5）DRD2通過(guò)阻斷TAK1的磷酸化來(lái)限制NF-κB信號(hào)的***NF-κB信號(hào)的***
對(duì)于觸發(fā)炎癥小體組裝和隨后的焦亡是必不可少的。IF染色顯示DRD2幾乎阻斷了p-p65的核易位(圖5A)，但這種抑制被Mφ所抵消(圖5B)。核和細(xì)胞質(zhì)提取物也顯示DRD2抑制了p-p65的核易位(圖5C)。如WB結(jié)果所示，在LPS刺激下，DRD2抑制IKKα/β、IκBα和p65的磷酸化(圖5D)。異位DRD2表達(dá)也***抑制了Mφ誘導(dǎo)的p65磷酸化和IKKα/β的上游***(圖5E)。WB結(jié)果顯示DRD2下調(diào)NF-κB的下游靶點(diǎn)ICAM-1。然而，這種下調(diào)被Mφ所抵消(圖5E)。抑制IKKα/β磷酸化提示DRD2負(fù)向介導(dǎo)IKK復(fù)合物上游。TAK1在催化IKKα和IKKβ中起關(guān)鍵作用。TAK1的磷酸化被異位DRD2表達(dá)***抑制(圖5D-E)。因此，DRD2通過(guò)阻斷上游激酶TAK1來(lái)抑制NF-κB信號(hào)通路的***。 可以推斷基因調(diào)控事件之間的關(guān)系。項(xiàng)目課題歡迎咨詢
為了確定ATM介導(dǎo)的PTEN磷酸化如何調(diào)節(jié)DDR，構(gòu)建Pten398A/398A和Pten+/+ littermates MEFs細(xì)胞模型。PTEN蛋白水平不受398A突變的影響(補(bǔ)充圖3A, B)。此外，磷酸化AKT (PI3K通路活性的標(biāo)記物)水平在Pten398A/398A和PTEN +/+ MEFs中相似(補(bǔ)充圖3B)。構(gòu)建人乳腺上皮細(xì)胞系(MCF10A)，穩(wěn)定表達(dá)野生型PTEN (PTEN- wt)，或PTEN的突變形式，不能被ATM磷酸化(PTEN- 398a)。在這些細(xì)胞中，內(nèi)源性的PTEN基因被CRISPR/Cas9編輯刪除，創(chuàng)建了PTEN空細(xì)胞，然后用野生型或突變型的蛋白質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)重組。在表達(dá)PTEN- wt和PTEN- 398a的MCF10A細(xì)胞中，PTEN蛋白和磷酸化AKT水平相似(補(bǔ)充圖3A)，使這些細(xì)胞成為ATM磷酸化PTEN分子作用研究的合適替代模型。生物相關(guān)課題創(chuàng)新服務(wù)zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。
3、MAO-A促進(jìn)巨噬細(xì)胞免疫抑制極化
為了研究MAO-A對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控，體外培養(yǎng)MaoaWT和KOBMDMs，并通過(guò)添加***刺激（IL4和IL-13）使這些巨噬細(xì)胞向免疫抑制表型極化（圖3a）。觀察到，在M-CSF誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化過(guò)程中，MaoamRNA的表達(dá)在Maoa野生型BMDMs中有明顯的誘導(dǎo)作用，Maoa在成熟的BMDMs中表達(dá)趨于穩(wěn)定，并維持IL-4/IL-13誘導(dǎo)的免疫抑制極化（圖3b-c）。MaoaKOBMDMs中MAO-A表達(dá)未檢測(cè)到，證實(shí)了其MAO-A缺失基因型（圖3b,d）。與野生型巨噬細(xì)胞相比，在IL-4/IL-13刺激下，MaoaKO巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出更低的免疫抑制表型，這在其免疫抑制標(biāo)記物的表達(dá)減少中得到了證明（圖3e-g）。在巨噬細(xì)胞/T細(xì)胞共培養(yǎng)試驗(yàn)中（圖3h），IL-4/IL-13極化的MaoaKO巨噬細(xì)胞在抗CD3/CD28刺激下，與免疫抑制表型的減弱一致，其對(duì)野生型CD8+T細(xì)胞的抑制作用減弱（圖3i-k）。
AP損傷后胰腺巨噬細(xì)胞的表型變化
