6、MAO-A阻斷**免疫***-人類TAM和臨床數(shù)據(jù)相關性研究
為了探索MAO-A阻斷***的翻譯潛力，首先研究了MAO-A對人巨噬細胞極化的調控。分析體外培養(yǎng)的免疫刺激M1樣和免疫抑制M2樣人單核細胞源性巨噬細胞的基因表達特征。有趣的是，在所有檢測的免疫檢查點、免疫刺激和免疫抑制基因中，MAOA是M2樣單核來源巨噬細胞（MDMs）中表達水平比較高的基因（圖6a），提示MAO-A可能在促進人巨噬細胞免疫抑制極化中發(fā)揮作用。MDM培養(yǎng)的時間過程分析證實了巨噬細胞分化過程中MAO-A基因和蛋白表達上調，并在IL-4/IL-13誘導的免疫抑制極化后進一步上調（圖6b-d）。用苯乙肼阻斷MAO-A可***抑制IL-4/IL-13誘導的MDMs免疫抑制極化（圖6e-g）。綜上所述，這些體外數(shù)據(jù)表明MAO-A在人巨噬細胞中高表達，特別是在其免疫抑制極化期間，并且MAO-A阻斷具有重新編程人巨噬細胞極化的潛力。 英拜生物對整體實驗實施的全局把控。SNP檢測課題第三方實驗室
**調節(jié)因子通常作為蛋白質復合物中的亞基存在，并以多種方式參與轉錄調控，例如通過調節(jié)組蛋白修飾和染色質結構。哺乳動物BRG1-或brm相關的染色質重塑復合物(BAF, SWI/SNF)改變了*細胞染色質可及性景觀。該復合物是細胞周期和增殖的關鍵調控因子，也是前列腺*的驅動因子，具有多種**特異性作用。此外，頻繁發(fā)生的TMPRSS2-ERG融合基因易位可使BAF復合物重新靶向于染色質，促進前列腺*的發(fā)生?；コ獾腁TPase亞基BRG1 (SMARCA4)和BRM (SMARCA2)是復雜功能的關鍵組件。此外，AR與DNA序列特異性轉錄因子(如FOXA1、GATA2、ERG和HOXB13)之間的合作已經(jīng)建立。TF FOXA1可以結合到封閉的染色質區(qū)域，調節(jié)其染色質可及性，從而促進AR結合染色質引發(fā)PCa。泌尿課題服務價格高通量測序的后續(xù)成文服務。
VD可修復高糖誘導的HK-2細胞自噬缺陷
我們探討了pari對體外DN細胞自噬和炎癥的影響。我們用高水平葡萄糖(HG)處理HK-2細胞。如圖4A所示，在高糖條件下，LC3-II和SQSTM1的表達增加，在自噬抑制劑氯喹(CQ)作用下，LC3-II和SQSTM1的表達進一步增加。此外，我們使用tf-LC3研究自溶酶體的成熟過程。在酸性溶酶體環(huán)境中，mCherry比GFP更穩(wěn)定，自溶酶體的正常成熟以增加*紅點為特征。與此相反，GFP和mCherry斑點共定位表明自噬通量中斷，呈現(xiàn)黃色斑點。高糖誘導mCherry和GFP共定位，CQ處理更明顯。這些結果進一步表明，高糖可損害自噬通量。另一方面，與HG組相比，paricalcitol降低了LC3-II和SQSTM1的表達，增加了*紅色的斑點。為了研究缺陷性自噬是否有助于高糖誘導的炎癥反應，采用實RT-qPCR檢測促炎因子(CCL2,TNF,IL6)的mRNA水平。結果顯示CQ加重了高糖誘導的炎癥反應，而paricalcitol降低了促炎因子的表達，說明HK-2細胞高糖誘導的炎癥反應部分是由于自噬缺陷引起的，paricalcitol可以恢復自噬通量，減少炎癥反應。
結果顯示，過表達miR-337-3p和miR-137抑制了HMGA2、TGF-bII、p-Smad3和Snail的表達(圖6E和6F)。agomir-3373p/137處理和sh-MIR210HG-或sh- HMGA2處理Ishikawa和HEC-1A細胞中，b-catenin在細胞核中的分布減少，E-cadherin的表達增加。然后，我們研究了MIR210HG是否通過改變miR-337-3p/137-HMGA2軸來影響EMT進展。Western blotting和免疫熒光結果顯示，MIR210HG的下調降低了Ishikawa和HEC1A細胞中HMGA2蛋白的表達，而加入miR-337-3p/137抑制劑后，對HMGA2、b-catenin和E-cadherin表達的抑制作用被逆轉(圖6G和6H)。
MIR210HG通過miR-337-3p和miR-137促進**進展
為了確定MIR210HG下調對Ishikawa和HEC-1A細胞系惡性行為的抑制作用是否通過miR-337-3p/137介導，我們進行了功能挽救實驗。結果證實MIR210HG沉默對Ishikawa和HEC-1A細胞遷移和侵襲的惡性抑制作用被miR-337-3p/137敲低***逆轉(圖7A-7E)。這表明MIR210HG通過miR-337-3p/137調控Ishikawa和HEC-1A細胞的惡性生物學行為。 zVAD預處理也略微增加了IR后PTEN-398A細胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。
采用半定量方法對γH2AX免疫反應性進行評分(表1)。Pten+/+;MMTVneu**一般很少表達γH2AX(圖1B)。所有Pten398A/398A;MMTVneu樣本均為γH2AX強陽性，表明更高水平的基因組不穩(wěn)定性(圖1B, C)。我們通過對**樣本的western blot分析證實了這些結果，結果顯示Pten398A/398A;MMTVneu**比Pten+/+;MMTVneu**表達更高水平的γH2AX(圖1D, E)。通過對Ki-67進行免疫組化來評估**的增殖指數(shù)，Ki-67是常規(guī)病理中***使用的標志物。兩種基因型Pten+/+**的Ki67免疫反應性無***差異;MMTVneu(補充圖2C, D)?？傊?，Pten398A突變加速mmtv神經(jīng)驅動的**發(fā)生，這與更高的基因組不穩(wěn)定性有關，但在細胞增殖中沒有明顯的改變。IGF-1信號在Pex誘導的肝纖維化中起重要作用。細胞功能課題基礎實驗外包
ATM對PTEN的磷酸化驅動細胞周期進程。SNP檢測課題第三方實驗室
促進miR-101-3p的表達抑制**細胞的生長并增強凋亡
為了進一步探頭miR-101-3p對**細胞生物學功能的影響，構建了miR-101-3p過表達和miR-101-3p表達抑制的細胞系，如圖2A所示。隨后，CCK8，流式和WB等實驗證實，過表達miR-101-3p會抑制細胞的增殖和生長，并抑制Ki67和PCNA的表達，但會增強細胞的凋亡比例，以及增加cleaved-Caspase3的表達減少Bcl-2的表達。相反地，抑制miR-101-3p的表達會促進**細胞的增殖并減少細胞凋亡。以上結果表明miR-101-3p在**增殖和凋亡中發(fā)揮了重要作用。 SNP檢測課題第三方實驗室
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