二、RIT1與MAD2和p31conmet的相互作用由CDK1磷酸化調(diào)控
在間期，RIT1 s c端尾部介導(dǎo)質(zhì)膜(PM)結(jié)合然而，在分析有絲分裂細(xì)胞時(shí)，我們觀察到RIT1在細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂和進(jìn)入中期并在后期快速易位到PM時(shí)的彌漫性胞質(zhì)分布(圖2A和2B)。同樣，在有絲分裂細(xì)胞裂解物中檢測(cè)到內(nèi)源性RIT1的主要胞質(zhì)分布(圖2C)。(S209D/E)磷酸化，而非(S209A)缺磷，突變破壞了RIT1-MAD2/p31conmet結(jié)合(圖2D)。RIT1磷酸化在有絲分裂過程中**為豐富(圖2E)。抑制CDK1***降低了重組RIT1的磷酸化(圖2F)。免疫印跡檢測(cè)和質(zhì)譜證實(shí)CDK1/CyclinB1磷酸化RIT1 S209，(圖2G和2H)。 細(xì)菌可能是導(dǎo)致小鼠腸道尿酸降低的主要原因。武漢陽性染色科研
6）FPN蛋白在肺*細(xì)胞中的穩(wěn)定性需要USP35
USP35屬于DUBs家族，在控制各種蛋白質(zhì)的Ub依賴性降解中起關(guān)鍵作用。此外，F(xiàn)PN泛素化和隨后的內(nèi)吞作用導(dǎo)致鐵超載和鐵死亡。因此，我們研究了USP35是否通過影響其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性來調(diào)節(jié)FPN表達(dá)。如圖8A所示，USP35敲除增加，而USP35過表達(dá)降低泛素化FPN水平。用MG132蛋白酶體抑制劑***后，shUSP35***細(xì)胞的全部或膜裂解物中FPN水平的降低被阻止(圖8B)。隨后，我們檢查了USP35是否是FPN的直接結(jié)合伙伴。IP分析的數(shù)據(jù)揭示了內(nèi)源性USP35和FPN之間的聯(lián)系(圖8C)?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明USP35可以直接與FPN相互作用，并作為deubiquitinase發(fā)揮作用，以保持其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。 MEP潛伏期科研地區(qū)科學(xué)基金m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。
5）DRD2通過阻斷TAK1的磷酸化來限制NF-κB信號(hào)的***NF-κB信號(hào)的***
對(duì)于觸發(fā)炎癥小體組裝和隨后的焦亡是必不可少的。IF染色顯示DRD2幾乎阻斷了p-p65的核易位(圖5A)，但這種抑制被Mφ所抵消(圖5B)。核和細(xì)胞質(zhì)提取物也顯示DRD2抑制了p-p65的核易位(圖5C)。如WB結(jié)果所示，在LPS刺激下，DRD2抑制IKKα/β、IκBα和p65的磷酸化(圖5D)。異位DRD2表達(dá)也***抑制了Mφ誘導(dǎo)的p65磷酸化和IKKα/β的上游***(圖5E)。WB結(jié)果顯示DRD2下調(diào)NF-κB的下游靶點(diǎn)ICAM-1。然而，這種下調(diào)被Mφ所抵消(圖5E)。抑制IKKα/β磷酸化提示DRD2負(fù)向介導(dǎo)IKK復(fù)合物上游。TAK1在催化IKKα和IKKβ中起關(guān)鍵作用。TAK1的磷酸化被異位DRD2表達(dá)***抑制(圖5D-E)。因此，DRD2通過阻斷上游激酶TAK1來抑制NF-κB信號(hào)通路的***。
同時(shí)，circNDUFB2顯著增加了p-P65，p-IRF3，p-STAT1和p-STAT2。circNDUFB2還促進(jìn)了IRF3和P65進(jìn)入核內(nèi)的易位。免疫熒光分析證實(shí)circNDUFB2促進(jìn)了IRF3的磷酸化，并隨后觸發(fā)其轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。更重要的是，RIG-1的敲除顯著消除了這些基因的蛋白質(zhì)水平或磷酸化水平的上調(diào)以及由circNDUFB2誘導(dǎo)的A549細(xì)胞中IRF3和P65的核易位。ELISAs測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子水平，發(fā)現(xiàn)RIG-1敲低顯著消除了對(duì)CXCL10，CXCL11，CCL5和IFNβ的誘導(dǎo)。上述結(jié)果表明RIG-1在介導(dǎo)NSCLC細(xì)胞中circNDUFB2的免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用，而circNDUFB2引發(fā)的免疫應(yīng)答不依賴于circNDUFB2中m6A的修飾。血清或尿液中尿酸濃度的升高與痛風(fēng)腎臟和血管疾病密切相關(guān)。
轉(zhuǎn)錄組學(xué) (RNA-Seq) 模塊
RNA-seq 模塊對(duì)與衰老相關(guān)的全基因組轉(zhuǎn)錄組變化進(jìn)行編目。RNA-seq 模塊中收集的數(shù)據(jù)集來自與衰老研究相關(guān)的已發(fā)表文章。該模塊收集在特定基因干預(yù)（過表達(dá)、敲除等）時(shí)觀察到的轉(zhuǎn)錄組變化，該模塊還收集特定組織和***在生理和病理衰老過程中基因表達(dá)譜的變化。RNA-seq 模塊目前包含 > 18 000 個(gè)可能與衰老有關(guān)的差異表達(dá)基因 (DEG)。在 RNA-seq 模塊中，可以通過基因名稱輕松搜索 DEG，并且每個(gè) DEG 條目都包含潛在的實(shí)驗(yàn)條件和基因表達(dá)的倍數(shù)變化及其發(fā)布的來源。可以下載每篇文章中的所有搜索結(jié)果和相應(yīng)的DEG數(shù)據(jù)庫。 上海英拜生物有經(jīng)驗(yàn)豐富的科研團(tuán)隊(duì)。上海ampk信號(hào)通路芯片科研
評(píng)估了成對(duì)*組織和鄰近組織樣本中**重要的m6A調(diào)節(jié)因子（METTL3、METTL14和WTAP）的表達(dá)。武漢陽性染色科研
3）USP35過表達(dá)阻斷erastin/RSL3介導(dǎo)的**抑制作用細(xì)胞也用慢病毒載體***以在體外過表達(dá)USP35，并通過PCR驗(yàn)證其效率(圖3A)。然而，在基礎(chǔ)條件下，USP35過表達(dá)不影響H460和H1299細(xì)胞的細(xì)胞死亡和集落形成(圖3B，C)。裸鼠的**體積和重量也不受USP35過表達(dá)的影響(圖3D，E)。我們進(jìn)一步研究了USP35操作是否對(duì)鐵刺激引起的細(xì)胞死亡有影響。不出所料，erastin或RSL3處理***降低了H460和H1299細(xì)胞的細(xì)胞活力或集落形成，而這是通過USP35過表達(dá)來阻止的(圖3F，G)。相應(yīng)地，接種CTRL肺*細(xì)胞的裸鼠在erastin或RSL3***后**體積和重量減少；然而，這些**抑制作用被USP35過表達(dá)阻斷(圖3H，I)?？偟膩碚f，USP35過表達(dá)阻斷了erastin/RSL33介導(dǎo)的**抑制作用。武漢陽性染色科研
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
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