A動(dòng)物模型使用雨蛙素誘導(dǎo)，。為了研究AP后的修復(fù)/再生過(guò)程，用更高劑量的雨蛙素（100μg/kg，每小時(shí)10次）誘導(dǎo)AP，并在一周內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)收集胰腺。接受雨蛙素誘導(dǎo)***的AP小鼠在24小時(shí)后顯示出腺泡壞死和白細(xì)胞浸潤(rùn)的組織學(xué)跡象以及血清淀粉酶升高。第3天出現(xiàn)典型的腺泡-導(dǎo)管化生(ADM)結(jié)構(gòu)，第7天左右迅速恢復(fù)正常腺泡。為了檢測(cè)免疫細(xì)胞的比例，分離并分析了AP誘導(dǎo)后的胰腺白細(xì)胞。發(fā)炎的胰腺內(nèi)**豐富的免疫細(xì)胞是巨噬細(xì)胞（CD11b+F4/80+CD11c-）。流式細(xì)胞術(shù)分析的胰腺巨噬細(xì)胞數(shù)量在第1天和第3天顯著增加。根據(jù)F4/80水平，胰腺巨噬細(xì)胞從第1天到第3天逐漸成熟。巨噬細(xì)胞在組織中的積累以兩種方式發(fā)生：?jiǎn)魏思?xì)胞的募集和駐留巨噬細(xì)胞的增殖。AP急性炎癥期的大多數(shù)巨噬細(xì)胞來(lái)自單核細(xì)胞的浸潤(rùn)。 進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對(duì)基因毒性損傷的反應(yīng)。
6）MAPK1-109aa通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合MEK1來(lái)抑制MAPK1的磷酸化
為了研究MAPK1-109aa抑制GC的分子機(jī)制，我們將標(biāo)記的MAPK1-109aa質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞。在flag標(biāo)記的MAPK1-109aa免疫沉淀復(fù)合物中，潛在的相互作用蛋白被拉下(圖7a)。采用蛋白MS分析對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行鑒定。在被識(shí)別的蛋白質(zhì)列表中，豐度比較高的蛋白質(zhì)是MEK1，表明MEK1是MAPK1-109aa潛在的相互作用蛋白(圖7b，c)。此外，flag標(biāo)記的MAPK1-109aa可以與MEK1相互作用，證實(shí)了MAPK1-109aa與MEK1之間的直接相互作用(圖7d)。免疫熒光染色顯示MAPK1-109aa與MEK1共定位(圖7e)。此外，我們采用MEK1抗體免疫共沉淀，探討MAPK1-109aa對(duì)MAPK1通路的潛在調(diào)控作用。 公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)。推廣課題服務(wù)兩年
ATM對(duì)PTEN的磷酸化驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程。項(xiàng)目課題歡迎咨詢
了解流量調(diào)節(jié)內(nèi)皮基因的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄和體內(nèi)外遺傳性染色質(zhì)易訪問(wèn)性水平,我們和其他人使用批量rna或dna從池獲得ECs暴露s-flow或維使用鼠標(biāo)部分頸動(dòng)脈結(jié)扎(PCL)模型或豬動(dòng)脈。我們建立了PCL模型，并顯示在2周內(nèi)，d-flow快速誘導(dǎo)，而s-flow阻止，高膽固醇小鼠***的發(fā)展。PCL模型包括結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈(LCA)的4個(gè)遠(yuǎn)端分支中的3個(gè)以誘導(dǎo)d-血流，同時(shí)使用繼續(xù)暴露于s-血流的對(duì)側(cè)右側(cè)頸總動(dòng)脈(RCA)作為內(nèi)部控制。我們進(jìn)一步開發(fā)了一種管腔沖洗方法，使我們能夠從PCL后的lca和rca中獲得內(nèi)皮富集的rna和dna。然后用mRNA微陣列、microRNA微陣列和RNA測(cè)序(RNA-seq)分析這些聚合的整體RNA，以識(shí)別mRNA轉(zhuǎn)錄組和受ECs流量調(diào)節(jié)的microRNAs。項(xiàng)目課題歡迎咨詢
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)