1）SsD在AML中表現(xiàn)出抗增殖活性
為了闡明SsD在白血病中的藥理作用，我們在10個(gè)人白血病細(xì)胞系中探討了一系列SsD濃度的影響。我們發(fā)現(xiàn)SsD在大多數(shù)白血病細(xì)胞系中以劑量依賴的方式抑制細(xì)胞活力(圖1A)。為了進(jìn)一步研究SsD對白血病的抑制作用，我們在4種白血病細(xì)胞系NB4、kas1、MV4-11和U937(SsD敏感性排名前4位的細(xì)胞)進(jìn)行了集落實(shí)驗(yàn)。與細(xì)胞活力結(jié)果相似，SsD***抑制了所測細(xì)胞系的集落數(shù)量和大小(圖1B-E)。有趣的是，SsD對細(xì)胞增殖和活力的抑制可能是由于細(xì)胞周期阻滯在G1期和NB4細(xì)胞凋亡增加(圖1F-G)。 也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。模型建造課題基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外包
六、THDF1通過FZD7調(diào)控Wnt/b-catenin通路
A，典型Wnt/b-catenin通路示意圖。B, YTHDF1敲低或過表達(dá)MGC-803和HGC-27細(xì)胞中總(B -catenin)和非磷酸化(Ser33/37/Thr41, activated B -catenin) B -catenin的蛋白水平。C, IF染色分析YTHDF1敲低、過表達(dá)或突變過表達(dá)的MGC-803和HGC-27細(xì)胞中總(紅色)和***的(綠色) b-catenin的亞細(xì)胞定位。D，免疫印跡分析b-catenin靶基因、HMGA2、cyclin D、CDC25A、COX2、SOX9、VEGFA在YTHDF1敲低、過表達(dá)或突變過表達(dá)MGC-803和HGC-27細(xì)胞中的表達(dá)。E，定量分析YTHDF1敲低和過表達(dá)MGC- 803和HGC-27細(xì)胞中b-catenin靶基因的RNA水平(n =3)。 神經(jīng)元損傷課題分子生物學(xué)根客戶的研究方向查閱相關(guān)文獻(xiàn)。
揭示轉(zhuǎn)錄因子如何隨著時(shí)間的推移在DNA、RNA和蛋白質(zhì)水平上調(diào)節(jié)其靶標(biāo)，對于定義基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(GRN)和分配正常和疾病狀態(tài)的機(jī)制至關(guān)重要。RNA-seq是一種使用已建立的分析階段測量基因調(diào)控的標(biāo)準(zhǔn)方法。然而，目前可用的用于解釋有序基因組數(shù)據(jù)（在時(shí)間或空間上）的管道方法都沒有使用時(shí)間序列模型來分配GRN內(nèi)的因果關(guān)系。此外，也需要將有序的RNA-seq數(shù)據(jù)與蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合數(shù)據(jù)相結(jié)合以區(qū)分直接與間接相互作用的方法。TIMEOR是***個(gè)基于Web的自適應(yīng)時(shí)間序列多組學(xué)管道方法，它可以推斷基因調(diào)控事件之間的關(guān)系。TIMEOR通過利用時(shí)間序列RNA-seq、基序分析、蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合數(shù)據(jù)和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，解決了對確定因果調(diào)節(jié)機(jī)制網(wǎng)絡(luò)的方法的關(guān)鍵需求。一、上傳數(shù)據(jù)可以上傳原始的fast文件，也可以上傳時(shí)序count表達(dá)文件。按照數(shù)據(jù)情況填寫以下6個(gè)問題，然后點(diǎn)擊“Run”開始進(jìn)行質(zhì)控二、初級分析數(shù)據(jù)質(zhì)控合格后，進(jìn)行初級分析，包括：差異表達(dá)量計(jì)算、基因簇分析。差異計(jì)算方法包括ImpulseDE2、NextmaSigPro、DESeq2，可以根據(jù)實(shí)際情況自由選擇。三、次級分析次級分析用于評估豐富度、因子結(jié)合和時(shí)間關(guān)系。我們可以選擇不同類型的分析來分析初級分析中獲得的基因簇。
