3）DRD2重新編碼MφM1表型，下調(diào)IL-6和IL-10
據(jù)報(bào)道，DRD2可調(diào)節(jié)M1的極化。結(jié)果顯示，在DRD2表達(dá)水平較高的BrCa組織中，M1Mφ的浸潤增加，M2Mφ的浸潤減少(圖3A)。為進(jìn)一步研究DRD2對TAMs的調(diào)控作用，構(gòu)建了BrCa與Mφ共培養(yǎng)體系。當(dāng)Mφ與表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，qRT-PCR顯示M1表型標(biāo)記增加，M2Mφ標(biāo)記下調(diào)(圖3B-C)。qRT-PCR也證實(shí)了載體轉(zhuǎn)染的BrCa細(xì)胞將Mφ調(diào)節(jié)為M2型(圖3C)[12]。WB結(jié)果顯示，表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞上調(diào)M1標(biāo)記iNOS，下調(diào)M2標(biāo)記CD206(圖3D)。IF染色顯示，與表達(dá)DRD2的**細(xì)胞共培養(yǎng)后，Mφ表現(xiàn)為M1表型(圖3E)。上述結(jié)果表明，BrCa中的DRD2具有將Mφ重新編碼為M1表型的能力。為了探索使Mφ向M1表型分化的關(guān)鍵調(diào)控因子，我們進(jìn)行了細(xì)胞因子陣列分析。結(jié)果表明，TNF-α和兩種誘導(dǎo)M1極化的經(jīng)典細(xì)胞因子IFNγ均未增加。而與Mφ共培養(yǎng)后，DRD2***下調(diào)IL-6和IL-10(圖3F)。分析熒光值，進(jìn)一步證實(shí)IL-6和IL-10下調(diào)(圖3F)。因此，DRD2可以將Mφ重新編碼為M1表型，并在crosstalk過程中***下調(diào)IL-6和IL-10。 阻斷atm依賴的磷酸化會(huì)損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配生物相關(guān)課題免費(fèi)設(shè)計(jì)
1）LINC00926被篩選為PGK1負(fù)調(diào)控的lncRNA，與乳腺*臨床結(jié)果相關(guān)
為了探索負(fù)調(diào)控PGK1的lncRNAs，我們根據(jù)圖1A所示的篩選策略對乳腺*的三個(gè)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了分析。我們鑒定了3個(gè)lncRNA，LINC00926，LINC01089和LINC00324與PGK1呈負(fù)相關(guān)，且表現(xiàn)出良好的臨床結(jié)果(圖1B-1D)。為了研究鑒定出的lncRNAs是否下調(diào)了PGK1的表達(dá)，我們分別用這三個(gè)lncRNAs分別轉(zhuǎn)染了乳腺*細(xì)胞。我們的結(jié)果表明，在mRNA水平不變的情況下，只有LINC00926導(dǎo)致MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中PGK1蛋白水平***下降(圖1E)，表明LINC00926下調(diào)了乳腺*細(xì)胞中PGK1的表達(dá)。此外，與非**組相比，13/14(92.9%)例乳腺*患者的LINC00926表達(dá)降低，12/14(85.7%)例乳腺*患者的PGK1表達(dá)上調(diào)。 代謝課題詢問報(bào)價(jià)高通量測序后續(xù)的機(jī)制實(shí)驗(yàn)。
表達(dá)MCF-10A腺泡的Myc-INPP4BWT而不是Myc-INPP4BC842A(PI(3,4)P24-磷酸酶死亡)的腺泡(補(bǔ)充圖2k)顯示增殖細(xì)胞的百分比明顯高于病媒控制的腺泡(1.5倍)(圖2i,j)。在第7天，腺泡的大小沒有明顯變化(圖2k)。第14天，Myc-INPP4BWT而不是MycINPP4BC842A表達(dá)MCF-10A的細(xì)胞形成了更大的腺泡(1.8倍)，每個(gè)腺泡的細(xì)胞數(shù)量比載體對照增加了1.4倍(圖2ln)。過表達(dá)INPP4B促進(jìn)MCF-10A細(xì)胞增殖，但不影響細(xì)胞的尖基底極性和細(xì)胞凋亡。與此一致的是，過表達(dá)Myc-INPP4BWT而不是Myc-INPP4BC842A在血清剝奪后的單層培養(yǎng)中增強(qiáng)了MCF-10A細(xì)胞的增殖(1.7倍)(圖2o,p)。
總之，這一數(shù)據(jù)與INPP4B以PI(3,4)P2-磷酸酶依賴的方式促進(jìn)pik3a突變體ER+乳腺*和pik3a野生型乳腺上皮細(xì)胞增殖的解釋相一致。
此外，采用qPCR分析miR-934在總CM、外泌體耗盡CM(超離心耗竭)和外泌體中的表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-934在總CM或外泌體中的表達(dá)***高于外泌體缺失的CM（Fig.2i）。此外，使用qPCR研究了上述四種CRC細(xì)胞系的外泌體中miR-934的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)外泌體中miR-934的表達(dá)模式與CRC細(xì)胞CM中的表達(dá)模式一致（Fig.2j）。以上結(jié)果表明miR-934主要包裹在CRC細(xì)胞來源的外泌體中。
