三、RIT1及時調(diào)節(jié)后期進(jìn)入和染色體分離保真度
MAD2和p31conmet調(diào)節(jié)SAC的持續(xù)時間，反過來，也調(diào)節(jié)有絲分裂的持續(xù)時間。這促使我們研究RIT1是否通過與MAD2和p31conmet的直接關(guān)聯(lián)來影響SAC。通過RNAi或crispr介導(dǎo)的敲除去除RIT1可延長有絲分裂進(jìn)程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯誤的發(fā)生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對有絲分裂的及時進(jìn)展至關(guān)重要，而且RIT1蛋白水平的失調(diào)也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達(dá)的缺失加速了異步生長細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)程，這一效應(yīng)依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過表達(dá)部分覆蓋了藥物誘導(dǎo)的SAC反應(yīng)(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達(dá)以依賴MAD2-和p31come結(jié)合的方式***增加了有絲分裂錯誤的發(fā)生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達(dá)RIT1M90I的細(xì)胞中非整倍體率增加，但在表達(dá)不能結(jié)合MAD2/p31conmet的突變體的細(xì)胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結(jié)果表明，RIT1水平的增加會導(dǎo)致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。 外泌體CD44v6和C1QBP可能是預(yù)測PDAC患者預(yù)后的有前途的生物標(biāo)志物。浙江課題國家自然科學(xué)基金
但tbi暴露后，Ran***1染色分布異常，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)強度高(圖2E）。與對照組相比，腦外傷后Ran***1分布異常的細(xì)胞百分比明顯增高(圖2F）。反復(fù)的創(chuàng)傷損傷會干擾Ran***1在大腦中的定位。TBI大鼠損傷皮質(zhì)(同側(cè)半球)下海馬區(qū)域的腦細(xì)胞表現(xiàn)出錯誤定位和/或聚集(箭頭)或強烈的Ran***1核染色(箭頭)，而假手術(shù)對照組主要是光滑的核周染色(圖2H)。與假對照相比，創(chuàng)傷性腦損傷大鼠的NUP62顯示了明顯的胞質(zhì)(箭頭)和核(箭頭)錯位，假對照顯示了很少的胞質(zhì)(而沒有核)錯位(圖2J)。創(chuàng)傷性腦損傷腦組織中NUP62病理細(xì)胞的百分比明顯高于假手術(shù)對照組(圖2K).上海課題創(chuàng)新服務(wù)可以上傳原始的fast文件。
1）LINC00926被篩選為PGK1負(fù)調(diào)控的lncRNA，與乳腺*臨床結(jié)果相關(guān)
為了探索負(fù)調(diào)控PGK1的lncRNAs，我們根據(jù)圖1A所示的篩選策略對乳腺*的三個數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了分析。我們鑒定了3個lncRNA，LINC00926，LINC01089和LINC00324與PGK1呈負(fù)相關(guān)，且表現(xiàn)出良好的臨床結(jié)果(圖1B-1D)。為了研究鑒定出的lncRNAs是否下調(diào)了PGK1的表達(dá)，我們分別用這三個lncRNAs分別轉(zhuǎn)染了乳腺*細(xì)胞。我們的結(jié)果表明，在mRNA水平不變的情況下，只有LINC00926導(dǎo)致MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中PGK1蛋白水平***下降(圖1E)，表明LINC00926下調(diào)了乳腺*細(xì)胞中PGK1的表達(dá)。此外，與非**組相比，13/14(92.9%)例乳腺*患者的LINC00926表達(dá)降低，12/14(85.7%)例乳腺*患者的PGK1表達(dá)上調(diào)。
