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移
為了確定EV介導的ELNAT1是否促進體外淋巴管生成，作者用HLECs孵育BCa細胞分泌的EVs的檢測管形成和遷移。研究發(fā)現(xiàn)，干擾ELNAT1基因會破壞UM-UC-3和T24細胞分泌EVs誘導HLECs管形成和遷移的能力（Figure3A-C），這些結果表明EVs介導的ELNAT1誘導了體外淋巴管生成。 ATM對PTEN的磷酸化導致PTEN在質(zhì)膜上重新分布。
作為一種典型的G蛋白偶聯(lián)受體， DRD2的內(nèi)化誘導其受體β-arrestin2在質(zhì)膜上的募集，并增加其與β-arrestin2的親和力。LPS和CM刺激了DRD2和β-arrestin2的蛋白-蛋白結合(圖5F-G)。同時，通過IF染色觀察到，經(jīng)過LPS處理后，DRD2似乎在細胞質(zhì)中與p-p65結合(圖5A)， Co-IP和IB進一步證實了這種結合(圖5F)。據(jù)報道，β-arrestin2信號的***會破壞星形膠質(zhì)細胞中TAK1-Tab1的結合，而這種結合對于TAK1的***至關重要。本研究還證實，內(nèi)化的DRD2可以促進TAB1與β-arrestin2的結合，削弱TAB1與TAK1的結合(圖5H)。綜上所述，DRD2***的β-arrestin2通過競爭性地結合TAB1來拮抗TAK1的磷酸化。深耕科研行業(yè)提高科研的高效。轉(zhuǎn)運RNA 課題檢測服務
產(chǎn)生關于環(huán)境影響疾病的病因和分子機制的可測試的假設。cancer課題國家自然科學基金
此外，GFP-INPP4B的表達在基礎和wnt刺激條件下降低了GSK3β蛋白水平，與GSK3β的增強破壞一致(圖6d)。通過Hrs shRNA消耗抑制晚期核內(nèi)體形成后，降低的GSK3β蛋白水平得以恢復(圖6f, g)。GFP-INPP4B而不是gfp載體細胞表現(xiàn)出明顯的GSK3β蛋白酶保護，這與GSK3β向晚期核內(nèi)體轉(zhuǎn)運的增強相一致(圖6h)。免疫熒光證實了這一點，在GFP-INPP4B中觀察到RFP-GSK3與LysoTracker共定位，這是一種積累在晚期核內(nèi)體/溶酶體中的染料，而不是gfp載體細胞(圖6i)。
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