3、CRC細(xì)胞來源的外泌體miR-934誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化
為了探索miR-934促進(jìn)CRLM的分子和細(xì)胞基礎(chǔ)，通過Cytoscape軟件注釋了TCGAcohort中191個(gè)miR-934相關(guān)基因的細(xì)胞功能，發(fā)現(xiàn)miR-934***參與多種炎癥反應(yīng)，提示miR-934可能參與了CRC免疫微環(huán)境（Fig.3a）。然后發(fā)現(xiàn)miR-934與巨噬細(xì)胞的基因信號(hào)特異性相關(guān)（Fig.3b）。為了研究在CRLM中TAM的浸潤與miR-934之間的相關(guān)性，我們在原發(fā)性結(jié)直腸*組織和CRLM組織樣本中采用免疫組化染色檢測TAM標(biāo)記CD163。如圖3c所示，在CRLM組織中CD163+TAM浸潤豐富的區(qū)域觀察到miR-934表達(dá)升高。將THP-1細(xì)胞與PMA孵育，誘導(dǎo)分化為M0巨噬細(xì)胞，M0巨噬細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)馁N壁形態(tài)和巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD68的高表達(dá)（Fig.3d）。
醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。
大約 1% 的人類基因組能夠折疊成 G 四鏈體 (G quadruplexes，G4s)——在富含 G 的基序上形成的非經(jīng)典鏈特異性 DNA 結(jié)構(gòu)。G4 的熱穩(wěn)定性不同，這可能會(huì)影響它們的功能。然而，G4s 也可能阻礙復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯，并可能增加基因組的不穩(wěn)定性和突變率。因此，根據(jù)其基因組位置、熱穩(wěn)定性和功能性，G4 基因座可能會(huì)在不同的選擇壓力下進(jìn)化，而這一點(diǎn)從未被研究過。
一、基因組中G4基因座的密度不均勻
與全基因組平均值相比，CpG島、上游區(qū)域和轉(zhuǎn)錄鏈的G4密度的倍數(shù)差異特別**別為12.3、4.98和4.11。相比之下，內(nèi)含子的非轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄鏈、非轉(zhuǎn)錄外顯子鏈和3'UTR的非轉(zhuǎn)錄鏈具有G4密度接近全基因組平均值；校正G含量總體趨勢不變，復(fù)制起點(diǎn)和增強(qiáng)子具有特別高的G4密度：分別比全基因組平均值高6.88倍和3.03倍。 caspase-3抗體是一種***用于檢測凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。炎癥課題服務(wù)兩年
上海英拜提供課題外包服務(wù)。生物相關(guān)課題免費(fèi)設(shè)計(jì)
VD可修復(fù)高糖誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞自噬缺陷
我們探討了pari對體外DN細(xì)胞自噬和炎癥的影響。我們用高水平葡萄糖(HG)處理HK-2細(xì)胞。如圖4A所示，在高糖條件下，LC3-II和SQSTM1的表達(dá)增加，在自噬抑制劑氯喹(CQ)作用下，LC3-II和SQSTM1的表達(dá)進(jìn)一步增加。此外，我們使用tf-LC3研究自溶酶體的成熟過程。在酸性溶酶體環(huán)境中，mCherry比GFP更穩(wěn)定，自溶酶體的正常成熟以增加*紅點(diǎn)為特征。與此相反，GFP和mCherry斑點(diǎn)共定位表明自噬通量中斷，呈現(xiàn)黃色斑點(diǎn)。高糖誘導(dǎo)mCherry和GFP共定位，CQ處理更明顯。這些結(jié)果進(jìn)一步表明，高糖可損害自噬通量。另一方面，與HG組相比，paricalcitol降低了LC3-II和SQSTM1的表達(dá)，增加了*紅色的斑點(diǎn)。為了研究缺陷性自噬是否有助于高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，采用實(shí)RT-qPCR檢測促炎因子(CCL2,TNF,IL6)的mRNA水平。結(jié)果顯示CQ加重了高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，而paricalcitol降低了促炎因子的表達(dá)，說明HK-2細(xì)胞高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)部分是由于自噬缺陷引起的，paricalcitol可以恢復(fù)自噬通量，減少炎癥反應(yīng)。 生物相關(guān)課題免費(fèi)設(shè)計(jì)
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