3）RIC8A與circPDE4B相互作用，參與OA
為了鑒別與circPDE4B相互作用的蛋白，我們采用RPD-MS(圖3A)，共鑒定出112個與circPDE4B相互作用的蛋白(圖3B)，確定RIC8A。HCs中的RNA-蛋白共定位證實了RIC8A和circPDE4B之間的相互作用(圖3C)。RPD實驗表明，體外線性轉(zhuǎn)錄的circPDE4B能拉下重組RIC8A(圖3D)。然后，我們使用catRAPID工具預(yù)測circPDE4B和RIC8A的相互作用區(qū)域(圖3E)。為了識別預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)，我們將FLcircPDE4B截短為3個片段。據(jù)預(yù)測，RIP結(jié)果顯示有FL和S3被RIC8A拉下(圖3F)。有綜合來看，這些結(jié)果表明circPDE4B在HCs中與RIC8A相互作用。我們進(jìn)一步的研究表明，circPDE4B調(diào)控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩(wěn)定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對照(NC)和sh-circPDE4B的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩(wěn)定性。經(jīng)PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過表達(dá)和下調(diào)細(xì)胞中均未發(fā)生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過蛋白酶體活性調(diào)節(jié)RIC8A。無論內(nèi)源性還是外源性RIC8A,RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過表達(dá)circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導(dǎo)的RIC8A的降解和周轉(zhuǎn)。 Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。糖尿病課題技術(shù)指導(dǎo)
編碼PI3Kαp110α亞基的PIK3CA在多達(dá)40%的乳腺*中發(fā)生突變，**常見的是雌***受體陽性(ER+)**。突變的PIK3CA在校正ER陽性等有利風(fēng)險變量時并不是預(yù)后的**標(biāo)記物，但它是改善晚期ER+乳腺*內(nèi)分泌和PI3K聯(lián)合***應(yīng)答的預(yù)測生物標(biāo)記物。有趣的是，與PTEN等其他PI3K通路改變的**相比，pikca突變ER+乳腺*顯示出極少的AKT***和對AKT信號的依賴。
NPP4B抑制AKT信號，并在三陰性(ER/PR/HER2)和基底樣乳腺*中表現(xiàn)出**抑制活性。此外，INPP4B蛋白在黑色素瘤、卵巢*和前列腺*中表達(dá)減少。在小鼠模型中，Inpp4b消融與Tp53/Brca1缺失共同增加了乳腺**外顯率，并與Pten雜合子缺失共同促進(jìn)體內(nèi)甲狀腺**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。值得注意的是，INPP4B通過降解PI(3,4)P2，抑制早期核內(nèi)體的局部AKT2信號通路和EGFR降解。 自噬醫(yī)學(xué)相關(guān)課題地區(qū)科學(xué)基金英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。
造血干細(xì)胞早期命運(yùn)決定的機(jī)制在很大程度上尚不清楚。據(jù)推測，譜系特異性轉(zhuǎn)錄因子(TFs)在噪聲閾值以上的隨機(jī)表達(dá)可以鎖定一個細(xì)胞進(jìn)入一個獨(dú)特的細(xì)胞命運(yùn)。與此相一致的是，在多能造血細(xì)胞中觀察到與拮抗譜系相關(guān)的基因的共表達(dá)，包括關(guān)鍵的TFs，這表明在多能細(xì)胞室中存在一些細(xì)胞亞群，這些亞群允許細(xì)胞在譜系承諾之前的命運(yùn)相反，這一現(xiàn)象被稱為啟動。**近，人類hspc的單細(xì)胞RNA測序(scRNA-seq)引入了一個不同的啟動概念。對成人骨髓和胎兒肝臟造血的研究已經(jīng)確定了造血干細(xì)胞和多能祖細(xì)胞(MPPs)的亞群，這些亞群具有協(xié)調(diào)表達(dá)的標(biāo)記基因，特異于不同的單胎分化程序，并沿著所有分化分支逐漸增加。有一些跡象表明，星狀細(xì)胞間室的譜系啟動可能不僅發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，也發(fā)生在表觀遺傳水平。來自成人骨髓表型hspc的轉(zhuǎn)座酶可及染色質(zhì)測序(scATAC-seq)的單細(xì)胞分析數(shù)據(jù)顯示，表型MPPs在染色質(zhì)可及性方面存在差異。
