4、CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移隨后，作者在體內(nèi)進一步驗證CLF1的功能。結(jié)果如圖3所以，敲除CFL1后***降低了HCC細胞的**體積和**，并減少了肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量。IHC表明CLF1的敲除也導(dǎo)致EMT相關(guān)蛋白的抑制?？傊?，CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移。
5、CFL1是HIF-1α在HCC細胞中的下游靶基因為了闡明低氧對HCC中CFL1表達的影響，將HCCLM3和Hep3B細胞在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1的表達升高，但是當HIF-1α敲除后，低氧誘導(dǎo)并不能提高CFL1的表達，并且使用HIF-1α的抑制劑處理HCCLM3和Hep3B細胞，也能降低因低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1表達升高（圖4A-F）。ChIP-PCR檢測進一步發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和HIF-1β與HCC細胞CFL1啟動子中的HRE直接結(jié)合（圖4G）。在低氧條件下，轉(zhuǎn)染HRE熒光素酶質(zhì)粒或CFL1啟動子-熒光素酶質(zhì)粒的HEK293T細胞中熒光素酶報告基因活性升高（圖4H）。 Tempol減輕PCOS大鼠腸道微生物失調(diào).江蘇標書國家自然科學(xué)基金
關(guān)聯(lián)研究已將血液來源的microRNA(miRNA)的改變與結(jié)直腸*(CRC)聯(lián)系起來。miRNA譜可能在CRC進展過程中多樣化，并在血液中反映CRC進展水平。但是，尚無研究評估不同CRC階段血液中miRNA的變化。本研究對來自不同階段的健康供體、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸憩室炎和CRC患者（UICCstagesI/II,III,andIV）的80份血液樣本中的2,549種miRNA的譜進行了基于微陣列的比較。接下來通過RT-PCR進行確認，并對另外36份血液樣本中miRNA進行驗證。與健康對照相比，有179個CRC相關(guān)miRNA的豐度差異。只有三個（miR-1225-5p、miR-1207-5p和miR-4459）在所有CRC階段表現(xiàn)出增加的水平。對3個miRNA進行通路分析，發(fā)現(xiàn)了miRNAs以各種方式對幾種**相關(guān)通路起作用。這項研究為改進CRC篩查的生物標志物發(fā)現(xiàn)提供了線索，是***項提供CRC血液表達譜的研究，******評估了不同CRC不同階段血液中miRNA的變化。這也為其他疾病biomarker的研究提供了新的思路。cancer免疫標書實驗外包circRNAs在腎細胞*(RCC)中的表達模式和生物學(xué)功能.
IGF2BP結(jié)合區(qū)域包含“ GGAC” N6-甲基腺苷（m6A）**基序。IGF2BPs是m6A結(jié)合蛋白。為了探索circRNA和IGF2BP之間的相互作用是否通過m6A依賴性的方式進行調(diào)節(jié)，對circNDUFB2進行了MeRIP，并觀察到circNDUFB2中m6A的顯著富集。敲低METTL3和METTL14顯著降低了circNDUFB2中m6A修飾的水平，并且沒有改變circNDUFB2的水平。METTL3 / 14敲低顯著削弱了circNDUFB2和IGF2BP之間的相互作用。 這些數(shù)據(jù)表明，circNDUFB2以依賴于m6A的方式與三個IGF2BP物理相互作用。
4、miR-208b直接靶向和抑制CD4+T細胞中PDCD4的表達
為了進一步探究miR-208b的分子機制，探究了其下游靶基因機制，使用生信預(yù)測了其靶基因，**終挑選到PDCD4（圖5A）。熒光素酶進一步證實了miR-208b和PDCD4之間的結(jié)合（圖5C-D）。研究發(fā)現(xiàn)，T細胞中PDCD4的表達在SW480外泌體處理組***下降，而這個抑制作用在SW480-OXA組更加明顯，PCD表達在miR-208b缺失組則***升高（圖5E）。此外，加入miR-208bmimics后，PDCD4蛋白***降低，而抑制miR-208b后，PDCD4蛋白的表達相對增強,此外，PDCD4在mRNA水平的表達沒有明顯變化（圖5F）。然后，評估了miR-208b對CD4+T細胞擴增的影響。研究表明，轉(zhuǎn)染miR-208bmimics***增強了Treg的擴增，而抑制miR-208b水平則抑制了Treg的擴增（圖5G-H）。這些結(jié)果表明miR-208b直接靶向抑制PDCD4的表達，導(dǎo)致Treg分化。 CircRNA在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的行為和機制尚未見報道.
同時，CD8T細胞和M0巨噬細胞顯示出**強的競爭作用。對免疫浸潤細胞進行PCA分析，結(jié)果表明，免疫浸潤可以區(qū)分晚期斑塊和早期斑塊。4.GSEA分析將所有表達數(shù)據(jù)分為早期和晚期斑塊組，然后進行GSEA分析。結(jié)果顯示與免疫細胞和免疫相關(guān)功能高度相關(guān)5.差異表達分析使用R軟件limma包分析早起、晚期斑快差異基因（log2(foldchange)>1，adjustedpvalue<.05），pheatmap包進行結(jié)果喲可視化。6.差異基因GO、Pathway富集分析使用ClusterProfiler包對差異進進行GO、Pathway分析。使用ggplot2包進行結(jié)果可視化。腸道微生物發(fā)酵的某些**終產(chǎn)物可進入血液影響宿主***系統(tǒng)的生理功能。四川標書省自然科學(xué)基金
E2F1是一種有效的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子.江蘇標書國家自然科學(xué)基金
3）DRD2重新編碼MφM1表型，下調(diào)IL-6和IL-10
據(jù)報道，DRD2可調(diào)節(jié)M1的極化。結(jié)果顯示，在DRD2表達水平較高的BrCa組織中，M1Mφ的浸潤增加，M2Mφ的浸潤減少(圖3A)。為進一步研究DRD2對TAMs的調(diào)控作用，構(gòu)建了BrCa與Mφ共培養(yǎng)體系。當Mφ與表達DRD2的BrCa細胞共培養(yǎng)時，qRT-PCR顯示M1表型標記增加，M2Mφ標記下調(diào)(圖3B-C)。qRT-PCR也證實了載體轉(zhuǎn)染的BrCa細胞將Mφ調(diào)節(jié)為M2型(圖3C)[12]。WB結(jié)果顯示，表達DRD2的BrCa細胞上調(diào)M1標記iNOS，下調(diào)M2標記CD206(圖3D)。IF染色顯示，與表達DRD2的**細胞共培養(yǎng)后，Mφ表現(xiàn)為M1表型(圖3E)。上述結(jié)果表明，BrCa中的DRD2具有將Mφ重新編碼為M1表型的能力。為了探索使Mφ向M1表型分化的關(guān)鍵調(diào)控因子，我們進行了細胞因子陣列分析。結(jié)果表明，TNF-α和兩種誘導(dǎo)M1極化的經(jīng)典細胞因子IFNγ均未增加。而與Mφ共培養(yǎng)后，DRD2***下調(diào)IL-6和IL-10(圖3F)。分析熒光值，進一步證實IL-6和IL-10下調(diào)(圖3F)。因此，DRD2可以將Mφ重新編碼為M1表型，并在crosstalk過程中***下調(diào)IL-6和IL-10。 江蘇標書國家自然科學(xué)基金
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標書申請：提供標書課題設(shè)計、撰寫，標書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