TDP-43是一種主要的核DNA/RNA結合蛋白，穿梭于細胞核和細胞質之間。TDP-43調控RNA處理，如基因轉錄、mRNA剪接、mRNA穩(wěn)定性、mRNA運輸和定位，病理突變破壞RNA代謝。在許多神經退行性疾病中，TDP-43偏離細胞核并聚集在細胞質中。細胞質TDP-43聚集體被認為是神經退行性變的重要機制，因為這些聚集體被異常磷酸化和泛素化。有多種機制被提出來解釋神經退行性疾病中TDP-43異常的細胞質積累和TDP-43病理的進行性擴散。
TDP-43包含一個類似朊病毒的低復雜度域，并具有一個本質上的無序區(qū)域(IDR)，使TDP-43易于聚集。RNA結合蛋白(rbp)中的IDRs被認為在核糖體蛋白顆粒(如p -小體、應激顆粒和神經元顆粒)的組裝中起關鍵作用，提示rbp的突變或異常聚集可能會破壞這些顆粒的動力學。此外，rbp中的IDRs如TDP-43經歷了液-液相分離，TDP-43的病理突變改變了液-液相分離，這可能有助于疾病進程。因此，rbp如TDP-43的改變可能是神經退行性變的重要指標。然而，盡管這些機制可能解釋了TDP-43病理突變在神經退行性疾病中的作用，但TDP-43如何在無突變的情況下聚集形成并導致神經退行性疾病，如反復創(chuàng)傷患者的大腦，目前尚不清楚。 與未接受FMT***的受傷小鼠相比接受FMT***的小鼠表現(xiàn)出相對更大的運動恢復。武漢TRF標書
CircACTN4促進體內異種移植**的發(fā)生和轉移
為了評估circACTN4在體內的致*作用，通過皮下注射和尾靜脈注射在裸鼠中建立人BC細胞**模型。用過表達 circACTN4 慢病毒或 circACTN4 shRNA 慢病毒及其對照***的 MCF-7 細胞接種雌性裸鼠。結果表明，circACTN4過表達組異種移植**的體積和重量明顯大于對照組，而circACTN4敲低顯著抑制了**生長。與對照組相比，circACTN4的上調明顯增加了轉移性肺結節(jié)的數量，而circACTN4沉默顯著抑制了自發(fā)性肺轉移，侵襲性**細胞較少。此外，circACTN4 的過表達可以顯著促進**血管生成，而 circACTN4 敲低顯著降低**微血管密度。WB結果顯示，與對照組相比，過表達或沉默circACTN4組的異種移植**組織中MYC的蛋白質水平分別顯著增加或減少。 浙江rip標書FMT處理可能導致SCI后胃腸道消化活力變快。
單核細胞/巨噬細胞來源的外泌體miR-101-3p和miR-423-5p可轉移到MB細胞中
我們發(fā)現(xiàn)miR-101-3p和miR-423-5p在從MB患者血漿分離的PBMC和外泌體中均上調，而這兩種miRNA在**組織中的表達低于相鄰正常腦組織。這表明含有這兩種miRNA的外泌體來源于免疫細胞，而不是**細胞。為了確定含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體的來源，我們從THP-1單核細胞培養(yǎng)上清液中分離外泌體，并檢測miR-101-3p和miR-423-5p的表達。我們發(fā)現(xiàn)miR-101-3p和miR-423-5p在分離的外泌體中的表達高于THP-1細胞。然后，我們用來源于轉染miR-101-3p/miR-423-5p模擬物或miR-NC的THP-1細胞的外體培養(yǎng)Daoy細胞，并且觀察到這些外泌體也可以轉移到Daoy細胞中，培養(yǎng)后miR-101-3p和miR-423-5p的表達水平更高。
7）USP35敲除增強肺*細胞的化療敏感性
鑒于USP35在肺*細胞中的高表達及其在調節(jié)鐵死亡中的作用，我們**終評估了USP35沉默是否能使肺*細胞對化療藥物敏感。如圖9A-C所示，USP35缺乏的H460和H1299細胞在體外對DDP和PTX的毒性作用更敏感，細胞活力和定殖的降低證明了這一點。相應地，接種USP35缺陷*細胞的荷瘤小鼠經DDP或PTX***后**體積和重量均減少(圖9D，E)。酪氨酸激酶抑制劑(TKI)已成為常規(guī)化療的替代藥物，并為肺*患者提供了***的生存益處。 第4周測定FITC標記的葡聚糖(4kd)和血液中FITC水平。
4）SsD通過直接抑制FTOm6A去甲基化活性來誘導m6A修飾
為了檢測m6A在RNA上的變化，我們在SsD處理的白血病細胞中進行了m6A點印跡實驗。如圖4A所示，SsD***增加了m6A在轉錄組中的豐度。此外，HPLC-MS/MS定量證實了SsD處理的NB4和Kas-1細胞mRNA中細胞m6A的增加(圖4B)。接下來，我們檢測了FTO的兩個直接靶點MYC和RARA在SsD處理的細胞中的表達。SsD在mRNA和蛋白水平***下調了NB4和Kas-1細胞的MYC，而上調了RARA(圖4C-D)。有趣的是，SsD依賴的MYC和RARA的減少是由于FTO過表達細胞中mRNA和蛋白穩(wěn)定性的降低(圖4E-4H)。綜上所述，這些結果證明了FTO及其下游靶點(如MYC,RARA)是FTO過表達白血病細胞中SsD的主要效應因子。 FMT處理可以改善脊髓損傷小鼠的運動恢復。深圳chip標書
脊髓損傷（Spinal cord injury, SCI）患者表現(xiàn)出腸道菌群紊亂而腸道失調加重SCI模型中的神經損傷。武漢TRF標書
接下來，通過體外復制、配對子細胞實驗和體內競爭移植研究了HoxBlinc過表達對造血干細胞自我更新和再生能力的影響。在HoxBlincTg LSK細胞中，連續(xù)4輪的復制電位均***高于WT細胞(圖3d)。使用WT和HoxBlincTg原始CD34?LSK細胞的配對子細胞檢測顯示，具有對稱自我更新能力的HoxBlincTg CD34?LSK細胞比例更高，而進行對稱分化或不對稱自我更新的細胞比WT減少（圖3e）。競爭移植實驗表明，HoxBlincTg BM細胞移植后，受體外周血中供體細胞(CD45.2+)嵌合率穩(wěn)定上升，移植7個月后達到~80%，而WT BM細胞移植后小鼠外周血中CD45.2+細胞群保持在~50%（圖3f）。有趣的是，接受HoxBlincTg BM細胞的小鼠在移植后2.5-7個月死亡率更高(圖3g)?？傮w而言，HoxBlinc基因在小鼠中的表達增強了HSC的自我更新，并擴大了骨髓形成，導致AML樣疾病，與NPM1c/+小鼠中看到的表型相似。
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