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4和6(CDK4/6)的藥理學(xué)抑制劑是***受體陽性乳腺*的獲批***藥物，目前正在其他**類型的數(shù)百項臨床試驗中進(jìn)行評價。這些抑制劑的臨床成功在很大程度上歸因于定義明確的**內(nèi)在細(xì)胞抑制機(jī)制，而其作為免疫調(diào)節(jié)劑的新作用知之甚少。本研究利用整合的表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)分析，證明了CDK4/6抑制劑在促進(jìn)免疫T細(xì)胞記憶的表型和功能獲得中的新作用。本文的機(jī)制見解拓寬了CDK4/6抑制劑作為增強(qiáng)抗**T細(xì)胞免疫的臨床工具的前瞻性效用。本研究于2 021年5月14日發(fā)表在《Cancer Discovery》IF:29.497期刊上。高通量測序后續(xù)的機(jī)制實驗。
VDR***STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠AMPK.
為了進(jìn)一步證實VD-VDR對高糖環(huán)境下AMPK***的影響，我們檢測了STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠AMPK-ULK1的磷酸化水平。如圖8所示，STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠PRKAA1和ULK1磷酸化水平降低，KO+STZ小鼠的這種變化更明顯。此外，paricalcitol或VDR過表達(dá)促進(jìn)PRKAA1和ULK1磷酸化，盡管WT+STZ組和OE+STZ組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。我們還通過免疫熒光染色檢測了p-PRKAA1的水平，其變化趨勢與蛋白印跡相似。結(jié)合圖3E的結(jié)果，我們推測在STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎臟中，VDR需要VD***才能有效磷酸化PRKAA1，然后調(diào)節(jié)自噬。綜上所述，VD-VDR通過***AMPK-ULK1通路恢復(fù)了stz誘導(dǎo)的糖尿病小鼠腎臟缺陷的自噬。 動物建模模型實驗的整體服務(wù)?？臻g轉(zhuǎn)錄組學(xué)課題服務(wù)兩年
Pex調(diào)節(jié)HSC的ECM分泌。糖尿病課題技術(shù)指導(dǎo)
METTL3促進(jìn)小鼠ESCC細(xì)胞增殖和**生長
為了確定METTL3在細(xì)胞增殖中的作用，通過轉(zhuǎn)染METTL3shRNAs來去除ESCC細(xì)胞中的METTL3。發(fā)現(xiàn)METTL3缺失減少了這些細(xì)胞的增殖和集落數(shù)。通過在KYSE180和KYSE450中重組表達(dá)METTL3，這些抑制作用被消除。
接下來在KYSE450細(xì)胞中建立四環(huán)素誘導(dǎo)的METTL3表達(dá)。四環(huán)素***以劑量依賴的方式增加METTL3的表達(dá)，相應(yīng)地引起細(xì)胞增殖水平的增加和集落形成水平的增加。與野生型（WT）METTL3的過表達(dá)相比，在ESCC細(xì)胞中METTL3非活性突變體的過表達(dá)未能促進(jìn)細(xì)胞生長和增殖。這些結(jié)果有力地表明，METTL3促進(jìn)**細(xì)胞增殖依賴于其表達(dá)水平和完整的活性。
為了確定METTL3在小鼠**生長中的作用，將KYSE180或KYSE450細(xì)胞皮下注射到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)METTL3缺失降低了**大小、體積和重量。與表達(dá)METTL3非活性突變體引起的有限效應(yīng)相比，WTMETTL3過表達(dá)極大地促進(jìn)了**生長。這些結(jié)果表明METTL3的表達(dá)有助于小鼠**的生長。 糖尿病課題技術(shù)指導(dǎo)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