為了探究MIR210HG是否參與了一個新的MIR210HG- miRNA -HMGA2調控網(wǎng)絡，我們使用TargetScan、miRanda、CLIP-Seq和miRDB生物信息學數(shù)據(jù)庫來預測與HMGA2結合的mirna(圖3F)。選擇3個軟件程序分析交叉處的miRNAs作為候選miRNAs。通過將野生型雙熒光素酶載體介導的HMGA2構建物共轉染HEK293T細胞，共鑒定和篩選了110個miRNAs。轉染后，23個miRNA轉染細胞的熒光素酶活性***降低(圖3G)。在上述23種miRNAs中，轉染miR-3373p、miR-137、let-7c-5p和miR-98-5p時，熒光素酶活性***降低，其中轉染miR-337-3p和miR-137時，熒光素酶活性降低**多。利用生物信息學數(shù)據(jù)庫TargetScan預測miR-337-3p和miR-137中與HMGA2結合的位點。雙熒光素酶基因報告基因檢測結果顯示，miR-337-3p和miR-137在其預測的結合位點上結合HMGA2(圖3H)。qPCR結果顯示，miR-337-3p和miR-137負調控HMGA2的表達(圖3I)。采用Pearson’s秩相關法分析MIR210HG與HMGA2表達的相關性，發(fā)現(xiàn)HMGA2的表達與MIR210HG呈正相關(圖3 J和K)。這些結果表明MIR210HG可能參與了新的MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2調控網(wǎng)絡。阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配青海課題實驗可參觀
QKI促進NSCLC細胞中circNDUFB2的生物發(fā)生
circNDUFB2和NDUFB2均來自NDUFB2 pre-mRNA，而NDUFB2 mRNA在NSCLC中略有上調。因此，推測circNDUFB2的下調在轉錄后發(fā)生。我們在circNDUFB2中搜索與潛在QRE匹配的序列。接下來進行了RIP分析，確認QKI確實與NDUFB2 pre-mRNA中的假定QRE結合。在NSCLC細胞中QKI過表達可能會上調circNDUFB2。 這些數(shù)據(jù)表明，QKI與NDUFB2 pre-mRNA的circNDUFB2形成外顯子側翼的內含子結合，從而促進circNDUFB2的形成。 河南課題動物模型構建醫(yī)學整體課題外包服務。
與HuR的RRM3結合，中斷HuR-β-actinmRNA相互作用，抑制β-actin表達，抑制OPC遷移
為闡明lnc-PMIF如何與HuR相互作用調節(jié)β-actin表達和OPC遷移，首先通過生物信息學分析預測了lnc-PMIF的二級結構，并合成生物素化的全長lnc-PMIF（WT）和截短的lnc-PMIF突變體，分別為突變體A1（無5’莖環(huán)的正義）、突變體A2（有中心莖環(huán)和3’莖環(huán)的正義）和突變體A3（*有3’莖環(huán)的正義1100-1455bp），轉染MC3T3-E1細胞，并進行標記RNA鏈霉親和素下拉試驗。蛋白免疫印跡分析顯示，HuR存在于轉染W(wǎng)Tlnc-PMIF、截短lnc-PMIF突變體A1或截短lnc-PMIF突變體A2的細胞的下拉部分中，但在轉染截短lnc-PMIF突變體A3的細胞的下拉部分中不存在。這些數(shù)據(jù)表明，lnc-PMIF的中心莖環(huán)足以實現(xiàn)lnc-PMIF和HuR之間的相互作用。
為了驗證tRFs&tiRNA-Seq數(shù)據(jù)，作者檢測了91對PTC組織和*旁組織中tRFs&tiRNA的表達，其中，tiRNA-Gly在人類PTC組織中的表達水平比較高，并***高于*旁組織（圖1F-G）。WB顯示，tiRNA-Gly在PTC**中蛋白表達***高于*旁，但是tRNA-Gly的表達在*和*旁中無***差異（圖1H）?？傊?，tiRNA-Gly可能在PTC的進展中起致*作用。
在小鼠模型中，tiRNA-Gly調節(jié)PTC細胞的增殖和遷移，并影響**生長
首先檢測了tiRNA-Gly在3株PTC細胞系中的表達，如圖2A所示，K1細胞系中tiRNA-Gly的表達***低于BCPAP和TPC-1細胞系。因此，對于功能獲得性實驗，合成帶有5’磷酸末端的tiRNA-Gly轉染至K1細胞系（圖2B）。結果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，tiRNA-Gly***促進K1細胞的增殖和遷移（圖2C-D）。對于功能缺失實驗，在BCPAP和TPC-1細胞系中轉染siRNA干擾tiRNA-Gly的表達，結果顯示細胞的增殖和遷移都***下降（圖2E-G）。體內實驗得出了類似的結果，干擾tiRNA-Gly表達導致**體積減小，Ki67表達下降?？傊?，體內體外實驗都表明tiRNA-Gly是PTC的惡性因子。 可以上傳原始的fast文件。
3）IGF-1信號在Pex誘導的HSC活化和肝纖維化中至關重要
為了進一步探索Pex調控HSC行為的機制，我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達譜(圖3A)。在差異表達基因中，我們觀察到41個重疊的上調基因在Pan02exo組與Npex組和KPCexo組與Npex組之間存在部分交集(圖3B)。主要涉及的基因參與細胞外空間、細胞外區(qū)域和ECM(圖3C)，表明Pex調節(jié)HSC的ECM分泌。此外，GO和KEGG通路分析顯示，IGF-1及其下游PI3K/AKT是受Pex影響的排名比較高的信號通路(圖3D，E)。westernblot分析支持了Pex***增加HSC中IGF-1R、IRS-1和AKT磷酸化的發(fā)現(xiàn)(圖3F)。當使用IGF-1R抑制劑時，Pex誘導的p-IGF-1R、p-IRS-1和p-AKT的上調被阻斷(圖3G)?；谶@些結果，我們推測IGF-1信號可能是介導Pex依賴的HSC活化的關鍵因素。與預期的一樣，IGF-1R抑制劑抑制了Pex誘導的HSC的活化、增殖和遷移(圖4A-D)。此外，IGF-1R抑制劑逆轉了Pex誘導的HSC中ECM的產(chǎn)生(圖4E)。我們的體內實驗表明，IGF-1R抑制劑可以阻斷Pex誘導的肝纖維化(圖4F-I)。這些數(shù)據(jù)表明IGF-1信號在Pex誘導的肝纖維化中起重要作用。 完善的實驗平臺提供可視化的建模服務。甘肅課題贈送提供技術路線
英拜生物對整體實驗實施的全局把控。青海課題實驗可參觀
數(shù)據(jù)組織和訪問
LncExpDB 的中心實體是 lncRNA 基因，每個 lncRNA 基因都有一個對應的頁面，由兩個主要部分組成，即基本信息（例如基因符號、基因組上下文、長度、外顯子數(shù)、分類和對應的轉錄本信息）和表達譜。對于每個 lncRNA，LncExpDB 在所有收集的條件下分析其基因表達譜，并以交互方式可視化其表達譜。它以結構化的方式組織所有相關數(shù)據(jù)，以促進基于基因、數(shù)據(jù)集和基于上下文的數(shù)據(jù)瀏覽/搜索。它可以在一頁中可視化特定 lncRNA 的各種表達譜，促進對特征基因及其相關共表達網(wǎng)絡的探索，并提供有用的功能來捕獲不同生物條件下的表達情況。 青海課題實驗可參觀
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