5）USP35通過(guò)靶向FPN調(diào)節(jié)鐵下垂
我們接下來(lái)試圖闡明USP35對(duì)鐵死亡的可能機(jī)制。負(fù)責(zé)鐵輸入的蛋白質(zhì)(Tf和TfR)沒有改變；然而，哺乳動(dòng)物中關(guān)鍵的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FPN在USP35缺乏的細(xì)胞中減少，而在過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中增加(圖6A-C)。在USP35過(guò)表達(dá)的*細(xì)胞中，細(xì)胞膜中的FPN蛋白豐度增加，但由于USP35的敲除而降低(圖6D)。與分子變化一致，在USP35沉默或過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中，胱氨酸攝取也不受影響(圖6E)。為了進(jìn)一步證實(shí)FPN的參與，H460和H1299細(xì)胞分別預(yù)***shFPN以敲低內(nèi)源性FPN表達(dá)。USP35過(guò)表達(dá)在鐵刺激時(shí)降低了肺*細(xì)胞內(nèi)LIP和Fe2+，但在FPN缺陷細(xì)胞中未能做到這一點(diǎn)(圖6F)。 異丁酸含量與BMS評(píng)分/ FITC -葡聚糖滲透性之間的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。代謝組學(xué)標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
三、RIT1及時(shí)調(diào)節(jié)后期進(jìn)入和染色體分離保真度
MAD2和p31conmet調(diào)節(jié)SAC的持續(xù)時(shí)間，反過(guò)來(lái)，也調(diào)節(jié)有絲分裂的持續(xù)時(shí)間。這促使我們研究RIT1是否通過(guò)與MAD2和p31conmet的直接關(guān)聯(lián)來(lái)影響SAC。通過(guò)RNAi或crispr介導(dǎo)的敲除去除RIT1可延長(zhǎng)有絲分裂進(jìn)程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯(cuò)誤的發(fā)生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對(duì)有絲分裂的及時(shí)進(jìn)展至關(guān)重要，而且RIT1蛋白水平的失調(diào)也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達(dá)的缺失加速了異步生長(zhǎng)細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)程，這一效應(yīng)依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過(guò)表達(dá)部分覆蓋了藥物誘導(dǎo)的SAC反應(yīng)(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達(dá)以依賴MAD2-和p31come結(jié)合的方式***增加了有絲分裂錯(cuò)誤的發(fā)生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達(dá)RIT1M90I的細(xì)胞中非整倍體率增加，但在表達(dá)不能結(jié)合MAD2/p31conmet的突變體的細(xì)胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結(jié)果表明，RIT1水平的增加會(huì)導(dǎo)致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。 河南標(biāo)書國(guó)家自然科學(xué)基金FMT處理導(dǎo)致緊密連接蛋白表達(dá)上調(diào)并促進(jìn)SCI后的腸道屏障完整性的維持。
LINC00926通過(guò)***乳腺*細(xì)胞中PGK1的表達(dá)來(lái)***糖酵解由于PGK1是一種關(guān)鍵的糖酵解酶，而LINC00926被鑒定為負(fù)調(diào)控PGK1的lncRNA，我們想知道需氧糖酵解是否在LINC00926介導(dǎo)的乳腺*細(xì)胞增殖***中發(fā)揮作用。我們測(cè)試了LINC00926對(duì)葡萄糖攝取、乳酸生成和ATP生成的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，LINC00926降低了葡萄糖攝取、乳酸生成和ATP生成(圖3A)。在LINC00926轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，PGK1的表達(dá)逆轉(zhuǎn)了這些作用。LINC00926還顯示出細(xì)胞外酸化率下降(圖3B和3C)。PGK1在LINC00926轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中重新表達(dá)挽救了這些效果。在PGK1敲低的MDA-MB-231或MCF-7細(xì)胞中敲低LINC00926對(duì)糖酵解表型沒有影響(圖3D-3F)，表明LINC00926通過(guò)PGK1***糖酵解表型。綜上所述，LINC00926通過(guò)***乳腺*細(xì)胞中PGK1的表達(dá)來(lái)***糖酵解
m6A酶系統(tǒng)
METTL3是早先被鑒定為結(jié)合SAM的組件，其缺失引起小鼠胚胎干細(xì)胞、Hela細(xì)胞和HepG2 細(xì)胞中m6Apeaks的減少。METTL3及其同源蛋白METTL14定位在富含剪切因子的細(xì)胞核內(nèi)亞細(xì)胞器－核小斑（Nuclear speckle）上，顯示ｍ６Ａ修飾可能和ＲＮＡ的剪切加工相關(guān)。WTAP與METTL3–METTL14 二聚體相互作用，并共定位于核小斑，影響甲基化效率，參與mRNA剪。而KIAA1429作為候選的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的新亞基，是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為***個(gè)被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過(guò)程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長(zhǎng)遲緩相關(guān)， 揭示m6A可能對(duì)這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。 FMT處理***增加了SCI小鼠腸道菌群的豐富度。
3、CDK4/6抑制劑促進(jìn)記憶形成通過(guò)RB介導(dǎo)的G1停滯
為了確定驅(qū)動(dòng)CDK4/6i誘導(dǎo)的記憶，對(duì)調(diào)節(jié)記憶標(biāo)記的基因CD62L(SELL)，進(jìn)行了全基因組CRISPR/Cas9篩選，用基因組范圍的sgRNA文庫(kù)轉(zhuǎn)導(dǎo)表達(dá)Cas9的JurkatT細(xì)胞（CDK4/6抑制后上調(diào)CD62L），然后用CDK4/6i處理，并對(duì)未能上調(diào)CD62L的細(xì)胞進(jìn)行熒光***細(xì)胞分選(Fig.3A)。對(duì)分選群體進(jìn)行測(cè)序發(fā)現(xiàn)，靶向RB轉(zhuǎn)錄共抑制因子1(RB1)的sgRNA*在處理?xiàng)l件下***富集(Fig.3B)，暗示RB是CDK4/6i誘導(dǎo)CD62L上調(diào)所必須的。隨后對(duì)急性(2h)暴露于CDK4/6i后的Jurkat細(xì)胞和活化的原代小鼠CD8+T細(xì)胞進(jìn)行了整體磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析(Fig.3C)。 NSCLC中circNDUFB2下調(diào).甘肅標(biāo)書細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
circNDUFB2作為一個(gè)支架增強(qiáng)IGF2BP蛋白與TRIM25的結(jié)合。代謝組學(xué)標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
CircACTN4促進(jìn)體內(nèi)異種移植**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移
為了評(píng)估circACTN4在體內(nèi)的致*作用，通過(guò)皮下注射和尾靜脈注射在裸鼠中建立人BC細(xì)胞**模型。用過(guò)表達(dá) circACTN4 慢病毒或 circACTN4 shRNA 慢病毒及其對(duì)照***的 MCF-7 細(xì)胞接種雌性裸鼠。結(jié)果表明，circACTN4過(guò)表達(dá)組異種移植**的體積和重量明顯大于對(duì)照組，而circACTN4敲低顯著抑制了**生長(zhǎng)。與對(duì)照組相比，circACTN4的上調(diào)明顯增加了轉(zhuǎn)移性肺結(jié)節(jié)的數(shù)量，而circACTN4沉默顯著抑制了自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移，侵襲性**細(xì)胞較少。此外，circACTN4 的過(guò)表達(dá)可以顯著促進(jìn)**血管生成，而 circACTN4 敲低顯著降低**微血管密度。WB結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)或沉默circACTN4組的異種移植**組織中MYC的蛋白質(zhì)水平分別顯著增加或減少。 代謝組學(xué)標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
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5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)