8）在AKI期間上調(diào)UCP1減少脂質(zhì)積累，可通過AMPK/ULK1途徑促進(jìn)體內(nèi)自噬
我們發(fā)現(xiàn)UCP1在體外通過***自噬來影響AKI中的細(xì)胞功能，我們探討了這種情況在體內(nèi)是否也會發(fā)生。結(jié)果表明，在動物模型中上調(diào)UCP1也能******AMPK/ULK1/自噬通路(圖8A)，免疫熒光和免疫組化分析進(jìn)一步證實了這一點(圖8B-C)。***，CL316243上調(diào)UCP1后，AMPK/ULK1/自噬通路也被******(圖8D-F)。綜上所述，我們的研究構(gòu)建了AKI中脂質(zhì)積累***的模型，且這種積累的脂質(zhì)與UCP1呈負(fù)相關(guān)。通過上調(diào)UCP1來***AKI中積累的脂質(zhì)，可以***AMPK/ULK1/自噬通路來抑制疾病進(jìn)展(圖9)。
結(jié)論：UCP1直接調(diào)控AKI中的脂質(zhì)積累，***細(xì)胞自噬，從而***抑制疾病進(jìn)展。這為AKI的***提供了新的思路和靶點。 ATM對PTEN的磷酸化導(dǎo)致PTEN在質(zhì)膜上重新分布。
4、外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達(dá)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化
隨后，作者研究了在不同培養(yǎng)條件下TPH-1的表達(dá)譜。首先，和**細(xì)胞共培養(yǎng)抑制了M1相關(guān)基因的表達(dá)，IL-6，TNF-α，和IL-1β，但是增加了M2相關(guān)基因的表達(dá)CD163，Arg-1，IL-10,TGF-β和VEGFA。過表達(dá)KDM6B部分抑制了上述表現(xiàn)改變（圖4A-B）。流式檢測顯示乳腺*細(xì)胞和TPH-1的共培養(yǎng)增加了CD163陽性細(xì)胞數(shù)比例，但是過表達(dá)KDM6N可以抑制這種效果（圖6C）。類似的，過表達(dá)KDM6B抑制了miR-138-5p誘導(dǎo)的M2極化（圖4D-F）。與對照組相比，乳腺*來源的外泌體miR-138-5p降低了M1相關(guān)表型，相反，M2標(biāo)志物增加并伴隨著CD163陽性細(xì)胞數(shù)的增加（圖6G-I）。用從乳腺*細(xì)胞中分離出來的外泌體處理THP-1細(xì)胞導(dǎo)致了M2極化，抑制miR-138-5p的表達(dá)可挽救這種極化（圖4J-L）。總之，這些結(jié)果表明外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達(dá)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化。 進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對基因毒性損傷的反應(yīng)。青海課題細(xì)胞實驗
Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。浙江課題國家自然科學(xué)基金
8、CXCL13/CXCR5/NFκB/p65/miR-934正反饋環(huán)路在CRLM期間介導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞和CRC細(xì)胞之間的相互作用
如Fig.8a所示，WB顯示，與對照組相比，SW480和RKO細(xì)胞中，CXCL13促進(jìn)p65磷酸化，NFκB、MMP2和MMP9的表達(dá)上調(diào)而IκBα的表達(dá)下調(diào)。CXCR5表達(dá)下調(diào)可部分減弱CXCL13的增強作用。此外，PMA處理的THP-1細(xì)胞用miR-934mimics預(yù)處理，然后與SW480細(xì)胞或RKO細(xì)胞與anti-CXCL13抗體共培養(yǎng)，或與shCXCR5共培養(yǎng)。我們發(fā)現(xiàn)CRC細(xì)胞中的anti-CXCL13抗體或CXCR5敲低可以抑制miR-934過表達(dá)誘導(dǎo)的NFκB信號通路的活化（Fig.8b）。值得注意的是，helenalin抑制NFκB/p65信號后，SW480和RKO細(xì)胞中miR-934、MMP2和MMP9的表達(dá)***低于對照組（Fig.8c），這表明miR-934也可能通過正反饋回路被NFκB/p65信號正調(diào)控。 浙江課題國家自然科學(xué)基金
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