OARSI分級(圖6E)進(jìn)一步提示小鼠SHAM+載體和DMM+circPde4b組軟骨降解較少，而DMM+載體和DMM+circPde4b+RIC8A組軟骨降解情況相反。熱板試驗(yàn)、膝關(guān)節(jié)伸展試驗(yàn)和電擊刺激跑步機(jī)試驗(yàn)顯示，DMM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組的不適和膝關(guān)節(jié)疼痛多于SHAM+載體組和DMM+circPde4b組(圖6F)。小鼠膝關(guān)節(jié)的三維微CT重建顯示，DMM+NC組和DMM+circPde4b+RIC8A組比SHAM+載體和DMM+circPde4b組有更多的骨贅(圖6G)。此外，四組中RIC8A和p-p38標(biāo)記的免疫組化染色顯示過表達(dá)circPde4b下調(diào)了RIC8A和p-p38的表達(dá)，從而抑制了DMM手術(shù)引起的OA進(jìn)展(圖6H，I)。綜上所述，在小鼠中，circPde4b和RIC8A參與了OA的發(fā)病機(jī)制（圖6J）。
結(jié)論：我們的研究描述了一種新的circRNA在OA中的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)circPDE4B可以作為蛋白質(zhì)降解的支架，在OA的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在臨床前動(dòng)物模型中，CircPDE4B被發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝，阻止軟骨基質(zhì)的形成，證實(shí)了其對OA發(fā)生的潛在***作用。機(jī)制上，circPDE4B可作為促進(jìn)RIC8A-MID1結(jié)合的支架，降低RIC8A依賴的p38信號通路的***，從而調(diào)節(jié)OA的進(jìn)展。 上海英拜提供課題外包服務(wù)。
MiR-101-3p和MiR-423-5p在體外MB細(xì)胞中作為**抑制因子發(fā)揮作用
我們使用CCK-8分析了miR-101-3p和miR-423-5p對MB細(xì)胞增殖能力的影響。與對照組相比，Daoy和D283Med細(xì)胞中miR-101-3p或miR-423-5p的過表達(dá)導(dǎo)致**細(xì)胞增殖率降低。通過CCK-8分析，我們進(jìn)一步評估了添加來自MB患者血漿的外泌體對Daoy和D283Med細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明，兩種細(xì)胞系的**細(xì)胞的增殖能力均受到***抑制。接下來，我們研究了miR-101-3p和miR-423-5p對細(xì)胞凋亡的影響。與陰性對照組相比，任一miRNA的過表達(dá)都導(dǎo)致Daoy和D283Med細(xì)胞的凋亡率***增加。此外，miR-101-3p或miR-423-5p的過表達(dá)抑制Daoy細(xì)胞的侵襲和遷移能力。綜上所述，這些數(shù)據(jù)證實(shí)miR-101-3p和miR-423-5p在MB細(xì)胞中均發(fā)揮抗**作用，并且任一miRNA的上調(diào)均可抑制MB細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，同時(shí)也可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配肝損傷課題整包服務(wù)
表達(dá)PTEN- 398A的細(xì)胞中上調(diào)的基因與G1/S檢查點(diǎn)的***有關(guān)。模型建造課題基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外包
MAD2和p31conmet的結(jié)構(gòu)相似性突出了RIT1的潛在結(jié)合競爭。因此，我們使用了競爭結(jié)合試驗(yàn)，其中滴定MAD2野生型(WT)或R133E/Q134A(RQ)，一個(gè)二聚體和p31結(jié)合缺陷的突變體，未能抑制rit1-p31conmet結(jié)合(圖1E)。由于RIT1g結(jié)構(gòu)域與其他Ras-GTPases，特別是它的鄰域RIT2之間的相似性，假設(shè)RIT1s的n端或c端延伸可能介導(dǎo)與MAD2和p31conmet的相互作用(圖1F)。隨后分析了RIT1N-或c-末端缺失突變體，證明了c-末端結(jié)構(gòu)域?qū)τ贛AD2和p31conmet星結(jié)合是必要和充分的(圖1G、1H和S1J)。模型建造課題基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外包
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)